免疫组化技术实验原理及分类

免疫组化技术实验原理: 抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取 出来,以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,形成抗原-?一抗-?二抗复合物,将抗原放大,由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒)。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布......阅读全文

萃取技术的分类及介绍

萃取,又称溶剂萃取或液液萃取,亦称抽提,是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的单元操作。即,是利用物质在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使溶质物质从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中的方法。广泛应用于化学、冶金、食品等工业,通用于石油炼制工业。另外将萃取后两种互不相溶

质谱仪的分类及技术应用

    质谱仪又被称为质谱计,通常可用于分离和检测不同同位素。它根据带电粒子在电磁场中能够偏转的原理,按物质原子、分子及其碎片的质量差异进行分离和检测物质组成的仪器。质谱仪按应用范围分为同位素质谱仪、无机与有机质谱仪。   质谱仪用高能电子流轰击样品分子,使分子失去电子变为带正电荷的分子离子和碎片离

免疫组化专题:流式细胞仪检测技术实验(一)

标签: 流式 细胞仪流式细胞仪(flow cytometer)是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置,由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物,因此,用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。实验方法

免疫组化专题:流式细胞仪检测技术实验(二)

⑤主机设定:一般是已设定好的适合测定淋巴细胞的条件,包括探测器的电压。探测器的电压是调空光电倍增管所能检测荧光密度的范围。⑥选择检测的波长和表达方式(plot):如果用一种荧光抗体,一般选直方图(histogram);如果用两种荧光抗体,常选点状二维图(dot plot)或轮廓线图(contour

FPLC技术基本实验原理

  FPLC(fast protein liquid Chromatography)为一种特殊的GX液相层析(HPLC,high pressureliquid chromatography)装置,快速分离纯化和定量测定蛋白质组分是它的主要用途。他的本原理相同于HPLC,就是在高压条件下(20—200

ELISA实验原理及实验过程

实验原理ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通

定量PCR的技术原理及实验的具体步骤

多年以来PCR技术只作为一种高灵敏的定性技术而被应用,既制约了PCR质量控制的建立,又大大制约了PCR技术的应用,近年来定量PCR的出现为PCR的应用开拓了广阔的前景。 原理:经典PCR一般分为扩增和检测两个阶段,常用溴乙锭染色,凝胶电泳为定性检测手段。由于定性实际上就是定量的一种粗约表现,因此只要

常规转染技术的分类和原理差异

常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同

脂肪测定仪原理及分类

  粗脂肪测定仪是根据索氏抽提原理,用重量测定方法来测定脂肪含量的。脂肪能够在特定的有机溶剂下溶解,通过反复提取,最后脂肪分离出来,然后通过烘干、称量,计算出脂肪含量。粗脂肪测定仪有时也被称为脂肪抽提仪,因为脂肪是被反复抽提,最后得到的。粗脂肪测定仪已成为食品、油脂、饲料等行业测定脂肪的理想设备。粗

差压计的原理及分类

充满管道的流体,当它流经管道内的节流件时,流速将在节流件处形成局部收缩,因而流速增加,静压力降低,于是在节流件前后便产生了压差。流体流量愈大,产生的压差愈大,这样可依据压差来衡量流量的大小。这种测量方法是以流动连续性方程(质量守恒定律)和伯努利方程(能量守恒定律)为基础的。按产生差压的作用原理分类 

涂层测厚仪的分类及测量原理

涂层测厚仪可无损地测量磁性金属基体(如钢、铁、合金和硬磁性钢等)上非磁性涂层的厚度(如铝、铬、铜、珐琅、橡胶、油漆等) 及非磁性金属基体(如铜、铝、锌、锡等)上非导电覆层的厚度(如:珐琅、橡胶、油漆、塑料等)。涂镀层测厚仪具有测量误差小、可靠性高、稳定性好、操作简便等特点,是控制和保证产品质量必不可

发电机的原理及分类

  发电机是将其他形式的能源转换成电能的机械设备,它由水轮机、汽轮机、柴油机或其他动力机械驱动,将水流,气流,燃料燃烧或原子核裂变产生的能量转化为机械能传给发电机,再由发电机转换为电能。发电机在工农业生产,国防,科技及日常生活中有广泛的用途。   发电机的形式很多,但其工作原理都基于电磁感应定律和

靛青绿试验的分类及原理

  分类  血液生化检查 > 色素测定  原理  静注靛青绿(ICG)后即迅速与白蛋白结合而运转,在通过肝脏时,90%以上被肝细胞所摄取,再以原形排至胆汁中,随胆汁排泄。肝功能障碍时,ICGR增加,静脉快速注入ICG 0.5mg/kg,15min后从对侧静脉采血测定ICGR。也可用ICG清除率检查仪

高压灭菌锅的分类及原理

高压灭菌锅又名高压蒸汽灭菌锅,可分为手提式灭菌锅和立式高压灭菌锅。利用电热丝加热水产生蒸汽,并能维持一定压力的装置。主要有一个可以密封的桶体,压力表,排气阀,安全阀,电热丝等组成。

X射线测厚仪测量原理及分类

 对材料表面起保护,装饰作用的覆盖层,如涂层,镀层,敷层,贴层,化学生成膜等,在一些国家和国际标准中称为覆层(coating)。  覆层厚度测量已成为加工工业、表面工程质量检测的重要环节,是产品达到优等质量标准的必要手段。为使产品国际化,我国出口商品和涉外项目中,对覆层厚度有了明确要求。  覆层厚度

色差仪的原理及分类介绍

 颜色是一种有关感觉和主观解释的问题,人们依不同的标准和经历以迥然不同的字眼来表达同一种颜色。色差仪将颜色数据化,这样能更直观的表达出颜色的不同。    色差仪是模拟人眼对红、绿、蓝光感应的光学测量仪器。色彩世界是由色调、亮度和色饱和度这三个属性构成的。为色调、亮度和色饱和度建立标度,我们就能用数字

X射线管的原理及分类

  原理  X 射线管包含有阳极和阴极两个电极,分别用于用于接受电子轰击的靶材和发射电子的灯丝。两级均被密封在高真空的玻璃或陶瓷外壳内。X 射线管供电部分至少包含有一个使灯丝加热的低压电源和一个给两极施加高电压的高压发生器。当钨丝通过足够的电流使其产生电子云,且有足够的电压(千伏等级)加在阳极和阴极

脂肪测定仪原理及分类

  粗脂肪测定仪是根据索氏抽提原理,用重量测定方法来测定脂肪含量的。脂肪能够在特定的有机溶剂下溶解,通过反复提取,最后脂肪分离出来,然后通过烘干、称量,计算出脂肪含量。粗脂肪测定仪有时也被称为脂肪抽提仪,因为脂肪是被反复抽提,最后得到的。粗脂肪测定仪已成为食品、油脂、饲料等行业测定脂肪的理想设备。粗

激光粒度仪的分类-及原理

  主要分类  纳米激光粒度仪  采用动态光散射原理技术和光子相关光谱技术,因颗粒在悬浮液中做布朗运动,使得光强随时间产生脉动,领用数字相关器技术处理脉冲信号,得到颗粒运动的扩散信息,利用Stokes-Einstein方程计算得出颗粒粒径大小及分布。  喷雾激光粒度仪  采用Mie氏散射原理和典型的

石蜡切片免疫组化实验4

实验方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法:一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC(链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素)+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从

免疫组化双染实验流程

一、脱蜡和水化方法同SP法。二、第一抗体的染色1、将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10 min,PBS冲洗3 min×3次;2、加100 ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上,室温孵育10 min,倒掉(不能冲洗);3、加入一抗(按照说明书推荐浓度和孵育条件);4、使用含有0.05

免疫组化双染实验protocol

第一抗体的染色:  1、 将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10分钟,PBS冲洗2分钟×3次  2、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上,室温孵育10分钟,倒掉(不能冲洗)  3、 加入一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件)  4、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPB

石蜡切片免疫组化实验步骤

脱蜡和水化1. 将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min,二甲苯Ⅱ(10 min)。2. 再次浸入无水乙醇Ⅰ(5 min)-无水乙醇Ⅱ(5 min)-95%酒精(5 min)-80%酒精(5 min)-70%酒精(5 min),然后去离子水冲洗2次,每次2 min。 抗原修复 (可选)3. 将组织切片放入

免疫组化实验注意事项

当免疫组化染色没有出现预期结果时,应系统地查找原因,而每一次只能排除一种可能的原因。那么在做免疫组化实验注意事项有哪些呢?下面我们来详细了解一下:    对照/标本无染色    ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。    ② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否孵育

石蜡切片免疫组化实验2

链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法实验方法原理SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。试剂、试剂盒二甲苯酒精PBS双氧水枸橼酸缓冲液羊血清工作液辣根过氧化物酶链霉素卵白素苏木素DAB仪器、耗材冰箱显微镜烧杯玻璃缸

石蜡切片免疫组化实验3

卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法实验材料蜡块切片试剂、试剂盒多聚甲醛蒸馏水蔗糖过氧化氢甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白叠氮纳一抗二抗仪器、耗材冰箱显微镜烧杯实验步骤1.  4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01 M KPBS清洗5

液相色谱仪液体样品预处理技术富集分类及原理分析

柱上富集可以分为液相色谱柱上富集和毛细管电泳柱上富集。液相色谱柱上富集与固相篇萃取原理基本相同,此处不再作过多讨论,主要介绍毛细管电泳柱上富集。毛细管电色谱柱上富集可以分为进样过程富集和连续堆积两类。样品溶液与运行缓冲溶液组成存在差别时,可能会导致溶质分子作用力场的改变或溶质形态的变化,造成溶质在两

免疫组化技术规范(二)

三、免疫组化实验中的抗原修复1.酶消化:如胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白水解酶2.抗原热修复:高压法、微波法、水煮法众所周知,免疫组化染色中最关键的莫过于抗原修复,而绝大多数常用抗体的修复是通过加热来完成的,热抗原修复优于酶消化,更有效,染色结果更易一致,操作单一。3.修复时间:既要获得最强的染色结果,又

什么叫荧光免疫组化技术

  用荧光标记的二抗 做免疫组化,通过荧光显微镜观察实验结果。就是荧光免疫组化。

免疫组化技术规范2

8、脱蜡:免疫组化的脱蜡步骤与常规H&E脱蜡步骤相同,免疫组化实验室中脱蜡需与H&E常规脱蜡分离,以保证脱蜡彻底,否则可能导致染色结果的异常。三、免疫组化实验中的抗原修复1、酶消化:如胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白水解酶2、抗原热修复:高压法、微波法、水煮法众所周知,免疫组化染色中最关键的莫过于抗原修复,