原位杂交组织化学常用试剂及处理2
九、原位杂交信号显示 目前应用原位杂交方法中，信号的显示主要有放射自显影，酶底物及免疫金银等方法，在此归纳有关的主要试剂。 1．A-B显影液 称取上述试剂，按配方分别溶于50ml ddH2O中，于显影前，在室温将两者（A液及B液）按1：1混合，稍加摇动促进混合，即可将贴有切片标本的切片放入显影液，于室温避光（可暗室）反应5～15min。显影时间和温度相关，需自己根据情况摸索。终止反应只需将显影液倒出，自来水冲洗即可。倒出的AB显影液可暂时不扔，光镜下观察，若明显显影不够，还可重新或继续显影。AB显影液要求临用前配制，在显影时才将AB二液混合。否则，A液过久会产生黄色沉淀，增加背景。 AB液用于免疫金银法中，使金标记颗粒信号放大，形成棕黑色沉淀。 2．DAB-H2O显色液 配制方法见附录一。 该液用于标本被标记上辣根过氧化物酶（HRP）的方法。产物为棕黄色。 3．NBT-BCIP显色液 配制方法，详见附录一。 ......阅读全文
冰冻组织固定和蔗糖浸制实验
实验方法原理 实验材料 冰冻组织试剂、试剂盒 PBSPFA蔗糖实验步骤 1. 于4℃，在2%PFA固定液（做免疫组织化学时）或4%PFA固定液（做原位杂交时） 中，固定小的组织样品或分离的胚胎（如第7、第8天的小鼠胚胎）30 min。2. 在PBS中清洗组织样品2次。3. 在30%蔗糖中浸制样品，直
冰冻组织固定和蔗糖浸制实验
实验材料冰冻组织试剂、试剂盒PBSPFA蔗糖实验步骤1. 于4℃，在2%PFA固定液（做免疫组织化学时）或4%PFA固定液（做原位杂交时） 中，固定小的组织样品或分离的胚胎（如第7、第8天的小鼠胚胎）30 min。2. 在PBS中清洗组织样品2次。3. 在30%蔗糖中浸制样品，直至组织沉下（1~3
荧光原位杂交技术（FISH）在疾病分型诊断中的应用
生命科学的发展，生物技术的进步使我们对疾病本质的认识不断地深入，也使我们拥有更多新的治疗方法和药物应对疾病的威胁。如何准确有效地利用这些新的治疗方法和药物治愈疾病是我们迫切需要研究的内容。如何对疾病进行正确的分型和诊断却是上述工作的基础。只有全面地把握病情，并在此基础上进行准确的判断和分析，才能为
常用实验动物介绍2
(2)品系特征：免疫：CBA/N小鼠对Ｔ细胞非依赖性2型抗原(TI-2抗原：聚蔗糖ficoll、右旋糖酐dextran、肺炎球菌多糖体等)不能引起抗体产生应答。而对Ｔ细胞非依赖性Ｉ型抗原(TI-I抗原：布氏菌脂多糖等)呈正常反应。CBA/N小鼠血中IgM及IgG3会计师少，而且对Ｔ细胞依赖性抗原的
常用溶液的配制2
实验概要了解常用溶液的配制方法。实验步骤1. 10 mmol/L MgSO4：称取 0.246 g MgSO4，加入 80 mL 双蒸水充分溶解，定容至 100 mL，高压灭菌 15 min，室温保存。2. 0.9% NaCl：称取 0.9 g NaCl，加入 80 mL 双蒸水充分溶解，定容至 1
原位杂交实验要求及步骤
原位杂交组织（或细胞）化学 （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH） 简称原位杂交（In Situ Hybridization），属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同
ELISA的试剂2
3.1.3 包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例
实验室仪器如何布置及注意问题
组织化学实验室 30 M2（放免疫组织化学染色用仪器和相关设备、震荡器、微波炉、恒温恒湿孵育箱、普通冰箱、生物显微镜等）；应装够插座，地面应设置若干个地漏，装通风橱。 分子理学实验室 30 M2（放原位杂交用仪器和相关设备、PCR仪、电泳仪、电泳槽、紫外反射透射仪、PH酸度计、磁性恒温搅拌器、
常用试剂和培养基
Sterile water bottles200 ml, 500 ml, or 950 ml water. Autoclave.0.05 M CaCl2 (per 200 ml)CaCl2·2 H2O 1.5 g Add 198 ml water.Autoclave.0.5 M CaCl2 (p
常用试剂的使用和保存
一般的酸、碱、盐溶液配制所使用的水,其纯度适中,电阻率在1MΩ• cm左右,酸、碱、盐的纯度取分析纯即可,液体试剂的量取用量筒,固体试剂的 称取用十分之一或百分之一天平。配制好的溶液要放在试剂橱中,防止日光照射,AgNO3溶液要放在棕色试剂瓶中贮存,碱溶液放在塑料制品的瓶中,剧毒试剂要放在试剂橱中,
蛋白印迹(Western－Blot)常用试剂
蛋白印迹(Western Blot)常用试剂>>>蛋白抽提货号品名规格价格备注WB003组织蛋白抽提试剂100ml300全蛋白抽提WB004RIPA裂解液100ml100全蛋白抽提WB005细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂100次680WB006膜蛋白和胞质蛋白抽提试剂100次680WB007改良We
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂 1、4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3） 2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 3、Bouin's液及改良Bouin’s液 4、Zamboni’s（Stefanini‘s）液 5、PLP液 6、Karnovsky's液（pH7.3） 7、0
常用HE染色试剂配制方法
苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。 一、苏木素 （1） Harris苏木素液 配方： labdd.com 苏木精1 g ；无水乙醇10 ml；蒸馏水200 ml；钾明矾20g；HgO 0.5 g
常用的离子对试剂
常用离子对试剂1-戊烷磺酸钠 CAS:22767-49-31-己烷磺酸钠 CAS:2832-45-31-庚烷磺酸钠 CAS:22767-50-61-辛烷磺酸钠 CAS:5324-84-51-癸烷磺酸钠 CAS:13419-61-9
ELISA试剂盒常用知识
ELISA试剂盒常用知识安全性： 避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2. 实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 试剂盒性能：灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2
常用HE染色试剂配制方法
苏木精—伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining），简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。 一、苏木素 （1）Harris苏木素液 配方：labdd.com 苏木精1g；无水乙醇10ml；蒸馏水200ml；钾明矾20g；HgO0.5g 先将苏木精溶于无水乙醇中，备
常用的氘代试剂介绍
中文名称 英文名称 CAS氯仿-d Chloroform-d (D,99.8%) + TMS (0.03%) 865-49-6重水 Deuterium Oxide (D,99.9%) 7789-20-0二甲亚砜-d6 Dimethylsulfoxide-d6 (D,99.8%) + TMS (0.0
预处理常用的方法
一、混凝－絮凝混凝是指向水中投加一定剂量的化学药剂，这些化学药剂在水中发生水解，和水中的胶体粒子互相碰撞，发生电性中和，产生吸附、架桥和网捕作用，从而形成大的絮体颗粒，并从水中沉降，起到了降低颗粒悬浮物和胶体的作用。二、介质过滤介质过滤是指以石英砂或无烟煤等为介质，使水在重力或压力下通过由这些介质构
常用样品的移液技巧及常见故障处理
下文是针对不同样品的移液技巧。1、移取挥发性样品要注意两点：一，在移液前务必润洗两次;二，在吸液完成后要尽快排液。2、移取高粘度样品采用反向移液的模式：在吸液时把吸/排液按钮按到第二档(第二停止点)，而在排液时把按钮按到*档(*停止点)。另外，在吸液和排液时均需要3-5秒的停留时间。3、移取高密度/
原位杂交实验要求及步骤
原位杂交可以用于（1）固相分子杂交；（2）标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列。实验方法原理根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交，杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反
原位杂交实验要求及步骤
实验材料 新鲜组织或细胞样品试剂、试剂盒 PBSPB甘氨酸多聚甲醛Denhardt溶液抗体稀释液预杂交液显色液无水乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机尼龙膜点样器
原位杂交实验要求及步骤
原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不
原位杂交实验要求及步骤
原位杂交组织（或细胞）化学 （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH） 简称原位杂交（In Situ Hybridization），属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不
荧光原位杂交原理及步骤
荧光原位杂交/FISH技术服务 荧光原位杂交FISH的原理 ：荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DN
原位杂交实验要求及步骤
实验方法原理 根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交，杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法一般用半抗原标记探针，最后
核酸探针标记及原位杂交
一、核酸探针标记 核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。 核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大
核酸探针标记及原位杂交
一、核酸探针标记核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否
简述基因转染技术的表达和检测
在筛选出转化子后还需要鉴定转导细胞中外源基因的表达状况。其中包括对目的基因和标记基因的鉴定。常用方法有原位杂交、Northern杂交、免疫组织化学染色等，原位及Northern杂交是检测外源基因转录出的mRNA,后者则是检测外源基因翻译出的蛋白质。
常用免疫组织化学方法的原理免疫荧光方法
是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高