使用分光光度法检测DNA纯度和计算DNA含量

DNA在260nm处吸收强烈,OD260值为1的溶液相当于大约50μg/mL双链DNA,而蛋白质的特征吸收在280nm处,测定DNA提取物中260nm处和280nm处的吸收值OD260和OD280,可大致判断所提取的DNA的纯度。OD260/OD280的值在1.7~1.9之间,说明提纯度较好,低于1.7,说明提取的DNA中残留有较多的蛋白质,可用酚、氯仿继续抽提;若大于2.0,说明有RNA污染或DNA链断裂。提取的DNA量可用下式计算:P=cV式中,c为DNA浓度,单位为μg/mL;V为提取的DNA溶液的体积,单位为mL。如提取的DNA样品为2mL,进行OD260值测定的检测样品为0.1mL+0.9mL TE缓冲液=1mL,DNA的稀释倍数=1mL/0.1mL=10倍,OD260和OD280值分别为0.63和0.35,则:纯度= OD260/OD280=1.8。样品中DNA浓度c=50μg/mL * OD260 * 稀......阅读全文

DNA重组(DNA-recombination)技术:DNA重组与鉴定3

当多克隆位点有外源DNA片段插入时,破坏此酶的N端阅读框架,产生无α互补功能的N端片段,因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色,见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短,不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框,有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4

DNA重组(DNA-recombination)技术:DNA重组的载体1

载体(vector)是携带靶DNA(目的DNA)片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型,亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下

DNA重组(DNA-recombination)技术:DNA重组与鉴定2

(1)CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子(如Ca2+、Mg2+等)低渗溶液中时,细菌细胞膨胀成球形,处于感受态;此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面,在丰富培养基中生长数小时后,球状细胞恢复原

PCR根据DNA扩增的目的和检测标准分类

  根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类。  1. 普通PCR仪  一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪称作传统PCR仪,也叫普通PCR仪。如果要做不同的退火温度需要多次运行。主要是用于简单的、对目的基因退

东芝最新电化学DNA芯片可在低浓度下检测DNA

  日本东芝公司(Toshiba)日前宣布研制成功高灵敏度的电化学DNA芯片,这种芯片能够在非常低的浓度下检测DNA。  这款新型芯片集成了目前广泛使用的半导体电路技术之一的CMOS电路及传感器,是对东芝先进DNA芯片系列产品及相关技术的最新补,可迅速投入的应用包括抗癌药物的易感性分析及用于疾病起因

DNA疫苗的概念和作用

DNA疫苗(DNA vaccine),又称“裸”DNA疫苗(naked DNA vaccine)、基因疫苗(genetic vaccine),亦有核酸疫苗(nucleic acid immunizaiton)、多核苷酸疫苗(poly nucleotide vaccine)等相关名称,是近年来基因治疗

真菌DNA和RNA提取方法

真菌DNA和RNA提取方法一、真菌DNA的提取(方法一)实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(p

DNA突变的概念和原因

突变是由于DNA复制(特别是减数分裂)出错或DNA损伤(如暴露于辐射或致癌物引起)后错误的修复造成的。

质粒DNA的制备和纯化

实验概要质粒(plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1~200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型:

重复DNA的定义和结构

中文名称重复DNA英文名称repetitive DNA定  义真核生物染色体基因组中含有不同拷贝数的核苷酸序列。这些序列一般不编码多肽,在基因组内可成簇排布,也可散布于基因组。按序列的重复程度和特点可分为低度重复DNA、中度重复DNA和高度重复DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与

“无用”DNA的结构和功能

中文名称“无用”DNA英文名称junk DNA定  义基因组中不负责编码蛋白质和RNA,因而被认为不具有任何功能的DNA。也被认为是一种分子寄生物,是经过许多世代而插播在基因组中的序列。存在于真核基因组中的大量重复序列即属于其列。但近年来的研究已发现越来越多的“无用”DNA是具有各种不同的功能。应用

DNA合成仪结构和性能

(一)压力管路及输送管路每个瓶子都有一个氩气压力管道及输送管道进入瓶盖插塞,对于亚磷酰胺,1—8号瓶其压力管道也作为排气管。氩气管要保持在液体水平以上,而输送管却伸到瓶的底部。当阀门正确设置打开时,储液瓶上部空间由氩气加压,液体被推进输送管,流到其目的地。(二)压力系统   系统压力由超纯氩(99.

弯形DNA的定义和作用

中文名称弯形DNA英文名称curved DNA定  义由于某些内在的或诱导的原因造成DNA分子局部变形,形成突环状而使在序列上相距较远部分在空间上彼此紧邻。通常发生在启动子区域,可以极大地增强DNA与蛋白质之间的相互作用,有利于增强转录起始复合体的亲和性,在许多基因的转录起始中发挥作用。应用学科生物

DNA测序仪原理和方法

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最

反义DNA的概念和结构

反义DNA又称反义链。在20世纪60年代的文献上常把作为转录模板的那条链称为有义链或称有义DNA,而另一条单链就称为反义DNA或称反义链,而较近期的文献则相反,把不作模板转录的链称为有义DNA或称编码链,作为模板转录的链称为反义链或反义DNA,或模板链。

质粒和DNA有什么不同

质粒是一种可以独立复制的DNA片段,通常以环状的形式存在,同时有线性和超螺旋状态,而DNA是脱氧核糖核酸的英文简称,是由核苷酸聚合而成的,其中基因就是DNA的一种,可以调控蛋白质的表达和生物机体功能

DNA复制的定义和功能

DNA复制是指DNA双链在细胞分裂以前进行的复制过程,从一个原始DNA分子产生两个相同DNA分子的生物学过程。DNA复制是通过名为半保留复制的机制来得以顺利完成的。DNA复制发生在所有以DNA为遗传物质的生物体中,是生物遗传的基础。

环状DNA的类型和分布

环状DNA也有两种,环状单链DNA和环状双链,一般存在于病毒、细菌和真核生物的线粒体和叶绿体中, 环状DNA一般比线性DNA结合更紧密更稳定,储存的遗传信息更多(重复序列)。原核生物的拟核是大型环状DNA。

DNA重组的概念和作用

DNA重组(DNA recombination)实质上指的是遗传重组(genetic recombination),也称为遗传改组(genetic reshuffling),是指两个不同姐妹染色体间遗传物质的交换。DNA重组导致后代产生不同于任一亲本的新性状。真核生物减数分裂期间的DNA重组产生新的

基因重组和DNA重组区别

基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。 在人类的生殖细胞中发现的46条染色体发生在生物体内基因的交换或重新组合。基因重组是生物遗传变异的一种机制,包括同源重组、位点特异重组、转座作用和异常重组四大类。DNA重组指DNA分子内或分子间发生的遗传

DNA环的结构和应用

中文名称DNA环英文名称DNA loop定  义蛋白质因子和蛋白质或DNA间的相互作用而形成的DNA分子弯曲成环的结构。这种结构被广泛地用于解释蛋白质-蛋白质、DNA-蛋白质的相互作用。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

DNA修复的概念和作用

DNA修复(DNA repairing)是细胞对DNA受损伤后的一种反应,这种反应可能使DNA结构恢复原样,重新能执行它原来的功能;但有时并非能完全消除DNA的损伤,只是使细胞能够耐受这DNA的损伤而能继续生存。也许这未能完全修复而存留下来的损伤会在适合的条件下显示出来(如细胞的癌变等),但如果细胞

线粒体DNA的结构和作用

线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。它们携带着自己的DNA——mtDNA,而这些基因的突变能引起线粒体疾病。虽然疾病症状是多变的,但大脑、肌肉和心脏

DNA测序仪原理和方法

  DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的

DNA错配的概念和原则

DNA错配是指DNA双链核酸分子中存在的非互补性碱基配对的现象,即一条链上的碱基与另一条链上相应的碱基不是互补的。DNA双螺旋结构中碱基之间的配对不是随意的,总是 腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)配对,鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)配对的原则。若出 现了 A与C或G配对,或T与G或C配对,也称为碱基错配。

DNA测序仪原理和方法

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最

DNA测序仪原理和方法

DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种

DNA合成仪结构和性能

试剂驱动系统一般地,DNA 合成仪采用一定压力的惰性气体(氩气)或氮气及电磁阀组驱动液体试剂,也可采用氦气驱动试剂。某些合成仪采用slider block滑块系统及精密蠕动泵,可不采用气体为驱动系统。采用气体及电磁阀驱动液体试剂时,需首先将管路系统电磁阀前段,含试剂瓶组中压力加压到规定气压,通过合成

卫星DNA的结构和功能

卫星DNA(satelliteDNA)是一类高度重复序列DNA。在介质氯化铯中作密度梯度离心(离心速度可以高达每分钟几万转)时,DNA分子将按其大小分布在离心管内不同密度的氯化铯介质中,小的分子处于上层,大的分子处于下层。从离心管外看,不同层面的DNA形成了不同的条带。根据荧光强度的分析,可以看到在

RNA和DNA病毒的区别

DNA病毒和RNA病毒的区别,主要是病毒核酸的类型不同,DNA病毒的病毒核酸是DNA,RNA病毒的病毒核酸是RNA。RNA病毒的复制过程比较独特,由于遗传信息直接保存在RNA上,因此复制过程通常发生在细胞质内。RNA病毒是用它们自己的RNA复制酶来对基因组进行复制,但是DNA病毒基因组的复制发生在细