核酸鉴定方法之浓度/纯度及完整性鉴定

核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要,因此,对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。本文简单的回顾学习一下核酸鉴定的方法。核酸鉴定包括:浓度/纯度鉴定+完整性鉴定 1.浓度/纯度鉴定 (1)紫外分光光度计:原理:由于核酸中的碱基都具有共轭双键,所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线,其吸收高峰在260nm处,吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处,所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。由于核苷酸最大吸收波长为260nm,根据朗伯-比尔定律可计算出在波长260nm的紫外线下,1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA, 40µg/ml的单链RNA。紫外分光光度法只适用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。 计算公式:dsDNA(µg/µl)=OD260x50x稀释倍数/1000R......阅读全文

裸子植物鉴定实验_松科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤(三)松科 Pinaeeae油松 ( 图 2-2

细菌鉴定仪的鉴定原理

  Biolog公司独创的碳源利用方法,利用微生物对不同碳源代谢率的差异,针对每一类微生物筛选95种不同碳源,配合四唑类显色物质(如TTC、TV),固定于96孔板上(A1孔为阴性对照),接种菌悬液后培养一定时间,通过检测微生物细胞利用不同碳源进行新陈代谢过程中产生的氧化还原酶与显色物质发生反应而导致

细菌鉴定仪的鉴定原理

  利用微生物对不同碳源代谢率的差异,针对每一类微生物筛选95种不同碳源,配合四唑类显色物质(如TTC、TV),固定于96孔板上(A1孔为阴性对照),接种菌悬液后培养一定时间,通过检测微生物细胞利用不同碳源进行新陈代谢过程中产生的氧化还原酶与显色物质发生反应而导致的颜色变化(吸光度)以及由于微生物生

细菌鉴定系统的鉴定原理

由于细菌的理化性质不同,分解底物导致 pH 改变而产生不同的颜色。经光电比色法测定来判断反应结果。每张卡上有32项生化反应,采用终点判读法,培养4h 或24h 待反应完成后,由读数仪判读结果。具体为根据所要鉴定的目标菌选取21种典型生化试验,并把生化反应的结果转换为一个8进制数,通过提供的标准数据库

痕迹鉴定的足迹鉴定法

足迹是人们在站立和行走时,与地面或其他承受面接触形成的脚掌或鞋、袜等形象痕迹。足迹是刑事案件调查中经常使用的一种重要物证。足迹有两大类特征:一是足迹的形象特征,即单个足迹所反映的赤脚、鞋或袜外表结构特征;一是足迹的步伐特征,即单个或成趟足迹,反映人的行走习惯规律的特征,这些特征是经过长期练习和反复实

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA

食品微生物鉴定之生化实验汇总(一)

不同的细菌具有各自的独特的酶系统,因而对底物的分解能力各异,其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性,可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling & Gottlieb《Internatio

食品微生物鉴定之生化实验汇总(三)

(三)碳源和氮源的利用实验 唯一碳源利用实验(1)原理:在基础培养基只提供一种待检测碳源,若菌株生长则表明菌株能以此种碳源为唯一碳源,否则不能。(2)培养基:基本培养基:(NH4)2HPO41g;NaCl 1g;MgSO4•7H2O 0.2 g;KH2PO40.5 g;琼脂20g;蒸馏水1000mL

食品微生物鉴定之生化实验汇总(四)

(四)各种酶类实验 氧化酶试验(1)原理:氧化酶(即细胞色素氧化酶),是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌,首先使细胞色素C氧化,再由氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,生成有色的醌类化合物。因此,本试验结果与细胞色素C的存在有关。(2)实验方法:菌落法:直接滴加试剂于被检菌落上;滤纸

食品微生物鉴定之生化实验汇总(二)

(二)蛋白质和氨基酸的代谢实验明胶液化实验(1)原理:某些可以产生一种胞外蛋白水解酶(明胶酶),能使明胶分解为氨基酸,使明胶失去凝固能力而液化,因而使半固体的明胶培养基成为流动的液体。(2)实验方法:取18~24h的斜面培养物穿刺接种,并有两支未接种的空白对照。(3)结果观察:于30℃培养20天后观

这几大功能确保核酸浓度检测仪测量的完整性

 核酸浓度检测仪强大的自动调节光路技术有助于准确测量浓缩样品而无需稀释。这几大功能确保检测仪测量的完整性。  1、在提供准确的定量测定的同时,它可以增强用户对样品质量的了解。及早发现污染物可以避免下游应用程序出现故障,从而节省了故障排除时间。  2、在几秒钟内验证样品结果,识别样品污染物并获得校正后

Science:鉴定出保持细菌基因组完整性的关键分子ppGpp

  在一项新的研究中,来自美国纽约大学朗格尼医学中心和俄罗斯科学院的研究人员发现一种关键的生物化学分子ppGpp能够让细菌修复它们DNA上的致命性损伤,包括抗生素导致的DNA损伤。相关研究结果发表在2016年5月20日那期Science期刊上,论文标题为“ppGpp couples transcri

裸子植物鉴定实验_柏科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤柏科Cupressaeeae侧柏,如图取侧柏新鲜

裸子植物鉴定实验_苏铁科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤苏铁科cycadaceae苏铁为常绿乔木,茎短不

裸子植物鉴定实验_银杏科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤(二)银杏科 Ginkgoaceae银杏 ( 图

SDSPAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定

一、实验目的与原理蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度

(一)原理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度

由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成「连续系统」和「不连续系统」两种电泳系统。「不连续系统」最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及 pH 不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH 也不相同

真菌鉴定的操作方法及临床意义

  操作方法  1.常见标本主要有各种分泌物,皮肤的角质性物质,如毛发、指(趾)甲、鳞屑,及脓汁液、穿刺液等,粪便和尿液,组织块,环境中的各种标本材料等。  2.采集标本应新鲜,最多不超过2h,如不立即送检则必须放入冰箱保存,尽速送检;应在用药前采集标本;标本采集量应充足,血液和脑脊液不少于5ml,

副溶血性弧菌的检验及鉴定方法

(1)增菌培养:取标本0.5~1ml接种40g/LNaCl蛋白胨水中,37℃培养,若有本菌存在,一般数小时即出现明显混浊,即可分离培养.②分离培养:将标本或增菌培养物接种副溶血弧菌选择培养基35℃培养18~24h观察结果。菌落湿润、混浊无粘性,呈绿色;③鉴定:根据其形态、染色、多形性、活泼动力等特点

葡萄球菌属的检验方法及鉴定

葡萄球菌属的检验方法及鉴定是检验主管技师考试要求掌握的内容,以下理相关内容供大家参考。  (1)直接镜检:无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液(离心后取沉渣)涂片,经革兰染色后镜检,如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为:“找到革兰阳性葡萄状排列球菌,疑为葡萄球菌”。  (2)分离培养:血液标本(静脉血

创伤弧菌的制备及鉴定

创伤弧菌属革兰氏阴性弧菌。在液体培养基中菌体大小为0.7*2-3μm,稍弯曲。在固体培养基中呈多样性。有极端单鞭毛。培养特性:营养要求一般,最适生长温度为30℃,兼性厌氧。在无NaCl及超过8%NaCl的培养基中不生长,可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生长,在含6%NaCl的蛋白胨水中

创伤弧菌的制备及鉴定

   创伤弧菌属革兰氏阴性弧菌。在液体培养基中菌体大小为0.7*2-3μm,稍弯曲。在固体培养基中呈多样性。有极端单鞭毛。培养特性:营养要求一般,最适生长温度为30℃,兼性厌氧。在无NaCl及超过8%NaCl的培养基中不生长,可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生长,在含6%NaCl的蛋白

ABO血型鉴定及临床应用

  ABO血型鉴定,即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型,含B抗原的叫B型,含A和B抗原的叫AB型;不含A、B抗原,而含H抗原的称O型  ABO血型鉴定主要用于:  1、临床输血:当循环血量不足或大失血或贫血需进行输血治疗,在输血前必须先选择血型相同的供血者,再进行交叉配血,完全相同后才

卤仿反应的应用及鉴定

1、卤仿反应的特征性明显,可作为可靠的鉴别甲基酮和甲基甲醇的定性试验。以碘仿为例,它从水溶液中沉淀出容易识别的黄色固体。同样地这一试验也可用来区别甲醇和乙醇,因为乙醇能生成碘仿沉淀而甲醇则不生成碘仿沉淀。所有甲基酮都能给出碘仿试验,凡是第二醇能被氧化至甲基酮的同样地能进行卤仿反应。2、卤仿反应有时也

卤仿反应的应用及鉴定

  1、卤仿反应的特征性明显,可作为可靠的鉴别甲基酮和甲基甲醇的定性试验。  以碘仿为例,它从水溶液中沉淀出容易识别的黄色固体。同样地这一试验也可用来区别甲醇和乙醇,因为乙醇能生成碘仿沉淀而甲醇则不生成碘仿沉淀。所有甲基酮都能给出碘仿试验,凡是第二醇能被氧化至甲基酮的同样地能进行卤仿反应。  2、卤

操纵基因的鉴定方法

原来操纵基因是靠阻遏物的专一结合以免除核酸酶(nuclease)的攻击的,通过DNA片段的分离与序列测定,即可确定其结构。但是这是一件极吃力的工作。利用限制性内切酶可以确切分离出蛋白质所接触的部位的片段,就可以鉴定操纵基因的结构,与测定DNA序列的化学法相似,测定操纵基因的基本原则是:如果一条DNA

酸枣核的鉴定方法介绍

性状鉴别种子扁圆形或扁椭圆形,长5-9mm,宽5-7mm,厚约3mm。表面紫红色或紫褐色,平滑有光泽,有的具纵裂纹。一面较平坦,中间有1条隆起的纵线纹;另一面稍凸起。一端凹陷,可见线形种脐;另端有细小凸起的合点。种皮较脆,胚乳白色,子叶2,浅黄色,富油性。气微、味淡。以粒大、饱满、有光泽、外皮红棕色

几种常用的蛋白鉴定方法

   传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。 目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。