浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直从事实验室动物疫病检测工作，现就应用RT-PCR实验方法过程中出现的一些常见污染问题做如下论述，仅共同行参考和探讨。 RT-PCR实验有三步：提取RNA、反转录(RT)、PCR扩增及扩增产物分析，在这一过程中，最令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性。 污染原因主要有以下几个方面： 1、样品间的交叉污染收集样品的容器最好使用一次性的，如重复使用，应在使用前应于180℃的高温下干烤6小时或更长时间;样品存放时要密封严实，以防外溢造成相互间的交叉污染;样品在提取过程中离心管及吸样枪头最好使用一次性的，以免不同实验......阅读全文
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。笔者一直从事实
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直
浅谈PCR方法中常见的污染问题及对策
浅谈RT-PCR实验方法中常见污染问题及对策 河南出入境检验检疫局技术中心 李轲 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以
浅谈河道综合治理中的问题及对策
引言 随着我国城镇化发展进程的持续性加快，城市当中人口数量不断增多，同时污染废水的排放也在随之提升，如果无法及时对这一些污染物形成有效控制，必然会导致城市污染问题的持续加重，最终影响城市居民的生活质量以及城市形象。对此，在城市发展进程中，河道的综合治理工作显得非常重要，属于文明城市、和谐社会建
浅谈大气污染问题的环境监测及对策研究
近年来，随着我国工业化和城市化进程的突飞猛进, 随之而来的大气污染问题也显得越来越严重，不仅影响人们的身体健康, 而且还会抑制生产的发展,引起了人们的广泛关注。本文对大气污染问题的环境监测及相关解决对策进行了详细的探讨，以供大家参考借鉴。 大气环境是人类赖以生存的可贵资源,大气环境资源的破坏是
PCR常见问题及对策
PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR
血培养，临床常见问题及对策
血流感染（BSI）是指病原微生物侵入血流，随血行播散的感染，可以表现为菌血症、真菌血症、病毒血症和脓毒症。血流感染是一种全身性感染疾病，严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多脏器功能衰竭。 导管相关性血流感染（CRBSI）是指带有血管内导管或者拔除血管内导管48小时内，患者出现菌血症
免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题，大体归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。
免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题，大体归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。现在
RTPCR常见问题及解决方案
RT-PCR常见问题及解决方案
反转录聚合酶链反应（RTPCR）方法中常见的污染问题...
反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法中常见的污染问题及对策反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技
胶体金试纸条常见问题及对策
1 . 胶体金试纸条背景深或者是金残留跑不动？ 原因之一：被标记蛋白复溶液中添加的某种成分不合适。 解决方法：修改复溶液配方。 2. 胶体金试纸条边缘效应如何去除？ 原因之一：金爬速过快或者过慢。 解决方法：对样品垫进行处理。 3. 胶体金标记蛋白时出现死金如何解决？或者是金标记不上？ 原因之一：被
浅谈实验中一些常见问题及解决办法
实验室中常见的一些工作小问题和仪器设备出现的小状况，多学习以下的方式解决实验中常出现的麻烦 1、 被胶塞粘结的温度计要如何取出? 当温度计或玻璃管与胶塞或胶管粘结在一起而难以取出时，可用小改锥或刀锉的尖端插入温度计(或玻璃管)与胶塞(或胶管)之间，使之形成空隙，再滴上几滴水，如此操作并沿
PCR实验污染与对策
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪
PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白
离子色谱常见问题及其对策
离子色谱常见问题类型主要有压力异常(偏高、波动)、漏液、保留时间漂移、基线问题(漂移、噪声)、 峰形异常等，本文主要针对这几个现象逐条分析，让你不再为使用离子色谱而烦恼。 一、压力异常 无压力，流动相不流动的可能原因： 1、保险丝断或电源问题;2、柱塞杆折断;3、泵头内有
PCR污染及解决对策
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的诊断中具有重要的价值。在PCR扩增过程中，扩增的DNA产量是呈指数上升的，经过n个循环的扩增，一个DNA分子的产量便达到2n个拷贝。PCR产物一般为1013拷贝/
流式实验常见问题及解决方法
1.无染色/弱染色 2.高背景/非特异性染色 3.染色异常情况
食品检验检测中存在问题及对策探析
摘要：近年来，我国食品安全领域问题频发，严重影响到人民群众的生命健康安全。这就要求检验机构提高检测技术水平以便及早发现食品安全问题，并采取措施将其消灭在萌芽之中。因此，做好食品安全的检验检测工作意义十分重大。本文即试从目前我国食品检验检测存在的诸多问题出发，深入分析问题出现的原因并据此提出具体的
电子天平使用中存在的问题及对策
电子天平是通过作用于物体上的重力来确定该物体质量，并采用数字指示输出结果的计量器具。使用方便快捷，广泛应用在工业生产，食品安全，医疗卫生，以及贸易结算等领域。秤量的准确性直接影响着数据结果的准确性，因而操作人员的正确使用对确保数据结果的准确性非常关键，在实际检测工作中，最常见存在的问题有以下几方
PCR中常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型就会出现不规则，甚至消失。 1 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节
雷迈分析包衣过程中常见问题及对策
机在实际操作中如遇到如下的问题： 包衣机在实际操作中如遇到如下的问题： 1、粘片多发生在包隔离层。原因是素片表面不光华，单糖浆加入过量且温度低，水分蒸发慢，搅拌不及时，彼此粘附所致。 对策：一是糖浆应控制在40℃～50℃,与素片的比例
小儿静脉留置针输液常见问题原因分析及对策
静脉留置针亦称套管针，其套管柔软，不易穿破血管，可长时间留置于血管内，既减少了患者反复静脉穿刺的痛苦，又能方便及时用药，具有传统头皮针不可替代的优势，因而被广泛应用于临床输液。由于小儿配合差，血管相对较细，静脉留置针的使用可大大减轻患儿的痛苦，也降低了护士进行穿刺时的精神压力。 但在临
高低温箱常见的4大维修问题及对策
1、高低温试验箱的电池阀会发烫是怎么回事？如果阀芯有垃圾电磁铁的吸引力因为垃圾的阻力不能将阀芯完全吸引到位，磁路不能完全闭合，就会是线圈电感减少，电流增大从而发热，导致电磁阀发烫。 2、高低温箱的温度和湿度是影响器件性能的重要因素，其可能造成机械部件的腐蚀，金属镜面的光洁度下降，高低温箱机械部分的误
杂交稻种子浸种催芽时常见问题及对策
现在使用的杂交水稻种子与过去使用的常舰永稻种子有差异。过去使用的常规水稻种子颖壳厚、籽粒重、吸水慢，因此，在浸种催芽中采取高温破胸、中温催芽、低温炼芽的浸种催芽技术，而现在使用的杂交水稻的种子具有颖壳薄、籽粒轻、易吸水、喜中温的发芽特点，在浸种催芽中，应实行“三浸三滤”催芽技术，可催齐壮芽。杂交稻
RTPCR经验浅谈
RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备以问者的口气应该是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等分别进行RT-PCR扩增刚开始的三个月我们课题组三个人辛辛苦苦什么招都想过了结果连一个片段都没有拿
RTPCR经验浅谈
做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。后来有一个周
ELISA实验中常见问题及解决方法
ELISA实验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。选择试剂时，应选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。 ELISA实验中加样可能碰到的问题:
PCR实验操作常见问题及解决方法
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
PCR实验操作常见问题及解决方法
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与