RTPCR实验方法总结大全
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDNA（理论上），还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。问题：在做RT-PCR遇到一怪现象，即对同一动物不同组织扩增同一段基因，结果从一种组织中可以扩出我的目的基因，条带非常的好，而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带，尝试其他条件同样无法得到满意的结果，百思不得......阅读全文
核酸提取方法大全
核酸是生物体内的高分子化合物。它包括脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid,DNA）和核糖核酸（ribonucleicacid,RNA）两大类。DNA和RNA都是由一个一个核苷酸（nucleotide）头尾相连而形成的。RNA平均长度大约为2000个核苷酸，而人的DNA却是很长的，约
菌种保藏方法大全
基本原理 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种：
线虫总RNA提取及RTPCR实验方法
C. elegans RNA Isolation and RT-PCRReagents Needed:M9 (common stock)Trizol (stored at 4ºC)chloroform2-propanol70% EtOHRNase-free H2OiScript cDNA Synth
T型迷宫实验方法大全及其注意事项
一.T迷宫的发展背景近半个世纪前，Kivy和Dember等人证明大鼠能辨别T-形迷宫（T-maze）两臂颜色的变化。他们发现，将雄性大鼠置于T-形迷宫的主干臂15~30min，让其能看见、但不能进入黑白两臂。然后，改变其中一个臂的颜色，使两臂同为黑色或白色。让大鼠自由选择T-形臂。结果显示，大鼠总是
实验室用水知识大全
▼水中存在的杂质 •可溶性无机物：无机盐类、溶解气体、重金属、硬度成分(钙、镁等) •可溶性有机物：木质素、单宁、腐植酸、内毒素、RNA分解酶、农药、三氯甲烷、环境荷尔蒙物质、界面活性剂、有机溶剂 •微粒子：铁锈、胶体、悬浮物、固体颗粒 •微生物：细菌类、藻类▼实验用水所要求的纯度 所谓实
材料结构分析方法大全
关于材料结构分析的常见的方法有: 热分析法、电子显微方法、X 射线衍射、红外吸收光谱、核磁共振、金相分析等。 1.热分析法 热分析主要是分析样品在高温过程中的结构变化和物理化学变化，分为热重分析法，差热分析法，差式扫描量热法。 2. X 射线衍射分析 X 射衍射线( XRD) 又称X
菌种保藏方法大全（二）
四、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点 下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。 1．斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移
菌种保藏方法大全共享
基本原理 具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种
菌种保藏方法大全（三）
4．沙土保藏法 （1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。 （2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。 （3）烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。 （4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。 （5）烘干，碾碎，通过1
菌种保藏方法大全（一）
一、基本原理 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 二、保藏方法
实验总结怎么写
写实验总结需要注意以下几点：1、注意格式;2、试验中各个环节的清晰明确。3、实验主体也就是实验过程的严谨以及有理有据。4、实验过程中出现的问题、不足以及注意事项的标注。注意格式。文论什么文体的东西，格式必须受到重视，这也是中华文明几千年的积累与习惯。那么实验进行之后也要有个特定的格式。这个格式如果大
关于MTT实验总结
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tet
WB实验问题总结
答：原因有很多：a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。答：a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长；b) 也不排
细胞侵袭实验总结！
实验原理将细胞小室（Transwell小室）放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的
Transwell实验全面总结
这里想明确两个概念，一个是 Transwell ，另一个是肿瘤细胞侵袭 模型 。1 ． Transwelltrans- 这个词根有转移、转运、穿过等意思， well 有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据 Corning 公司的 Transwell 说明书中的介绍，可以认
RTPCR原理与实验技术
一、知识背景：1. 基因表达：DNA——RNA——Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因——104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d，可以合成105个丝心蛋白）——共合成109个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。2. PC
RTPCR实验原理与步骤
【实验原理】RT-PCR 是以RNA 为模板经逆转录反应（Reverse Transcription，RT）产生cDNA 第一链，再以cDNA 为模板进行PCR 扩增以检测目的基因的表达情况。【实验仪器】1. 恒温金属浴2. PCR 扩增仪【试剂及配制】RNA PCR Kit (AMV) Ver 3
相对－RTPCR:－样品定量实验
已知线性范围的循环参数和 18SrRNA 引物与竞争子的比例，就可以用自己的样品去做相对定量 RT-PCR。下面配制的 PCR 反应混合物包含 9 个反应（4 个样品、4 个非反转录对照、1 个不加模板的对照）及 10% 的额外份额。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂
相对－RTPCR:－样品定量实验
试剂、试剂盒 双蒸水RT-PCR 缓冲液MMLV 逆转录酶SUPERaseINRNA 酶抑制剂 Taq DNA 聚合酶总 RNA 随机引物dNTP 混合物 基因特异的正向引物基因特异的反向引物[a-32P]dCTP仪器、耗材 Quantu mRNA Universal 18S standards P
相对－RTPCR:－样品定量实验
试剂、试剂盒 双蒸水 RT-PCR 缓冲液 MMLV 逆转录酶 SUPERaseINRNA 酶抑制剂 Taq DNA 聚合酶 总 RNA
什么是RTPCR，RTPCR的定义与检测方法？
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
检测实验室的实验用水知识大全
水的基本性质 •1个水分子(H2O)是由1个氧原子和2个氢原子弯曲键结而成。由于正、负电荷的中心不一致，因此属于极性分子。当2个水分子同时存在时，二者会由静电交互作用与氢键结合，互相吸引并保持一定的距离。而1个水分子可以同时与4个水分子结合，形成晶体般的整齐结构。 •水分子聚合体中，由于氢键
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。笔者一直从事实
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直
全面总结！实验室底釜的清洗方法
选择针对实验室反应釜釜内壁清理方法时，要考虑一下几点： 一、必须了解污染物的类别，有针对的选用合适的清洗方法。应该注意的是溶剂蒸汽去油脂、超声波清洗及水基清洗剂在内的溶剂洗涤，是用于去除油脂及蜡等污染物常用的方法。碱液、酸腐蚀等化学清洗是用于去除诸如油漆、积碳或用溶剂去除和化学清洗不能清除的其
实验室色谱联用技术大全！
人类进入21世纪,科学技术高度发展,先进的分析仪器不断涌现,每一类分析仪器在一定范围内起独特作用,并且要求在一定的条件下使用。如色谱作为一种分析方法,其zui大特点在于能将一个复杂的混合物分离为各自单一组分,但它的定性、确定结构的能力较差,而质谱(MS)、红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)、等离子
全蛋白含量测定方法大全
①凯氏定氮bai法：将du蛋白质转化为氨，用酸zhi吸收后滴定 ②双缩dao尿法：灵内敏度低，多肽键容+碱性Cu2+=紫色络合物，不同蛋白质的显色相似 ③紫外吸收法比较灵敏，蛋白质的中的络氨酸和色氨酸残基在280nm出的光吸收 ④Folin-酚试几法（lowry法）：灵敏度高，磷钼酸-磷钨
Transwell侵袭实验总结－（2）－实验用品
我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验，其他方面的Transwell应用我不太清楚，因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。1．实验用品：① Transwell小室：多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemi
Transwell侵袭实验总结－（4）
－Transwell的其他应用的实验步骤1．Transwell肿瘤细胞迁移实验过程与Transwell侵袭实验基本一致，不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为，由于没有基质胶的阻挡，细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快，所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105，而迁移实验的密度是1×
总结萃取的方法
概述萃取是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的单元操作，利用相似相溶原理，萃取有两种方式：液-液萃取，用选定的溶剂分离液体混合物中某种组分，溶剂必须与被萃取的混合物液体不相溶，具有选择性的溶解能力，而且必须有好的热稳定性和化学稳定性，并有小的毒性和腐蚀性。如用苯分离煤焦油中的酚；用有机