通过超滤去除DNA扩增产物中的寡核苷酸及过剩dNTP
实验方法原理 PCR 反应结束后，从扩增 DNA 产物中去除扩增反应残余下来的寡核苷酸引物，引物二聚体及 dNTP 是非常必要的。首先，DNA 扩增目的产物内残余的 dNTP 可以在剩余热稳定 DNA 聚合酶的作用下填平已被限制性内切核酸酶切割产生的 DNA 产物的黏末端，使后者难以被进一步克隆。其次，过量的寡核苷酸引物可导致用第一次 PCR 扩增的 DNA 产物作模板再进行第二次 PCR 扩增反应的效率降低。最后，引物二聚体内部的众多的限制性核酸内切酶酶切位点可与扩增 DNA 片段两末端的酶切位点竞争限制性核酸内切酶，从而影响扩增 DNA 片段的薄切效率。 实验材料 扩增反应产物 ......阅读全文
应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC）
对于仅仅知道某种蛋白质的部分序列，而要克隆其基因的最佳方法是，利用已知氨基酸序列设计相应的寡核苷酸，用此寡核苷酸作为探针去筛选基因文库钓取全长基因或者用寡核苷酸作为引物进行 PCR 扩增靶基因。这两种方法都会遇到寡核苷酸所编码的 遗传密码子的简并性问题。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译
用随机寡核苷酸引物从mRNA合成cDNA探针
本方案以 poly(A) + RNA 作为模板，通过随机引物反应合成 cDNA 探针，这类探针可用于 cDNA 文库的差异筛选。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案以 poly(A) + RNA 作为模板，通过随机引物反应合成 cDNA 探针，这类探针可用于 cDNA
Science医学：推动反义寡核苷酸治疗的逆袭
来自美国加州洛杉矶分校的研究人员发现了一种可使针对杜氏肌营养不良症(DMD)的反义核苷酸疗法变得更为有效的辅助药物。联合两种治疗方法将有望显著减缓这一肌肉消耗性疾病的进展。相关论文发表在12月12日的《科学转化医学》(Science Translational Medicine)杂志上。
滚环扩增拓展芯片合成寡核苷酸文库的应用
天津医科大学总医院施福东、刘强神经免疫团队最近报道了以自然杀伤细胞为代表的炎症细胞可在脑内持续存在，在依赖神经干细胞而存在的同时损伤神经干细胞，造成神经修复障碍，研究成果于2016年1月11日发表于《Nature Neuroscience》（2014年影响因子16.09， 5年影响因子16），题
岛津发布用于寡核苷酸表征的LabSolutions－Insight－Biologics软件
岛津公司宣布发布LabSolutions Insight Biologics，这是一款用于LCMS-9030和LCMS-9050高效液相色谱四极飞行时间（Q-TOF）质谱仪的寡核苷酸表征软件。Insight Biologics实现了寡核苷酸表征工作流程的自动化并显著提高了效率。该软件能够确认产物和鉴
GeneLink－未修饰的DNA寡核苷酸的价格表
Gene Link寡核苷酸适用于要求苛刻的应用和一致的结果。我们认为，重视时间并且没有因寡核苷酸质量而导致实验失败的空间的研究人员应考虑使用Gene Link。我们针对每种寡核苷酸的众多质量控制步骤可确保您放心。 Gene Link Oligo合成部门不是“寡头工厂”。在合成过程中以及在通
等位基因特异性寡核苷酸印迹的方法介绍
中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定 义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固
用大肠杆菌－Klenow－片段标记合成的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 甲酰胺加样缓冲液 大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段 变性聚丙烯酰胺凝胶 寡核苷酸引物 寡核苷酸模板 [α-32P]dNTP
警惕!脑脊液途径反义寡核苷酸会引起急性神经毒性
反义寡核苷酸(ASO)是人工合成的单链DNA或RNA序列，可以与靶RNA以Watson-Crick的方式杂交，从而改变RNA的加工过程以调节蛋白质的产生。由于ASO的电荷和大小使其很难通过血脑屏障，因此已开发出通过鞘内注射将ASO直接注入脑脊液(CSF)间隙来治疗中枢神经系统(CNS)疾病的方法。由
用大肠杆菌－Klenow－片段标记合成的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 甲酰胺加样缓冲液大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段变性聚丙烯酰胺凝胶寡核苷酸引物 寡核苷酸模板[α-32P]dNTP仪器、耗材 磷荧光粘贴标签水浴或模块实验步骤 材料溶液和缓冲液稀样贮存液至适当浓度。甲酰胺加样缓冲液10XKlenow 缓冲液酶与缓冲液大肠杆菌 DNA 聚合
分子遗传学词汇等位基因特异的寡核苷酸
中文名称：等位基因特异的寡核苷酸英文名称：allele specific oligonucleotide;ASO定 义：与基因点突变热点区互补的人工合成的寡核苷酸序列。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
等位基因特异性寡核苷酸印迹的功能作用
一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固相支持物上，受检基因在杂交液中，生物素标记的DNA可结合辣根过氧化物酶，借助抗生物素系统使无色基质变成有色沉淀，从而进行测
等位基因特异性寡核苷酸印迹的方法特点
中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定 义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固
用大肠杆菌－Klenow－片段标记合成的寡核苷酸实验
通常利用 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的磷酸化反应进行寡核苷酸的标记。但有时需要标记比活度更高的放射性标记的探针，最理想的情况下，磷酸化反应中每一个寡核苷酸分子上有一个 32P 原子掺人。而用大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段合成与寡核苷酸互补的一条 DNA 链，可获得更高比活度的探针。
等位基因特异性寡核苷酸印迹的定义和方法
中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定 义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固
荧光分光光度计－测量寡核苷酸的熔解温度
简介在生物化学领域中，生物材料的热学性能研究是材料分析的重要组成部分。而熔解温度（TM）是生物材料中应用zui广泛的热学性能。生物材料由许多化学键组成，随着温度的升高，材料内能增加同时化学键断裂。这种因化学键断裂而导致生物材料结构改变的现象被称作热变性。此外，zui活跃时的变性温度被称为熔解温度。熔
Ionis反义寡核苷酸新药获FDA优先审查，预计年底上市
6月25日，Ionis Pharmaceuticals宣布，FDA已经接受Olezarsen治疗家族性高乳糜微粒血症综合征（FCS）的新药上市申请（NDA），并授予其优先审查资格，PDUFA日期为2024年12月19日。 家族性乳糜微粒血症综合征是一种罕见的遗传性疾病，由脂蛋白酶（LPL）功能
DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学
一、DNA探针的应用 虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同，所不同的是：（1）杂交时需先在高温80～95℃短时处理，使DNA探针及细胞内靶DNA变性，解离成单链，迅置于冰上冷却。然
肽偶联、寡核苷酸、基因治疗等新兴疗法取得多个突破
罕闻药事 随着生命科学领域的研究进步，越来越多罕见病关联靶点为人们所熟知，新策略催生的疗法也不再局限于常规小分子类别。抗体疗法、肽类疗法、基因疗法、RNA疗法、细胞疗法……多种新疗法悄然兴起，欣欣向荣，共同构建了生机勃发的罕见病疗法研发生态。本期罕闻药事，让我们一起盘点过去几天的疗法进展。
CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
本方案介绍用阳离子去污剂——十六烧基溴化吡啶（cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差异沉淀分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物。此方法最初是用于回收磷酸缓冲液从羟磷灰石柱洗脱的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性标记核酸包括寡核苷
聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 无菌的过滤水 乙腈 乙酸铵 正丁醇 不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液 甲酰胺指示染料混合液 甲醇：水溶液
乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
如果放射性标记的寡核苷酸只是用作杂交探针的话，一般不必完全除去未掺入的放射性标记物。然而，为了使本底降至最低，应该将未掺入的大部分放射性标记物与放射性标记的寡核苷酸分离。如果寡核苷酸长度超过 18 个核苷酸（本方案)，则绝大部分未反应的放射性前体物质可通过乙醇分级沉淀除去。本实验来源于分子克隆实验指
天津医科大Nature子刊：新成果助力反义寡核苷酸治疗
来自天津医科大学、牛津大学的研究人员在dystrophin缺陷杜氏肌营养不良症(DMD) mdx小鼠中证实，己糖（Hexose）可提高寡核苷酸的递送和外显子跳跃。这一研究成果发布在3月11日的《自然通讯》（Nature Communications）杂志上。 天津医科大学的尹海芳(HaiFan
乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇TE放射性标记的寡核苷酸纯化的原料实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙酸铵（1mol/L)乙醇TE(pH7.6)核酸和寡核苷酸放射性标记的寡核苷酸纯化的原料是方案 2(步驟 3 或步骤 5) 的反应混合液，T4 噬菌体多核苷酸激酶巳在 68°C 加热后灭活。方法
聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇：水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤材料缓冲液和溶液稀释缓存液至适当浓
安捷伦推出针对生物制药研究的新款寡核苷酸分析软件
2022年6月8日，北京——安捷伦科技公司今日宣布推出MassHunter BioConfirm 12.0软件。这款软件可支持安捷伦高分辨率液质联用系统生成的数据，用于寡核苷酸纯度分析和序列确认。MassHunter BioConfirm 12.0正于当地时间6月5日至9日，在美国明尼苏达州明
聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇：水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材 MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤 材料缓冲液和溶液稀释缓存液至
UPLC－SYNAPT－二级质谱方法用于－siRNA－寡核苷酸结构确证
简介 RNA 干涉（ RNAi ）机制在转录后基因沉默中有根本性的作用，在已知序列的情况下，基因沉默常规实验可通过使用 ~21 个核苷酸（ nt ）长度的合成 RNAi 探针进行，此法也用于研发药物。合成 RNAi 寡核苷酸须纯化以防靶点外的基因沉默。 RNAi 药物需要良好的实验描述，以达到法规要
天津医科大Nature子刊：新成果助力反义寡核苷酸治疗
来自天津医科大学、牛津大学的研究人员在dystrophin缺陷杜氏肌营养不良症(DMD) mdx小鼠中证实，己糖（Hexose）可提高寡核苷酸的递送和外显子跳跃。这一研究成果发布在3月11日的《自然通讯》（Nature Communications）杂志上。 天津医科大学的尹海芳(HaiFan
随机引物法（利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记）
实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。 实验材料