如何区分引物二聚体和目的条带？
因为引物二聚体的大小从几十 bp 至几百 bp 不等，所以当你的目的条带的分子量比较小的时候，电泳后所看到的结果不一定是目的条带，很有可能是引物二聚体，所以我们需要一个有效的方法来区分二者。当我们对引物二聚体形成的本质了解了之后，想要区分二者其实并不难，我相信大家看到这里的时候已经知道了引物二聚体形成的本质了，但是我还要强调一遍：引物二聚体形成的本质其实就是引物之间或者引物自身的 3’ 端区域存在部分互补结合。也就是说，引物的形成是不需要模板的参与的，所以我们只需要在电泳的时候添加一组对照就可以有效的判断是否有引物二聚体的形成，以及如果有引物二聚体的形成，它的分子量是多大，从而区分开引物二聚体和目的产物。这个对照就是：模板用 H2O 替代，其他的都一样。这样的话，如果这个泳道有条带出现，那说明形成了引物二聚体（当然前提就是该体系没有被模板污染）。从这里也可以看出设置对照的重要性，一个巧妙的对照往往可以达到事半功倍的效果......阅读全文
PCR常见问题总汇
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
pcr需要注意的问题
1、PCR产物的电泳检测时间：一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。2、假阴性，不出现扩增条带模板：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。模板核酸变性不彻底。在酶和引物质
详述PCR扩增带异常的原因及解决方法
详述PCR扩增带异常的原因及解决方法使用PCR时，zui常碰到的问题就是会出现扩增带有异。借此机会，我们与大家探讨一下PCR扩增条带有异时的原因及解决方案。 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备；②引物的质量与特异性；③酶的质量；④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节
标准曲线法和标准加入法，如何区分
在分析化学中，特别是仪器分析实验中，经常用某物质已校正的标准曲线来求相应物质的未知浓度。标准曲线通常是一条过原点的直线，被测组分含量可从标准曲线上求得。以分光光度计法为例，某特定波长的光经过某物质，可以被该物质吸收、反射等，并且其浓度（ｃ）与吸光度（Ａ）之间在一定浓度范围内符合朗伯－比尔定律。但有时
如何区分自来水中的颗粒和浊度？
一提到自来水中的浊度和颗粒，很多行业内的同仁都表达了这两个指标其实差不多，都可以代表水是否干净。但事实上，浊度和颗粒尽管从某种程度上都是受水中颗粒的影响，可两者代表的含义却相差巨大，其检测方法也不尽相同，配合使用可以更好的指导自来水厂生产工艺的运行。下面我们就仔细说来。 浊度和颗粒的含义与检测原理浊
如何区分血平板上的α溶血和β溶血
(1)甲型(α)溶血:菌落周围出现较窄的草绿色溶血环,习惯上称这类菌为甲型溶血性链球菌,即草绿色链球菌。 (2)乙型(β)溶血:菌落周围出现较宽的透明溶血环,这类菌被称为乙型溶血性链球菌,能产生溶血素O等毒素,致病性强。 (3)丙型(r)溶血:菌落周围无溶血环,故这类菌又称为不溶血链球菌。
如何区分穿晶断裂和沿晶断裂
沿晶断裂：裂纹沿晶界扩展，可以清楚地看到一个个晶粒，晶粒面比较光滑； 穿晶断裂：也可以看清晶界，但是晶粒面相比沿晶断裂不是那么的光滑，也分为韧性和脆性穿晶断裂；
PCR产物的电泳检测可能出现那些问题
一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有：①模板核酸的制备。②引物的质量与特异性。③酶的质量及。④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质。②模板中含有Taq酶抑制剂。③模板中蛋白质
如何提高PCR特异性
一天P几百管的人可能不用担心条带有没有，而对于刚入门分子生物学的人来说，PCR能看到条带，能看到特异性好的一条明亮的带就是入门zui大的欣慰。师姐会告诉你，引物设计很重要，不能有二聚体和发夹结构；师兄也会和你说退火温度很重要。提高PCR特异性可谓是仁者见仁，智者见智。以下搜集了网友们的讨论，精华汇
聚合酶链反应的常见问题介绍
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。假阴性不出现扩增条带。PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及溴乙锭的使用， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板
PCR产物的电泳检测
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。常见问题如下： 一、假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板
PCR产物的电泳检测时间
一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③
PCR常见问题总（1）
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
如何设计引物（二）
Nucleotides:Stocks of nucleotides for PCR (or other procedure) are NEARLY ALWAYS dNTPs (deoxynucleotides), and concentrations is almost always given i
如何设计引物（一）
Primers:i) Oligonucleotide primers are generally supplied as "so many OD units/ml" - but what does this mean, in terms of mg/ml, or mmol/ml, etc?Given
PCR仪常见问题及回答，值得一看！
一、遇到的问题 1. cDNA产量的很低 可能的原因： RNA模板质量低 对mRNA浓度估计过高 反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足 同位素磷32过期 反应体积过大，不应超过50μL 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 最常见的原因在于您的反应体系是PCR的
PCR技术（五）：常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
PCR常见问题总汇(一）
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
PCR仪常见问题及回答
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
PCR实验操作常见问题及解决方法
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
PCR仪常见问题及回答
PCR仪常见问题及回答1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是R
PCR仪常见问题及回答
1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系＊
CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定方法
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了PCR胶浓度、电泳电压及时间的选择，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9完
颗粒如何区分以及如何定义
颗粒学是一门跨学科、多学科和交叉学科的学问，由大量的基础科学和许多相关的应用技术组成。自然界中多数固体都是以颗粒形态存在，如土壤、沙子、灰尘。人们的食物通常也是颗粒物，如大米、小麦、大豆、食盐、蔗糖。人工制品，诸如煤粉、催化剂、水泥、肥料、颜料、药品，大部分都呈粉末状态。和这些物质相关的基本现象的研
PCR常见问题汇总
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶
什么是上游引物和下游引物
虽然这个问题很简单，但我怎么发觉挺难回答的......上游引物就是和要扩增基因片断上游序列结合的引物（引物就是单链寡聚核苷酸，基因扩增需要从引物开始），同理，下游引物指与目的基因片断下游序列结合者。具体示意如下：（上下两条长线代表DNA模板）5'-----------------------
如何分析电泳条带
许多分子，如氨基酸、 多肽、 核苷酸等都具有可电离基团，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动，这就是电泳，由于各种离子的移动速率不同，就把各种不同物质分开，前后分成了一排一排，在光学仪器下便显示为一条条的光带，这就是电泳条带，人们可以根据条带的宽窄和位置利用已有的资料
PCR扩增带异常的原因及解决方案
使用PCR时，最常碰到的问题就是会出现扩增带有异。借此机会，我们与大家探讨一下PCR扩增条带有异时的原因及解决方案。 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备；②引物的质量与特异性；③酶的质量；④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白
溶解曲线双峰可以用吗
如果不是很明显的话，是可以用的，但是很明显，就要重新设计实验一般的主峰前面出峰的话，是引物二聚体，而如果主峰后面出峰的话，一般的是非特异性的大片段的扩增。如果主峰相对强于次峰，可以通过改变引物浓度，退火温度和镁离子浓度来解决，但如果次峰强于主峰，就是说杂带的特异性高于目的条带，一般的只能换引物了。
什么是引物二聚体,它对PCR反应有什么影响
是在pcr反应中,两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体,这种聚合体出现了,就相当于原本可以扩增的原料链减少了,即会导致扩增的效率降低,所以最好能避免这种物质的出现.