ELISA试验中常见问题及解决方法
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析ELISA试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法。1 选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。2 加样可能原因： 1) 血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2) 手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3) 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： 1) 标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在......阅读全文
间接－ELISA法
实验概要Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测
ELISA的原理
ELISA的原理：（1）抗原或抗体能以物理性吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性;（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免
ELISA－测定过程
1、加样在 ELISA 中,除了包被外,一般需要进行4～5次加样。加样吸嘴的洁净与否和吸量的准确性,直接影响检测结果。由于吸嘴的构造特殊,导致清洗困难,加大了交叉污染的机会。建议用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗,定期校准。加样时应将所加物加在 ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出
ELISA实验问答
来自江苏的一位刘老师通过在线咨询的方式联系到了我公司夏经理，对产品的基本信息详细的介绍一番之后，刘老师提出了一些相关ELSIA试剂盒的使用问题，对此，夏经理为刘老师安排了技术人员做问题分析解答。·万一购买了你们公司的试剂盒之后实验结果不理想怎么办呢？ 答：实验结果不理想请及时与客服或技术支持联系，我
ELISA操作要点
ELISA操作要点：1; 显色 显色是ELISA中的最后一步温育反应，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。
Sandwich－ELISA－Protocol
实验概要The Sandwich ELISA measures the amount of antigen between two layers of antibodies (i.e. capture and detection antibody). The antigen to be mea
PCRELISA
PCR-ELISA 一、原理 PCRELISA是用免疫学方法检测PCR产物，这比常规用电泳方法及Southerlot要简便、省时，可同时处理大量标本，便于自动化。PCR-ELISA的原理是在做PCR扩增时应用生物素(biotin)标记的引物，这样PCR的产物就可结合到亲和素(avidi
直接ELISA法
实验概要ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的
ELISA法介绍
经典的化学分析方法（如滴定分析、重量分析、分光光度法）能对化学体系组分进行常量或微量分析，而对复杂生物体系的微量成分的测定往往力不从心。在此背景下，科学家研发了一系列测定生物体系成分含量的方法，其中免疫化学法（如酶联免疫法、免疫荧光法、放射免疫法）因具有高特异性、超微量分析生物体有机成分的特点而得到
ELISA操作步骤
酶联免疫吸附实验材料，试剂，溶液1．酶标板，100μltip头，1ml Ep管，湿盒2．包被稀释液（0.05mol/L碳酸钠-碳酸氢钠buffer,pH 9.6）碳酸钠0.15g,碳酸氢钠0.29g,叠氮钠0.02g,加双蒸水至100ml,调至pH 9.63. 封闭液(5%小牛血清/PBS溶液)小牛
elisa实验原理
ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相
ELISA操作要点
1 标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂
间接ELISA实验
实验概要需要偶联二抗的 ELISA 测定的一般程序。实验步骤1. 将抗原包被到微孔板 1) 将抗原在 PBS 或其它碳酸盐缓冲液中稀释至 20 μg/ml 的最终浓度。移取 50 μl 抗原稀释液到 PVC 微量滴定板的第一排微孔中，使该微量滴定板的微孔上包被抗原。按需要在微量滴定板上进行梯度
ELISA技术介绍
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定 Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay 的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 一 原理 ELISA是以免疫学
ELISA开发方法
一、前言ELISA在生物药物研发的各个环节均有广泛的应用：如以生物大分子检测为目的，在药效药代评估时，对动物实验和临床实验中的血液样品的药物浓度和生物大分子标志物进行定量检测；以亲和力测定为目的，在质量分析过程中，对抗体相对于靶点抗原的亲和力检测；以亲和力筛选为目的，在抗体发现过程中，对杂交瘤细胞克
什么是ELISA
ELISA即酶联免疫吸附测定，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊
ELISA－Inhibition－Assay
ELISA Inhibition AssaySensitize a 96-well microtiter plate with purified antigen.Prepare a solution of the purified antigen of interest in phosphate b
ELISA技术综述
ELISA原理 ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性，对标本进行检测；由于结合与固体承载物（一般为塑胶孔盘）上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计 其结合 机制後，配合酵素显色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同，ELI
ELISA方法学
ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点：待测样本极具多样性，且
Elisa检测方法
ELISA方法的及步骤(一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的
ELISA分析缺点
ELISA实验所有方法的缺点很明显： 1、重复性不好； 2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性； 3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。 1、直接法（direct ELISA） 将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗
ELISA操作要点
优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。 1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。
间接ELISA与间接竞争ELISA有什么区别
一般间接Elisa法用于检测抗体（比如免疫血清的效价）而间接竞争Elisa法用于检测小分子抗原
间接ELISA与间接竞争ELISA有什么区别
一般间接Elisa法用于检测抗体（比如免疫血清的效价）而间接竞争Elisa法用于检测小分子抗原
ELISA实验必看；ELISA试剂盒使用操作要点
酶联免疫吸附试验（ELISA） 因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全等特点而在临床上广泛应用，但是由于其操作步骤复杂，一般包括试剂准备，样本收集，加样，温育，洗涤，显色，比色，结果判定等，其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准
夹心法ELISA和竞争法ELISA操作步骤比较
竞争法ELISA操作步骤实验开始前，各试剂和样本均应平衡至室温；样本复融后需再次离心，取上清检测；试剂或样本配制时，需充分混匀并尽量避免起泡；标曲和样本建议做复孔检测。1.加样：将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔50 μL。待测样品加入到其他孔，每孔50 μ
阻断ELISA与液相阻断ELISA有什么区别
一、本质不同：间接的酶标抗体是二抗，与待检抗体结合；阻断酶标抗体是一抗，与抗原结合。间接中底物降解的量与抗体量相等，阻断底物降解量与抗体。二、实验结果不同：酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术，其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应
阻断ELISA与液相阻断ELISA有什么区别
一、本质不同：间接的酶标抗体是二抗，与待检抗体结合；阻断酶标抗体是一抗，与抗原结合。间接中底物降解的量与抗体量相等，阻断底物降解量与抗体。二、实验结果不同：酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术，其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应
elisa都有什么类型
夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体，加入带
elisa原理有哪些
Elisa Kit使用方法（以人IL-4 ELISA KIT为例）：检测原理:本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的IL-4会 与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合；抗人IL-