WesternBlot实验背景高原因分析及解决办法
膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜；洗膜不充分，可以增加洗液体积和洗涤次数；电极不平衡或者加样位置偏斜，可以调整电极和加样；封闭物用量不足，可以提高封闭物浓度，孵育时保证封闭液完全浸没转印膜；封闭物使用不当，比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭；封闭时间不够，一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜；1）抗体非特异性结合，可以降低抗体浓度，减少孵育时间。2）一抗稀释度不适宜，可以对抗体进行滴度测试，选择最适宜的抗体稀释度。3）一抗孵育的温度偏高，建议4℃结合过夜。4）抗体浓度过高或洗涤不够，建议降低抗体浓度，增加洗涤次数和时间。5）化学显色底物过多，建议按说明书加入适量的显色底物。......阅读全文
western－blot跑不出条带，是什么原因
转膜的问题，膜和胶之间有气泡等。 Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术，可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性，是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。 生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技
WB实验中蛋白跑带如何区分分子量大小
westernblot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白而因为westernblot的膜应该是完全覆盖SDSPAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位
WB实验中蛋白跑带如何区分分子量大小
westernblot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白而因为westernblot的膜应该是完全覆盖SDSPAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位
WB实验中蛋白跑带如何区分分子量大小
westernblot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白，而10%的分离胶更适合70kDa的目的蛋白而因为westernblot的膜应该是完全覆盖SDSPAGE的凝胶，所以不用太担心条带在凝胶上位
Wes全自动蛋白印迹技术助力微量蛋白样品的检测
科学家经常通过蛋白质的表达及修饰情况来揭示对应样品的生理或病理状态。WesternBlot是进行蛋白检测的最经典技术。核酸检测对样品量的要求极低，因为DNA或RNA具备体外扩增的性质。而蛋白质检测只能受限于能够获得的原始样品量。传统WesternBlot每个泳道所需的蛋白总量达10-100μg，
westernbloting电泳胶可以4度过夜吗
跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀，造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡，造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰，造成条带迁移率不统一另外上样量过大，被其他泳道挤压也有可能
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
抗病毒治疗的材料方法的基本介绍
研究对象 选择52例HBV感染患者：年龄18～65岁，ELISA检测HBV-1抗体阳性并通过Westernblot结果确认的，在此之前14天内CD4计数在100/mm3～350/mm3之间，肝、肾、心、肺功能、电解质、血象、尿、淀粉酶、HCG等检验指标基本正常，继发感染被控的AIDS病人，病毒载
Western免疫印迹的原理
与Southern或Northern杂交方法类似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物
哪些筛选途径可以发现药物
一般是由天然药化或药物化学专业提取或合成的一系列化合物，送药理进行活性筛选，药理活性筛选一般由体外细胞实验开始，进行活性的初步筛选，一般过程是培养细胞-造成病理模型-给予化合物-检测指标。初步筛选的方法一般有MTT法，生化试剂盒。如果初步筛选有疗效，可以再进行一些其他的生化实验加以确证，如weste
wb免疫印迹法的主要显色方法有哪些
Western免疫印迹（WesternBlot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 western显色的方法主要有以下几种： i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光E
化学发光成像系统简介
显微镜的发明，切片技术和染色技术的建立，让人类从宏观世界迈进了认识人体自身的微观世界。免疫化学、原位杂交、核酸扩增等技术的创建让人类能够更进一步地了解组织细胞中蛋白质和核酸水平的变化情况，极大地提高了人类对正常组织、细胞和疾病发生发展规律的认识。数字影像技术的发展，使Westernblot成为蛋白质
高架十字迷宫实验相关：复方抗焦虑胶囊对急...（一）
高架十字迷宫实验相关-复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的抗焦虑作用复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的抗焦虑作用及对大鼠脑内ERK/CREB信号通路和BDNF表达的影响摘要:目的研究复方抗焦虑胶囊对急性应激大鼠的药效及其对大鼠脑皮层及海马ERK/CREB信号通路、脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法采用
副肿瘤性小脑变性的发病机制
副肿瘤性变性弥漫性的影响小脑的蚓部和半球。其发病机制为患者体内出现对其肿瘤细胞和小脑浦肯野细胞起交叉反应的抗体抗-Yo抗体常见于PCD患者合并乳腺癌、卵巢癌或子宫癌。抗-Yo抗体为多克隆IgG抗体，在补体的参与下特异性的与小脑皮质中浦肯野细胞浆内的小脑变性相关抗原(CDR)发生免疫反应，同时也和
荧光定量PCR技术检测食品转基因
当前，国际社会对转基因食品检测技术路线主要有两条：一是对外源基因表达产物蛋白质进行检测；二是直接检测外源基因DNA。随检测手段不断提高，对食品转基因检测已从定性提高到定量水平 。对外源基因表达产物蛋白质检测常用方法有酶联免疫法（ELISA）、蛋白质印迹法（Westernblot）等，这些检测方法大多
关于新生儿获得性免疫缺陷综合征的检查介绍
1.免疫学检查 患者外周血象中CD4细胞明显下降，早期CD4可＞500/µl，晚期＜200/µl直至降到0。CD8细胞变化不明显，因此CD4/CD8比例逐步降低或倒置，正常儿童比例为1.4～2.0。 Moodley等报道出生时抗体滴度增高，但与非感染患儿相比无明显差别，于生后6个月内表现出抗
高架十字迷宫实验相关：复方抗焦虑胶囊对急...（二）
2方法2.1造模与分组大鼠单笼饲养,将大鼠随机分为空白组、模型组、胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药物组,共6组,每组8只。其中低、中、高剂量组分别按0．75、1．5、3g·kg-1·d-1给予灌胃,DZP组给予1．0mg·kg-1·d-1灌胃,空白组和模型组灌服等容积的生理盐水,连续7d灌胃
常见的高压电泳仪/电泳仪
产品名称： JY-ECP3000型高压电泳仪 输出类型： 恒压/恒流/恒功率输出 输出范围： 20~3000V / 1~200mA/1~200W 分辨率： 电压1V, 电流1mA,电功率1W 定时范围： 1分钟～99小时59分钟 显示： 带背光的LCD液晶屏(128×64 像素
高速冷冻离心机提取植物蛋白质方法
一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
离心机用于植物组织蛋白质的提取
一、植物组织蛋白质提取方法（summer） 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm
副肿瘤性小脑变性的病因及发病机制
病因 病因目前并不十分清楚目前倾向于副肿瘤病变的病因是全身性或潜在的肿瘤导致的自身免疫性反应有报道某些妇科肿瘤合并小脑变性的患者血清和CSF中存在自身抗体，称为抗-Yo抗体。抗-Yo抗体是特异性抗小脑Purkinje细胞抗体(anti-Purkinje cell antibody，APCA)，
丁型病毒性肝炎的辅助检查
丁型肝炎的特异性诊断方法为从肝脏和血清检测HDAg或HDV-RNA，或从血清检测抗-HD、抗-HDIgM，均做为诊 断的依据。 1、HDAg 用免疫酶法或放射免疫法检测血清HDAg，如为阳性，有助于早期诊断。慢性HDV感染时，由于血清中抗-HD滴度高，HDAg多以免疫复合物形成存在，须用免疫
免疫荧光的原理
免疫荧光（Immunofluorescence,IF）原理免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在
高速冷冻离心机提取植物蛋白质方法
一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
介绍牛血清白蛋白的成分结构
牛血清白蛋白(BSA)，是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66.446KDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用。 是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着;α2巨球蛋白抑制胰蛋