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离子交换色谱

洗脱方式的选择,离子交换色谱洗脱方式有三种:一是改变缓冲液pH,使蛋白质从吸附状态变为解吸附状态。如在阴离子交换色谱中,通过降低流动相pH使吸附在柱子上的带负电荷的蛋白质带正电,从而达到解吸附,在阳离子交换色谱中则是通过升高流动相pH的方法达到解吸附;二是增加缓冲液的离子强度,将吸附强的分子从离子交换剂上替换下来;三是缓冲液pH和离子强度同时改变。无论哪一种方法,都可用阶段洗脱和梯度洗脱两种方式进行。阶段洗脱是用几个不同pH缓冲液或几个不同盐浓度的缓冲液逐步进行洗脱。即pH和离子强度变化不连续。而在梯度洗脱中,缓冲液的洗脱能力是连续增加的,由于后者分辨率更好,因此被广泛采用。 在经典色谱中需用梯度混合器来制造线性梯度,梯度混合器是由两个容器构成,两个容器安放在同一个水平上,一个盛起始缓冲液,另一个盛含较高离子强度或不同pH的缓冲液。二者用管子相连,以保持溶液的流体静力平衡。当缓冲液从第一个容器流入柱内,第二个容器的缓冲液进入第一......阅读全文

离子交换色谱

离子交换色谱             实验方法原理 离子交换色谱是将离子交换基因(CM、SP、Q、DEAE等)键合于一定的惰性载体(纤维素、交联葡聚糖,交联琼脂糖等)之上,并以此作

离子交换色谱

洗脱方式的选择,离子交换色谱洗脱方式有三种:一是改变缓冲液pH,使蛋白质从吸附状态变为解吸附状态。如在阴离子交换色谱中,通过降低流动相pH使吸附在柱子上的带负电荷的蛋白质带正电,从而达到解吸附,在阳离子交换色谱中则是通过升高流动相pH的方法达到解吸附;二是增加缓冲液的离子强度,将吸附强的分子从离子交

离子交换色谱

实验方法原理离子交换色谱是将离子交换基因(CM、SP、Q、DEAE等)键合于一定的惰性载体(纤维素、交联葡聚糖,交联琼脂糖等)之上,并以此作为固定相,依据样品所带电荷的不同,从而与固定相上的离子交换基团相互作用的程度不同而进行分离的一种色谱方法。离子交换色谱技术已广泛用于蛋白质、多肽、寡核苷酸、病毒

高效离子交换色谱

  应用离子交换的原理,采用低交换容量的离子交换树脂来分离离子,这在离子色谱中应用最广泛,其主要填料类型为有机离子交换树脂,以苯乙烯二乙烯苯共聚体为骨架,在苯环上引入磺酸基,形成强酸型阳离子交换树脂,引入叔胺基而成季胺型强碱性阴离子交换树脂,此交换树脂具有大孔或薄壳型或多孔表面层型的物理结构,以便于

离子交换色谱概述

  离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法,其原理是指被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合,这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的,在改变pH 或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时,离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同,

离子交换色谱(一)

实验方法原理 离子交换色谱是将离子交换基因(CM、SP、Q、DEAE等)键合于一定的惰性载体(纤维素、交联葡聚糖,交联琼脂糖等)之上,并以此作为固定相,依据样品所带电荷的不同,从而与固定相上的离子交换基团相互作用的程度不同而进行分离的一种色谱方法。离子交换色谱技术已广泛用于蛋白质、多肽、寡核苷酸、病

离子交换色谱(二)

其他 一、离子交换剂的选择 1.  剂型的选择 在决定选择离子交换剂的类别之前,先要了解所研究的生物大分子保持生物活性和可溶解性的pH范围,然后根据其等电点以及其在上述pH范围内的电泳行为观察大分子的带电情况,再据此选择合适的离子交换剂。具体方法是;在流动相pH条件下进行电泳,向阳极泳动的蛋白质,可

离子交换色谱仪离子交换介质

离子交换色谱仪离子交换介质由基质、活性基团和可交换离子组成,按基质的组成和性质可分为疏水性离子交换剂(树脂)和亲水性离子交换剂。一、疏水性离子交换剂(树脂):疏水性离子交换剂是一种与水亲和力较小的合成树脂。最常见的是由苯乙烯与交联剂二乙烯苯反应生成聚合物,在此结构中再以共价键引入不同的电荷基团制成的

高效离子交换色谱仪离子交换剂

高效离子交换色谱仪离子交换剂由基质、活性基团和可交换离子(反离子)组成,按基质的组成和性质可分为疏水性离子交换剂和亲水性离子交换剂。第一节 疏水性离子交换剂疏水性离子交换剂是一种与水亲和力较小的合成树脂。最常见的是由苯乙烯与交联剂二乙烯苯反应生成聚合物,在此结构中再以共价键引入不同的电荷基团制成的。

离子交换色谱仪酸性离子交换树脂

离子交换色谱仪酸性离子交换树脂有强酸性离子交换树脂、弱酸性离子交换树脂和中等酸性离子交换树脂。一、强酸性离子交换树脂:强酸性离子交换树脂一般是以磺酸基(-SO3H)为活性基团的阳离子交换树脂。含磺酸基的强酸性离子交换树脂是以苯乙烯为母体,以二乙烯苯为交联剂共聚后再经磺化引入磺酸基制成的。常用R-S