免疫组化实验原理和步骤（二）

免疫组化没有任何着色的解决办法

DAB是否有效，可通过DAB直接与二抗反应，若不显色，则是DAB有问题或是二抗有问题， 是否DAB失效或是二抗浓度太低，可更换DAB或提高二抗浓度。排除这两者原因，再摸索最佳条件。首先要弄明白，所谓的DAB染色是怎样来的，DAB和过氧化氢是HRP的底物，可以说有三个环节1：DAB是否在有效期，和是否

石蜡切片的酶免疫组化注意事项

　　 一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？ 　　一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法： 　　1.一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然

做好免疫组化染色必须注意的问题（五）

十、连接抗体的选用必须正确，否则可造成假阴性的现象。免疫组化染色方法较多，如ABC法，SP法和EV二步法等，如果使用的是SP法，或者ABC法，这时就必须要仔细地选择好连接抗体，第一抗体有单克和多克隆炎分，连接抗体则要根据选用的抗体来进行，例如：第一抗体选用的是单克隆鼠抗人**抗体，连接抗体也要选择相

免疫组化试验抗体选择及常用染色方法

一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性

免疫组化常见问题及解决方法

当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗

免疫组化常见问题及其解决办法

1、 一抗从4度拿出后，为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）

做好免疫组化染色必须注意的问题（三）

七、必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性，才能降低背景的染色。在各种组织中都含有很多的内源性过氧化物酶，尤其在红细胞，中性粒细胞，单核细胞嗜酸性细胞，出血的组织坏死的组织等等。含有这种酶的各细胞和组织如果在染色前不对其进行处理和抑制，它们将会在DAB底物的显色时，与HRP一样催化底样，使之显色，使之生

免疫组化技术与Western－blotting、ELISA的异同

　　1）Western blotting　　蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反

酶免疫组化技术的优缺点有哪些

应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特

免疫组化技术全程原理剖析以及案例解答

1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞

免疫组化检测技术共识【完整版】（一）

免疫组化检测技术共识【完整版】

免疫组化检测技术共识【完整版】（三）

免疫组化检测技术共识【完整版】（七）

石蜡切片的酶免疫组化注意事项

一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？一般来说，如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话，如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法：1.一般用APES：丙酮=1:50的处理液来处理片子，处理5min左右，然后水洗，烘干既可用于贴

免疫组化检测技术共识【完整版】（四）

免疫组化检测技术共识【完整版】（六）

荧光组化实验中的注意事项

1．每种荧光染料，均有自己的最适PH值，此时荧光最强。当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2．放荧光染色在20。C以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。为此

多聚螯合物酶组化实验

EPOS 法 EnVision 法 UIP 法 PowerVision 法             实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物（葡聚糖）

多聚螯合物酶组化实验

实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物（葡聚糖）为骨架，将特异性抗体和 HRP 结合在一起，形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时，只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂，孵育 30～60 min 即可完成。勿需再加

免疫组化检测试剂盒试验所需时间

近日，有位免疫组化检测试剂盒试验菜鸟试验的所需时刻，因为ELISA办法不一样，故而所用的时刻也会不一样。那么一次ELISA试剂盒试验需求多长时刻呢？技术员介绍：双抗体夹心ELISA法一次试验需求4-4.5小时，竞赛ELISA法一次试验需求2-2.5小时。酶生机的测定实际上就是测定酶促反响的速率。酶生

教你看懂乳腺癌免疫组化报告单

    从乳腺癌术后病理中可以看出肿瘤具体分类名称、肿瘤大小、各切缘是否切除干净、淋巴结转移部位和数目以及血管淋巴管内和其他组织中有无侵润等。    此外，病理中尚包括免疫组织化学内容，与患者预后息息相关，具体分述如下：    ER    雌激素受体，阳性提示预后比阴性患者要好，加号越多越好。   

免疫组化非特异性染色消除方法

一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点： （1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。 （2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。 （3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如F

DAKO－EPOS免疫组化一步染色法

自Nakane（1966）建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKO EPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。1.、材料和方法（1）材料均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶

免疫组化二抗和显色时间过长会怎样

血清封闭时间过长会降低阳性率，过短非特异性染色易于出现。增强阳性率的表达，最主要的是抗原修复方法、一抗二抗浓度的恰当选择而不是楼主所说的盲目增加一抗浓度。DAB的浓度与阳性率没有明确的关系，但是低浓度的DAB有助于确定恰当的终止时间。当然，对于组织抗原降低或者一抗敏感性太差，可考虑选择增强型DAB显

关于免疫组化的基本原理的介绍

　　免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学

免疫组化染色结果容易受哪些因素影响

   众所周知免疫组化技术对于研究肿瘤的发展规律，进行良恶性分类及鉴别诊断具有重要的作用，因此在做此类实验过程中一定要加倍谨慎起来，尤其是免疫组化染色实验，其结果很容易受某些因素影响。那么，免疫组化染色结果容易受哪些因素影响？    专家指出：免疫组化染色的结果，与组织的固定、抗原的修复、抗体的保存

免疫组化染色机需要进水口吗

显然，免疫组化（IHC）结果获取过程中最关键的步骤是使用正确的抗体和抗原特异结合并对信号进行放大，但其实免疫组化（IHC）过程中所有的步骤对于生成出色的图像结果都十分重要。免疫组化（IHC）染色经常很难获得最优的结果，但通常可以通过对一些实验流程的变量（例如样品制备、抗原修复以及孵育时间等）进行调整

免疫组化染色结果容易受哪些因素影响

　　 众所周知免疫组化技术对于研究肿瘤的发展规律，进行良恶性分类及鉴别诊断具有重要的作用，因此在做此类实验过程中一定要加倍谨慎起来，尤其是免疫组化染色实验，其结果很容易受某些因素影响。那么，免疫组化染色结果容易受哪些因素影响？ 　　 专家指出：免疫组化染色的结果，与组织的固定、抗原的修复、抗体的保

免疫组化方法中关键环节及其原理（一）

  一、酶免疫组化的关键环节    1、标本固定：固定的目的是①防止标本从玻片上脱落；②除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存。    2、脱水、石蜡包埋和制片：脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则，容

免疫组化的经验总结（2）－操作规程

（一）、仪器设备    1）450px不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；     2）水浴锅（二）、试剂     1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。    2）0.0