PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？
这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！找问题要从大到小：1、PCR扩增体系问题用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的（阳性对照）2、引物问题用以前扩增产物做模板（稀释50倍），证明引物没有问题3、只是模板问题了。因为样本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是样本中的抑制物过多（新鲜时没有溶出来）。不要靠运气找问题，先做第一条很重要。乱找问题常常让人失去信心的。......阅读全文
PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？
这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！找问题要从大到小：1、PCR扩增体系问题用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的（阳性对照）2、引物问题
PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？
这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！找问题要从大到小：1、PCR扩增体系问题用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的（阳性对照）2、引物问
PCR现在又扩增不出来了怎么办
PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！找问题要从大到小：1、PCR扩增体系问题用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器
PCR技术新手指南
PCR的基本概念聚合酶链式反应是一种分子生物学技术，用于体外扩增特定的DNA 片段。PCR技术主要过程是，通过人类合成的一小断单链DNA 片段（叫做引物）与模板DNA特定的区域特异性结合，进而以四种dNTP为底物，通过DNA聚合酶沿着引物和模板形成的双链部分的3’端聚合形成DNA 片段实现DNA体外
PCR新手指南：PCR仪的故障分析
PCR仪是一种在实验室使用频率及使用时间非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面就这几类问题做简单分析。1、制冷半导体故障制冷半导体故障率与制冷半导体的质量、温度变化次
PCR新手指南：快速PCR技术与快速PCR仪的区别
在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间决定于以下几个因素：1、模块升温和降温时间2、模块与PCR管内温度平衡时间3、延伸时间4、循环次数下面就以上几点做一点分析，以便大家了解快速PCR技术与快速PCR仪的区别。1、模块升温和降温度时间PCR仪一般会标明升温速度和降温速度，但标的大多是zui大变
PCR新手指南：快速PCR技术与快速PCR仪的区别
在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间决定于以下几个因素：1、模块升温和降温时间2、模块与PCR管内温度平衡时间3、延伸时间4、循环次数下面就以上几点做一点分析，以便大家了解快速PCR技术与快速PCR仪的区别。1、模块升温和降温度时间PCR仪一般会标明升温速度和降温速度，但标的大多是最大变温速度
PCR新手指南：快速PCR技术与快速PCR仪的区别
在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间决定于以下几个因素：1、模块升温和降温时间2、模块与PCR管内温度平衡时间3、延伸时间4、循环次数下面就以上几点做一点分析，以便大家了解快速PCR技术与快速PCR仪的区别。1、模块升温和降温度时间PCR仪一般会标明升温速度和降温速度，但标的大多是zui大变温
PCR新手指南系列：PCR产物电泳条带分析
PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带：1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有，一般不呈现为细带，为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点，条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚
PCR新手指南系列：PCR产物电泳条带分析
PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带：1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有，一般不呈现为细带，为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点，条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚
PCR新手指南：PCR仪维修对仪器性能的影响
PCR仪是一种在实验室使用频率非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面针对这些故障的维修对仪器性能的影响做简单介绍1、制冷半导体故障由于制冷半导体是半手工生产的，每一片
PCR新手指南：PCR仪维修对仪器性能的影响
PCR仪是一种在实验室使用频率非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面针对这些故障的维修对仪器性能的影响做简单介绍1、制冷半导体故障由于制冷半导体是半手工生产的，每一片
PCR新手指南：PCR仪维修对仪器性能的影响
PCR仪是一种在实验室使用频率非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面针对这些故障的维修对仪器性能的影响做简单介绍1、制冷半导体故障由于制冷半导体是半手工生产的，每一
PCR新手指南：PCR仪热盖的作用及种类
PCR新手指南：PCR仪热盖的作用及种类早期的PCR仪是没有热盖的，通过在PCR反应液中加入石蜡油（或矿物油）来防止PCR反应液蒸发。但反应完成后石蜡油不好除干净（我做实验时是将PCR反应液与石蜡油一起冷冻，取出后用手将管捂热，石蜡油先化开，立即将石蜡油用枪吸出。但并不能完全吸干净）。后来出现了带热
PCR新手指南：PCR仪维修对仪器性能的影响
PCR仪是一种在实验室使用频率非常高的仪器，因此故障率也是比较高的。PCR仪的故障主要有以下几类：1、制冷半导体故障2、温度传感器故障3、控制板故障4、电源板故障5、热盖故障6、软件故障7、其他故障下面针对这些故障的维修对仪器性能的影响做简单介绍1、制冷半导体故障由于制冷半导体是半手工生产的，每一片
pcr扩增8000bp怎么办
可以尝试Roche的长片断扩增pfu酶,当然可能会稍微贵点.一般的酶可能扩不了这么长.我还有个方法就是,你的目的片断中找一个单酶切的位点把目的片断分为两段扩增,再分两次连到载体中,这样会好扩增得.
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式
在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入95度5分钟，则模块的温度达到95度后
实验室新手指南之PCR仪
实验室新手指南之PCR仪操作步骤开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示 10 秒中后，显示 RUN-ENTER 菜单：准备执行程序。放入样本管，关紧盖子。程序输入与选择如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：按
实验室新手指南之PCR仪
操作步骤开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示 10 秒中后，显示 RUN-ENTER 菜单：准备执行程序。放入样本管，关紧盖子。程序输入与选择如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：按《Proceed》选择
实验室新手指南之PCR仪
操作步骤开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示 10 秒中后，显示 RUN-ENTER 菜单：准备执行程序。放入样本管，关紧盖子。程序输入与选择如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：按《Proceed》选择
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式介绍
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式介绍
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式介绍
PCR新手指南：PCR仪的三种控温模式在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入
PCR－突然扩增不出产物是什么原因
扩增不出产物那就根据PCR体系的组分和条件去思考分析。具体如下：1）模板DNA：是否被降解：DNA是不是溶解在1X TE（10 mM Tris-HCl，Hp8.0, 1 mM EDTA）里面的，因为核酸酶是金属离子依赖的，保存在1X TE里面既能通过EDTA的螯合作用保护DNA不被降解，又为DNA提
基因的PCR扩增实验扩增不出DNA条带是什么原因
可能有很多原因，最常见的原因是1.模板不干净，2.引物设计不当，3.退火温度过高，等等
PCR新手指南：最佳复性温度的选择标准
在使用温度梯度的方法寻找最佳复性温度时，新手往往会选择扩增产物最多的温度条件，然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是最佳复性温度的选择标准不对。本人10多年前做过数千个基因的扩增，通过温度梯度实验发现，能扩增出来的温度范围一般在3-30度。选择的标准应该是可扩增范围的中
PCR反应假阴性，不出现扩增条带的原因分析
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模 板核酸变性
PCR新手指南：各种热启动酶存在的意义
市场上热启动的酶种类很多，但新手并不完全了解热启动酶存在的意义。非热启动的Taq酶在较低温度时也有活性：我有一本1992年出版的《PCR基因扩增实验操作手册》中提到，酶在70度时的合成速度为60核苷/秒/酶分子，55度时为22，37度时为1.5，22度时为0.25。也就是说此时引物还没有正常配对（其
PCR新手指南：Z佳复性温度的选择标准
PCR新手指南：zui佳复性温度的选择标准zui佳复性温度的选择标准应该是可扩增范围的中间温度。在使用温度梯度的方法寻找zui佳复性温度时，新手往往会选择扩增产物zui多的温度条件，然而在此后的非梯度扩增时扩增效果又不太理想。出现这种现象的主要原因是zui佳复性温度的选择标准不对。本人10多年前做