核酸鉴定方法之浓度/纯度及完整性鉴定
核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要,因此,对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。本文简单的回顾学习一下核酸鉴定的方法。核酸鉴定包括:浓度/纯度鉴定+完整性鉴定 1.浓度/纯度鉴定 (1)紫外分光光度计:原理:由于核酸中的碱基都具有共轭双键,所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线,其吸收高峰在260nm处,吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处,所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。由于核苷酸最大吸收波长为260nm,根据朗伯-比尔定律可计算出在波长260nm的紫外线下,1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA, 40µg/ml的单链RNA。紫外分光光度法只适用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。 计算公式:dsDNA(µg/µl)=OD260x50x稀释倍数/1000R......阅读全文
蛋白鉴定方法之氨基酸组分分析
1977年首次作为鉴定蛋白质的一种工具,是一种独特的“脚印”技术。 利用蛋白质异质性的氨基酸组分特征,成为一种独立于序列的属性,不同于肽质量或序列标签。 Latter首次表明氨基酸组分的数据能用于从2-DE凝胶上鉴定蛋白质。 通过放射标记的氨基酸来测定蛋白质的组分,或者将蛋白质印迹到PVDF膜上
亲子鉴定及样本采集方法(二)
口腔采样 采集DNA非常简单,无痛、安全、卫生,一分钟即可完成 注意:避免用手触及口腔棉签。所有测试人员请先用清水漱口。取样后请尽快邮寄! 收集样本的基本卫生条件:清洁的双手,新的口腔棉签(药店出售的单头棉签)、干净的信封。 先在干净的封口塑料袋或信封上做好标记,标记样本采集日期、样
亲子鉴定及样本采集方法(一)
亲子鉴定又称“亲生子鉴定”。所谓亲子鉴定,就是根据人类遗传学的理论和实践,从子代和亲代的形态构造或生理机能方面的相似特点,分析遗传特征,对可疑的父与子或母与子之间的亲生关系进行判断,并做出肯定或否定的结论。运用生物学、遗传学以及有关学科的理论和技术,根据子代与亲代之间,在形态结构或生理机能方
微生物鉴定之生化实验大全
不同的细菌具有各自的独特的酶系统,因而对底物的分解能力各异,其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性,可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling & Gottlieb《Internatio
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定
目的和要求 了解核糖核酸(RNA)的提取方法及其组成成分的定性测定。 原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时,可以生成磷酸
脂肪测定仪之鉴定粮食品质的方法
粮食质量优劣很大程度上与粗脂肪含量有关,因此将粗脂肪含量作为评价粮食质量优劣的重要指标是非常合适的,但是传统的粗脂肪检测方法试验周期长、操作复杂、不能快速检测,已经不能适应现代粮食生产、交易等检测工作的需要,而脂肪测定仪的出现,则建立一种快速、准确鉴定粮食品质的方法,脂肪测定仪也成为当前粮食质量检测
亲子鉴定的方法
鉴定的方法主要有以下几种: (1)血型鉴定。血型鉴定,就是根据血型的遗传规律对亲生关系的判定。ABO式的血型遗传是受A、B和O三个等位基因控制的。每个人都有其中任何两个基因,这两个基因可以是相同的。在两个染色体配对时,可组合有6种基因,即AA、AO、BB、BO、AB、OO,这6种基因就是决定生
显微鉴定的方法
制片 进行显微鉴定,首先根据观察的对象和目的,选择具有代表性的生药,制作不同的显微制片,包括组织制片、表皮制片和粉末制片 。组织制片的方法主要有徒手制片、滑走制片、冰冻制片及石蜡制片等。对植物类中药,如根、根茎、茎藤、皮、叶等类,一般制作横切片观察,必要时制纵切片;果实、种子类须制作横切片及纵切片
鉴定多糖的方法
1、方法提要食品中相对分子质量>1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀,与水溶液中单糖和低聚糖分离,用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖,用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量,其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比,以此计算食品中粗多糖含量。2、主要仪器
Rh系统血型鉴定的方法及操作
红细胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清检测来鉴定。虽然Rh血型系统中有许多种抗原,但常规只用抗D血清检查有无D抗原。当有特殊需要如家系调查、父权鉴定、配血不合等情况时才需用抗C、抗c、抗E、抗e等标准血清做全部表型测定。Rh抗体属IgG,不能在盐水介质中与红细胞发生凝集,因此必须采用
紫外可见分光光度计纯度鉴定
用紫外吸收光谱确定试样的纯度是比较方便的。 如蛋白质与核酸的纯度分析中,可用A280/A260或A230/A260的比值,鉴定其纯度。 蛋白质浓度 = 1552×A280-757.3×A260 (ug/ml) DNA浓度 = 62.9×A260-36.0×A280 (ug/ml) 蛋白
血型鉴定Rh血型鉴定
Rh血型鉴定介绍: Rh血型鉴定一般指Rh系统中D抗原的检测,根据病人红细胞是否带有D抗原,分为Rh阳性和Rh阴性。Rh血型鉴定正常值: Rh血型分为Rh阳性、Rh阴性。Rh血型鉴定临床意义: (1) 我国汉族人的Rh阴性率为0.34%,绝大多数人为Rh阳性,故由Rh血型不合引起的输血反应相对较AB
酵母核糖核酸(RNA)的提取、水解及组成成分的鉴定
原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时,可以生成磷酸、戊糖和碱基。各种成分以下列反应鉴定: (1) 磷酸与钼酸
脂肪测定仪之鉴定粮食品质的方法介绍
粮食质量优劣很大程度上与粗脂肪含量有关,因此将粗脂肪含量作为评价粮食质量优劣的重要指标是非常合适的,但是传统的粗脂肪检测方法试验周期长、操作复杂、不能快速检测,已经不能适应现代粮食生产、交易等检测工作的需要,而脂肪测定仪的出现,则建立一种快速、准确鉴定粮食品质的方法,脂肪测定仪也成为当前粮食质量检测
芦丁的提取及鉴定
碱-酸法 实验材料 芦丁 试剂、试剂盒 乙醇 盐酸
DNA酶切及鉴定
实验概要限制酶主要存在原核细胞中。多数来源于细菌,有的来源于蓝藻和链霉菌,极少数来源于支原体等微生物中,存在原核细胞的限制酶能在特异的识别位点切断外源DNA,如感染的噬菌体。而宿主细胞内的DNA则因它的一些特异识别位点常常由于其中一个碱基的甲基化被保护起来,从而使此位点不再成为限制酶的底物。限制性内
芦丁的提取及鉴定
概述芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为植物Sophorajaponica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)
芦丁的提取及鉴定
概述芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为植物Sophorajaponica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)
葡萄膜炎的鉴定方法
根据临床表现和检查结果,可以确定诊断。
抗血清的鉴定方法
1.抗体特异性的鉴定常用双向免疫扩散法。(1)粗抗原及纯抗原之间皆有一条沉淀线,且两者互相融合,则已产生单价特异性抗体;(2)若纯化抗原出现一条,而粗抗原出现多条线,且一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接,需去除杂抗。(3)若不出现沉淀线,表示免疫失败。2.抗体效价的测定颗粒性抗原采用凝集试验,可溶性抗原
腺病毒的鉴定方法
对难于培养的肠道腺病毒,从粪便标本中粗提后,经电子显微镜或免疫电镜观察。病毒分离与鉴定1.分离培养 标本应尽早从感染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物,粪便和尿液等,加抗生素处理过夜,离心取上清接种敏感细胞(293、Hep-2或HeLa细胞等),37℃孵育后可观察到典型CPE,即细胞变圆、团聚、有拉丝
常用隐球菌鉴定方法
1)尿素酶试验:新型隐球菌可产生尿素酶,而白色念珠菌为阴性; (2)糖同化及发酵试验:新型隐球菌、浅白隐球菌等可同化纤维二糖、肌醇等,但均不能发酵糖类; (3)酚氧化酶试验:接种左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基,经2~5d,新型隐球菌呈棕黑色菌落。
亲子鉴定毛发采集方法
注意事项:避免用手触及样本的毛囊。 基本卫生条件:清洁的双手,洁净信封。 先在干净的信封上作好标记,标记样本采集日期、样本身份如:父亲、孩子的名字。 从头发、睫毛、腋毛等处,拔下至少5根毛发(毛发末端用肉眼可见清晰的毛囊)。 注意:采集过程中不要用手触及毛发的毛囊部,确认能在毛发末端用肉眼可看见清
蛋白质鉴定方法
最简单的方法,也是人们最耳熟能详的方法,就是对物体进行灼烧,看是否能问到烧焦的羽毛味,如果可以问到烧焦的羽毛味,那么证明有蛋白质的存在。2中学的化学课上也教过我们不少的方法,比如说吧蛋白质和浓HNO3进行反应,如果能够变性产生黄色不溶性物质,那么该物体是蛋白质。3还有一种方法就是把含有蛋白质的屋子磨
细胞活力的鉴定方法
染色排除法(最常用) 台盼蓝法:死细胞染成蓝色,活细胞不着色 苯胺黑法:死细胞染成黑色,活细胞不着色 伊红Y法: 荧光排除法: 生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光;生活力弱的细胞发出荧光也较弱;死亡细胞无荧光。 细胞内酶与特定试剂的显色反应: MTT比色实验:琥珀酸脱氢酶可使MT
ABO血型的鉴定方法
实验原理ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型,存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时,会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素,B型标准血清中含有抗A凝集素,因此可以用标准血清中的凝集素与
如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度
质粒DNA分子具有三种构型:共价闭合环开DNA(cccDNA,SC构型)、开环DNA(OC构型)和线性分子(L构型).在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的.在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁移率.其中跑在最前沿的是共价闭合DNA,其后依次是线性
如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度
我硕士专业是分子生物学这方面的,我可以很负责地告诉你,质粒DNA分子具有三种构型:共价闭合环开DNA(cccDNA,SC构型)、开环DNA(OC构型)和线性分子(L构型).在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的.在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁
如何通过琼脂糖凝胶来鉴定质粒DNA的纯度
质粒DNA分子具有三种构型:共价闭合环开DNA(cccDNA,SC构型)、开环DNA(OC构型)和线性分子(L构型).在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的.在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁移率.其中跑在最前沿的是共价闭合DNA,其后依次是线性
痕迹鉴定的足迹鉴定法
足迹是人们在站立和行走时,与地面或其他承受面接触形成的脚掌或鞋、袜等形象痕迹。足迹是刑事案件调查中经常使用的一种重要物证。足迹有两大类特征:一是足迹的形象特征,即单个足迹所反映的赤脚、鞋或袜外表结构特征;一是足迹的步伐特征,即单个或成趟足迹,反映人的行走习惯规律的特征,这些特征是经过长期练习和反复实