聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(三)

3)电位梯度的不连续性电位梯度的高低与电泳速度的快慢有关,因为电泳速度等于电位梯度与迁移率的乘积。迁移率低的离子,在高电位梯度中可以与具有高迁移率而处于低电位梯度的离子具有相似的速度。在不连续系统中,电位梯度差异是自动形成的。电泳开始后,由于快离子的迁移率最大,就会很快超过蛋白质,因此在快离子的后边形成一个离子浓度低的区域即低电导区。电导与电位梯度是成反比的:式中E为电位梯度,I为电流强度,η为电导率。所以低电导区就有了较高的电位梯度。这种高电位梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。当快离子、慢离子和蛋白质迁移率和电位梯度的乘积彼此相等时,则三种离子移动速度相同。在快离子和慢离子的移动速度相等的稳定状态建立之后,则在快离子和慢离子之间形成一个稳定而又不断向阳极移动的界面。也就是说在高电位梯度区和低电位梯度区之间的地方形成一个迅速移动的界面(图15-6)。由于蛋白质样品的有效迁移率恰好介于快、慢离子之间,因此也就聚集在这个移动......阅读全文

聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法

1.仪器装置通常由稳流电泳仪和圆盘或平板电泳槽组成。其电泳室有上、下两槽,每个槽中都有固定的铂电极,铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流挡上。2.试剂 (1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g,四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L盐酸溶液48ml,再加水溶解并稀释至100ml,置棕色瓶内,在

中性聚丙烯酰胺凝胶电泳

            实验材料 DNA 样品 试剂、试剂盒 丙烯酰胺 亚甲双丙烯酰胺 过硫酸铵 乙醇

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

制胶(用于垂直电泳或水平电泳) 样品的准备 电泳 检测             试剂、试剂盒 丙烯酰胺单体贮液

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

试剂、试剂盒 丙烯酰胺单体贮液磷酸缓冲液贮液咪唑缓冲液贮液过硫酸铵 浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液SDSTEMED实验步骤 SDS 电泳的制胶方法与 “垂直平板电泳的制胶” 和 “水平平板电泳的制胶” 所述的常规聚丙烯酰胺凝胶的灌注方法基本相同,只是在 SDS 电泳制胶时单体贮液不需要抽气

中性聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验材料DNA 样品试剂、试剂盒丙烯酰胺亚甲双丙烯酰胺过硫酸铵乙醇凝胶载样缓冲液KOH 甲醇硅化液TBE 电泳缓冲液TEMED仪器、耗材夹子或铁皮制纸夹电泳装置玻璃板梳子和间隔片凝胶密封带凝胶测温条微量移液器及拉长的塑料洗头凡士林注射器实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液丙烯酰胺:亚甲双丙烯酰胺(29

聚丙烯酰胺凝胶电泳原理

聚丙烯酰胺凝胶电泳原理聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。具体如下:1、聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(以后简称单体)在水溶液中聚合而成的亲水性高聚物,是一种透明而不溶于水并有韧性的凝胶。2、制备凝胶时需

聚丙烯酰胺凝胶电泳概述

  聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过

聚丙烯酰胺凝胶电泳简介

  聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语: polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE) ,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。  作用原理:聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Nati

中性聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 丙烯酰胺亚甲双丙烯酰胺过硫酸铵乙醇凝胶载样缓冲液KOH 甲醇硅化液TBE 电泳缓冲液TEMED仪器、耗材 夹子或铁皮制纸夹电泳装置玻璃板梳子和间隔片凝胶密封带凝胶测温条微量移液器及拉长的塑料洗头凡士林注射器实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液丙烯酰胺:亚甲双丙烯酰

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)

  原理   聚丙烯酰胺(polyacrylamide,PAA)凝胶是丙烯酰胺(acry—lamide,Acr),在交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,Bis)的作用下经聚合而形成的一种大分子化合物。 Acr的聚合作用只有在自由基存在时才能发生,需要一个催化诱发剂系

聚丙烯酰胺凝胶电泳的介绍

  用聚丙烯酰胺为支持基质的电泳程序。一般说来,实现聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种类型。⑴单向电泳:采用完整的蛋白质或用十二烷基硫酸钠(SDS)处理的蛋白质的单向泳动,在有凝胶的平板上平行分离(过去也有用在玻管中的圆筒形棒状凝胶进行电泳的,现已很少有人使用)。⑵双向电泳:首先用天然蛋白质进行分离,然后凝胶

聚丙烯酰胺凝胶电泳的作用

  SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白 -SDS胶束,所带的负

RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳

一、原理核酸(ribonucleicacid,RNA)分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷,将其放入电场中,可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应,核酸分子大小、形状不同,故在电场作用下,核酸分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同,依此可达到分离纯化的目的。二、材料、仪器设备及试

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳时间

polyacrylamide gel 跑的话一般160V2块gel要4-5个小时,等溴酚蓝指示剂快要出去的时候就可以染色了,如果有4度跑的话可以放到250-380V,1.5个小时就够了,可以自己试着去摸索一下条件的。各个实验室是有差异的。

单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

实验材料 蛋白质溶液团粒状细胞蛋白试剂、试剂盒 4X浓缩胶缓冲4X分离胶缓冲10X电泳缓冲液2XSDS-PAGE上样缓冲液正丁醇甲醇SDS储存液仪器、耗材 离心机电泳装置凝胶上样吸头玻璃板加热器实验步骤 一、灌制平板胶1.清洗玻璃板。a.将玻璃板放人 2%PCC-54 清洗液中浸泡 3?24 h。b

聚丙烯酰胺凝胶电泳的介绍

  作用原理:聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开

聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义

聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

蛋白质的SDS-PAGE实验 传统的考马斯亮蓝染色实验 快速考马斯亮蓝染色实验 InstaStain Blue 凝胶纸染色实验 InstaStain Blue 凝胶纸染色实验 SYPRO Ruby 荧光染色实验 SYPR

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理

  聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。  聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

制胶 样品的准备 电泳 检测 照相、凝胶干燥 定量测定             试剂、试剂盒

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

试剂、试剂盒 丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤 一、垂直平板电泳的制胶用于垂直平板电泳的凝胶通常被灌注在两侧有隔片的两块玻璃板之间。模具垂直放置,周围用硅油(或其他密封物质)密封,或用夹子夹紧,以免胶液泄漏。溶液从顶部灌注

什么是聚丙烯酰胺凝胶电泳?

聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理

聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所

PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)实验

【实验原理】聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质。在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分子筛效应,还具有浓缩效应。和琼脂糖凝胶相

聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理

聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语: polyacrylamide gelelectrophoresis,简称PAGE) 作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEME

聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理

  1.聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(以后简称单体)在水溶液中聚合而成的亲水性高聚物,是一种透明而不溶于水并有韧性的凝胶。  2.制备凝胶时需要的原料是:丙烯酰胺,亚甲基双丙烯酰胺(双体,用作交联剂)o在水溶液中用催化剂引发聚合。常用的催化剂有:二甲氨基丙腈(DMAPN);过硫酸铵,四甲基乙二胺;

聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义

聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳特性

(1)在一定浓度时,凝胶透明,有弹性,机械性能好;(2)化学性能稳定,与被分离物不起化学反应,在很多溶剂中不溶;(3)对pH和温度变化较稳定;(4)几乎无吸附和电渗作用,只要Acr纯度高,操作条件一致,则样品分离重复性好;(5)样品不易扩散,且用量少,其灵敏度可达10-6ug(6)凝胶孔径可调节,根

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理

聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语:polyacrylamidegelelectrophoresis,简称page)作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n,n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用