PlasmidorCosmidDNAMiniprep
This protocol can be used to isolate sufficient amount DNA from 1.5ml o/n culture or 3ml 6hr culture to do several enzyme digestions.Spin 1.5ml o/n culture at 1,2000rpm for 30 Sec. Discard the supernatant.Resuspend the pellet by vertex in 100ul QP buffer, R.T. 5min.Mix 200ul 10N NaOH and 500ul 20% SDS add water to final volume 10ml.Add 200ul the solution above to the suspension (#2), invert 5 times, R.T. 5min.Add 150......阅读全文
分支DNA的定义
中文名称分支DNA英文名称branched DNA定 义特指一种人工合成的、由于在结构上整合了带有被保护羟基的核苷衍生物而形成的分支状的寡脱氧核糖核酸。基于分支DNA信号放大的检测法可用于对感染病毒的个体进行病毒量试验,以定量检测RNA或DNA的水平。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸
开环DNA的定义
如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,形成松弛型的环状分子,称开环DNA(Open circular DNA, 简称 ocDNA)。
闭环DNA的定义
闭环DNA(closed circular DNA)没有断口的双链环状DNA,亦称为超螺旋DNA (DNA supercoil)。
端粒DNA主要组成
端粒DNA是由简单的DNA高度重复序列组成的,染色体末端沿着5'到3' 方向的链富含 GT。在酵母和人体中,端粒序列分别为C1-3A/TG1-3和TTAGGG/CCCTAA,并有许多蛋白与端粒DNA结合。端粒DNA主要功能有:第一,保护染色体不被核酸酶降解;第二,防止染色体相互融合;
CT扫描损伤DNA?
CT扫描,即电子计算机断层扫描,通过横断面X射线对多种疾病进行诊断,包括胸痛、骨折和消化系统问题等等。 《美国心脏病学会杂志》一篇学术论文报道:CT扫描存在副作用——损伤DNA! 斯坦福大学的研究人员以67例需要接受CT扫描的病患作为试验对象:患者接受全身且最低辐射量扫描后,研究人员检测她们
ELECTROPHORESIS-OF-DNA-IN-POLYACRYLAMIDE-GELS
ELECTROPHORESIS OF DNA IN POLYACRYLAMIDE GELSGel SizesSmall: 165 x 130 mmMedium: 165 x 200 mmLarge: 165 x 260 mm5% Anal
什么是自在DNA?
中文名称自在DNA英文名称selfish DNA定 义除能复制自身外,不具有其他功能的DNA片段。泛指间隔DNA及卫星DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
dna提取实验步骤
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。分别用66%,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品。此法提取的DNA中
DNA测序技术综述
1977年,Sanger团队完成人类历史上第一个基因组序列噬菌体X174测序,并在3年后,成为“两度”获得诺贝尔化学奖的人(前一次是1958年)。Sanger测序技术诞生,让DNA片段的测序成为现实,此后这一技术独领风骚20多年。再后来的20年里,二代测序走向成熟、三代测序崭露头角,DNA测序技术以
DNA酶切反应
一、 DNA 酶切反应1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在管
DNA复制的特点
半保留复制:DNA在复制时,以亲代DNA的每一个单链作模板,合成完全相同的两个双链子代DNA,每个子代DNA中都含有一个亲代DNA链,这种现象称为DNA的半保留复制。DNA以半保留方式进行复制,是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。有一定的复制起始点:DN
几种DNA定量方法
Quantitation of DNAFluorescent quantitationWear gloves and goggles protecting from EtBr and UV lightWith an EDP (dilute mode) pick up 9 µl TE and 1 µl
DNA的转化实验
体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术, 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中,DNA可在生物体系中大量扩增,繁殖, 保存以及表达目的基因的产物,这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术,所获得的,不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研,医药生产和生物
什么是DNA芯片?
DNA芯片又叫做基因芯片(gene chip)或基因微阵列(microarray),寡核酸芯片,或DNA微阵列,它是通过微阵列技术将高密度DNA片段阵列以一定的排列方式使其附着在玻璃、尼龙等材料上面。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物,所以称为DNA芯片。
胸腺DNA的制备
实验概要本实验介绍了浓盐法小牛胸腺DNA制备的原理及操作步骤。实验原理DNA在生物体内是以与蛋白质形成复合物的形式存在的,因此提取出脱氧核糖核酸蛋白复合物(DNP)后,必须将其中的蛋白质除去。小牛胸腺,鱼类精子和植物种子的胚等含有丰富的DNA,可作为提取DNA的良好材料。动物和植物组织的脱氧核糖核蛋
什么是DNA重排?
DNA重排(DNA rearrangement)这种调节主要是根据DNA片段在基因组中位置的变化,即从一个位置变换到另一个位置,从而改变基因的活性。最熟知的两个例子是酵母交配型的控制和抗体基因的重排。
DNA重组技术2
感受态细胞的制备(一)制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的,所制备的大肠杆菌DHl、DH5和MM249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋DNA以≥5x108转化菌落的频率进行转化,其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10-1/5。
细菌DNA提取方案
细菌DNA提取方案:革兰氏阴性菌,如E.coli,一般有三种可以选择的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板,连续画线,37摄氏度培养18-24小时。2、刮取1~2接种环菌苔加入150微升三蒸水中,混匀,100摄氏度煮沸10分钟。3、12000转/分钟 离心10分钟
什么是DNA变性?
DNA变性,是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂,碱基间的堆积力遭到破坏,双链变成单链,使核酸的天然构象和性质发生改变,但不涉及其一级结构的改变。凡能破坏双螺旋稳定的因素(如加热、极端的pH、有机试剂如甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等)均可引起核酸分子变性。变性后的DNA常发生一些理化及生物学性质的改变:
DNA提取的原理
原理:1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤:1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。5min2.溶解DNA:3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢4.过滤:取黏稠物5.再溶解:顺时
沉淀DNA的实验
乙醇沉淀法 实验方法原理 DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体
细菌DNA=未来光盘?
英国《自然》杂志11日发表了一项生物技术重要成果:科学家利用CRISPR手段,成功将图片和视频短片编码进了细菌的DNA中,通过测序DNA再重新提取出来后仍相当准确。其证明了活细胞作为一种可靠媒介,存储一定数量的数据完全有可能。 CRISPR被称为“生物科学领域的游戏规则改变者”。最近的一些研
大型海豚DNA研究
弗林德斯大学的综合研究呼吁更多的保护和政策努力来保存适应性DNA多样性,并协助这些海豚群体之间的连接。这将支持长期的基因流动和适应不断变化的栖息地——包括受气候变化和人类企业影响的海洋条件。弗林德斯大学的研究人员安Andrea Barceló——该研究的第一作者,刚刚发表在BMC Ecology a
质粒DNA提取技术
实验概要通过本实验,学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术。实验原理质粒是基因工程中常用的载体之一。质粒是染色体外小型双链环状的DNA,大小在1~200kb之间。碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们的。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线
DNA定点突变实验
DNA定点突变可用于:(1)研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性;(2)改造启动子或者DNA作用元件;(3)提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构,以及药物研发、基因治疗等等方面。实验方法原理定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以
卫星DNA的用途
体细胞克隆卫星DNA可以把某一个体的遗传物质完整地传递下去,因而它对于保存并传播优良个体和珍稀濒危动物的基因组具有重大意义。确定异种重构胚的核是否来自于供体的核就显得异常关键。中国科学院昆明动物研究所丁波、张亚平等人建立了一种从早期囊胚中提取DNA以进行核内和核外DNA分析的方法。用这种方法从异种克
DNA电泳(agarose胶)
DNA电泳可用于:(1)分离不同大小的DNA片段;(2)鉴定目的DNA片段;(3)纯化和回收DNA片段。实验方法原理利用DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时具有的电荷效应和分子筛效应。电荷效应是指DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电,在电场中向正极移动,且相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,能以
DNA裂解分析实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 溶解缓冲液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加样缓冲液仪器、耗材 Eppendorf 管移液管琼脂糖凝胶实验步骤 1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中,4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟,弃上清。2. 加入 20
DNA-序列分析技术
实验方法原理 本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDeoy TM Terminator
DNA杂交的基础
具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键等,形成稳定的双链区。在进行DNA分子杂交前,先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来,通过超声或者其他物理方法,将DNA剪切成片段,再通过加热或提高pH的方法,将双链DNA分子分离成为单链,这个过程称为变性。然后,将两种生物的DNA单链