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琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物

一.原理 DNA片断的分离与回收是基因工程操作中的一项重要技术,例如可收集特定酶切片断用于克隆或制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是纯度和回收率:前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应;后者不理想时往往会大大增加前期的工作量。 本实验采用的是V-GENE公司的DNA凝胶回收试剂盒,其原理是:在凝胶融化液(Buffer DE-A)中凝胶块被迅速融化并释放出DNA。加入高离液序列溶液(Buffer DE-B)后DNA片断被选择性吸附到silica膜上。经Buffer W1、Buffer W2洗涤去除残留在silica膜上的杂质和高浓度盐离子后,吸附到 silica膜上的DNA片断经微量水或Eluent洗脱下来,即可用于各种分子生物学实验。 二.材料与方法 1 材料 PCR产物(未经纯化) 2 仪器、用具 电泳仪、电泳槽、凝胶样品梳、微......阅读全文

PCR产物的回收纯化

PCR产物的回收纯化的目的是:高质量DNA;除去蛋白(如酶等),RNA,无机盐(NaCl超过150 mM对T4连接酶有抑制作用),小于100 bp的短片段(如引物DNA),有机小分子(如dNTP、Agrose、EB、甘油、矿物油)。

酶切后产物可以做pcr产物回收么

如果没有其他杂带就可以。单一条带的PCR产物,如果酶切后也只有一条带,就可以用产物回收试剂盒回收。但如果酶切后有杂带或多条带,就只能做胶回收。

直接从PCR产物回收纯化DNA

1)直接加90-100μl纯化缓冲液于1.5ml离心管,再加入30~300μl PCR反应物,Vortex混合;2)加入1ml树脂轻轻Vortex 3次,每次间隔1分钟;3)将取出拉杆的注射器筒(3ml)装在纯化柱上,加入上述DNA与树脂混合液,然后装上拉杆,慢慢将混合液推进纯化柱内;4)卸下注射器

琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物

一.原理 DNA片断的分离与回收是基因工程操作中的一项重要技术,例如可收集特定酶切片断用于克隆或制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是纯度和回收率:前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应;后者不理想时往往会大大增加前期的工作量。 本实验采

pcr产物的纯化与回收实验报告

  PCR产物的直接纯化:  一、原理  PCR产物一般都含有过量的引物、 Taq DNA酶及dNTP,这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程,因此有必要除去。目前核酸纯化的方法有很多,商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷。本实验中, Buffer PCR

PCR产物及凝胶回收试剂盒--MagExtractor®-PCR & Gel Clean u

  产品索引   5872   中文名称:   PCR产物及凝胶回收试剂盒   英文名称:   MagExtractor®-PCR & Gel Clean up-   产品编号:   NPK -600   产品类别:   分子生物学   生产厂家:   TOYOBO   产

PCR产物电泳做胶回收不也得到纯化的目的

PCR产物纯化试剂盒去除的是PCR反应体系中的离子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段。这只适合于几乎没有非特异性条带的PCR产物的收集。如果你的PCR产物具有非特异性条带,那么一定需要使用胶回收试剂盒。

若pcr产物电泳后不能及时回收,胶应怎样处理

把目的条带的位置的胶挖下来,放在一个离心管里,置于4度冰箱,可过夜,第二天再来回收

PCR基因扩增及扩增产物的回收实验原理及过程

实验目的 为了获得大量的AKP基因,我们需要将目的基因通过PCR扩增基因剂量,方便下一步实验作基因重组。 我们需要注意PCR产物的准确性和产率。特别注意引物、复性温度、TaqE对准确性的影响和延伸时间(1000bp/min)、Mg2+浓度、循环数(小于等于30)对产率的影响。

PCR产物克隆

克隆方法:1. 平端连接   通常情况下,PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接,但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性,能在两6条DNA链的3''''末端加上一个多余的碱基,使合成的PCR产物成为3'''&#