酶法组织消化技术:从粗制的胶原酶到高纯度消化产品一
酶法组织消化中常用的胶原酶(Collagenase),能特异性地降解胞外胶原蛋白,使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离,而不损坏细胞表面结构的完整性。由于细胞外基质的成分复杂,除胶原蛋白外,还含有弹性蛋白,糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型,不同物种来源,不同年龄的组织中胞外基质组份不同。所以商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物,是胶原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物,能降解胶原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物质,适用于多种组织的消化应用。 但是对于不同实验研究中分离的特定组织,需要根据经验来选择合适的胶原酶产品,并对酶浓度、酶体积、酶作用时间进行摸索,才能找到最佳的消化方案。 罗氏胶原酶产品选择示例罗氏胶原酶产品提取自溶组织梭状芽孢杆菌(Clostridium histolyticum),并根据不同的酶活和验证的功能应用分为Collagenase A/B/D/P/H五类产品。......阅读全文
用胰酶消化贴壁细胞一般消化多长时间
因细胞而异如成纤维细胞很好消化(一分钟),而上皮细胞对胰酶很赖受,要很长时间。心肌细胞只要0.25的酶,2-3分钟即可,不用放入培养箱
神经胶质细胞培养实验_酶消化法
神经胶质细胞培养可以:(1)获得神经胶质细胞;(2)用于神经胶质细胞电生理特性,如膜电位、去极化等;(3)用于免疫应答研究。实验方法原理胶质细胞具有复杂多样的结构和表达丰富的分泌产物,它含有大部分神经递质、神经肽、激素及神经营养因子受体、离子通道、神经活性氨基酸亲和载体、细胞识别分子,并能分泌多种神
神经胶质细胞培养实验_酶消化法
神经胶质细胞培养可以:(1)获得神经胶质细胞;(2)用于神经胶质细胞电生理特性,如膜电位、去极化等;(3)用于免疫应答研究。实验方法原理胶质细胞具有复杂多样的结构和表达丰富的分泌产物,它含有大部分神经递质、神经肽、激素及神经营养因子受体、离子通道、神经活性氨基酸亲和载体、细胞识别分子,并能分泌多种神
肿瘤细胞原代培养实验——酶消化法
实验方法原理本法是利用成纤维细胞对胶原酶较为敏感的特点,通过消化进行选择。可用0.5mg/ml的胶原酶消化处理,边消化边在倒置显微镜下窥视,当发现成纤维细胞被除掉后,即终止消化;用Hanks洗涤处理一次后,更换新培养液,继续培养,可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净,可再次重复。实验材料组织试剂、
细胞原代培养实验——胰酶消化法
细胞原代培养可以:(1)为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段;(2)为传代培养创造条件;(3)服务于临床实践,用于药物筛选等。实验方法原理将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、
消化炉微波消化法的优势及注意事项
一般而言消化炉的应用十分常见,在物质消化过程中的优势也是十分常见的。目前,微波消化技术已广泛应用于地质、冶金、煤炭、石油、坏保等领域的分析工作中。针对生物样品的特点,改革了常用的微波消化方法,取得满意结果。 准确取一定量样品于合适的消化罐的聚四氟乙烯内胆中,加入一定量的消化试剂后晃动几次,使样品与试
硬质组织脱钙与软质组织消化
不论是以治病为先的“医疗”,还是以美容为本的“医美”,组织修复始终是一个重要的课题。再生医学与先进材料的研究在“十三五“国家重点研发计划、国家杰出青年基金、国家自然科学基金等多项国家计划中也占据着一席之地,是医学、生物学、材料学成功交叉的领域。缺损组织修复、软(硬)组织再生,涉及干细胞成骨、种植体骨
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤 实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀(实验方案 A, 第
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液引物仪器、耗材试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀(实验方案 A, 第 2 步
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 引物 仪器、耗材 试剂盒 MPC-E PCR仪
什么是消化酶
消化酶是参与消化的酶的总称。一般消化酶的作用是水解,有的消化酶由消化腺分泌,有的参与细胞内消化。细胞外消化酶中,有以胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、羧肽酶原等一些不活化酶原的形式分泌然后再被活化的。 人体的消化功能依靠胃肠运动的机械性消化和消化酶作用的化学性消化来完成。消化液中含有大量消化酶,可促进食物中
胰蛋白酶,组织细胞消化的理想之选
胰蛋白酶(胰酶,Trypsin),CAS:9002-07-7,为蛋白酶的一种,EC3.4.4.4,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶,由223个氨基酸残基组成的单链多肽,底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端,当两者之一紧
消化酶片的成分
本品为复方制剂,其组份为:复合消化酶15mg,脂肪酶3.3mg,酒曲蛋白酶10mg。
关于消化酶的介绍
消化酶(digestive enzyme ):参与消化的酶的总称。 一般消化酶的作用是水解,有的消化酶由消化腺分泌,有的参与细胞内消化。细胞外消化酶中,有以胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、羧肽酶原等一些不活化酶原的形式分泌然后再被活化的。 缺少消化酶会导致食物的不完全分解,然后集中在结肠,容易造成消化
细胞消化胰酶的配制
适用于,无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100ml PBS,0.25g胰酶步骤:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl
常规组织培养法:初代消化培养法、初代组织块培养法与...
常规组织培养法:初代消化培养法、初代组织块培养法与传代培养法 1)初代消化培养法: 1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。 3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液
细胞传代实验_消化法
实验方法原理用胰蛋白酶消化细胞,用于贴壁细胞传代培养。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶酒精PBS仪器、耗材超净工作台酒精灯酒精棉球培养箱显微镜吸管离心管离心机实验步骤一、传代前准备 1. 预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精
食品检测中硝酸一硫酸消化法
此法是在样品中加入硝酸和硫酸的混合液,或先加入硫酸加热,使有机物分解,在消化过程中不断补加硝酸。这样可缩短炭化过程,并减少消化时间,反应速度适中。由于碱土金属的硫酸盐在硫酸中的溶解度较小,故此法不宜做食品中碱土金属的分析。如果样品含较大量的脂肪和蛋白质时,可在消化的后期加入少量的高氯酸或过氧化氢,以
限制性内切酶消化DNA实验——部分消化
实验方法原理有时需要得到仅在DNA片段的内部存在的部分限制性位点切割产生DNA,这在用待克隆片段内部存在的限制酶切位点进行克隆和构建酶切图谱时特别有用。实验材料DNA试剂、试剂盒限制性内切酶缓冲液仪器、耗材电泳仪实验步骤1. 配制100 ul 含DNA和1x限制酶缓冲液的反应混合物。 2. 将反
传代培养法/组织块培养法/初代消化培养常规组织培养法
一、初代消化培养法 1、 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2、 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。 3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材 Eppendorf 试管实验步骤 实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质:2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签)4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材Eppendorf 试管实验步骤实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质:2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签)4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体积的
DNA作图实验——多种酶消化
主要用于显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。实验方法原理应用遗传学技术构建能显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。实验材料DNA试剂、试剂盒限制酶缓冲液仪器、耗材电泳仪实验步骤1. 用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2. 从每个反应取小份样品作电泳分析,用已知的分
消化酶有哪些特点?
消化酶是人体消化器官分泌的消化液中所含有的物质,是一种蛋白质。 消化酶的主要作用是将食物分解为人体能够吸收的小分子物质。 所有的酶都是专一的,一种酶只催化一种或一类化学反应,所以消化酶有很多种。 消化酶具有生物活性,其受外部环境(温度,湿度,酸碱度)影响很大。 常见的消化酶药物:慷彼申、
数显消化炉的消化步骤
样品的消化步骤 称取经粉碎通过40~60目/寸的试样0.3~1g,无损地放入已洗净烘干的消化管内,加水、催化剂和10mL硫酸。 1、将消化管分别放入各个消化架的各个孔内,然后置于消化器上,放上已装好密封圈的排污管。 2、打开抽气三通进水(自来水),使抽气三通处于吸气状态。 3、再接通电源,
数显消化炉的消化步骤
样品的消化步骤 称取经粉碎通过40~60目/寸的试样0.3~1g,无损地放入已洗净烘干的消化管内,加水、催化剂和10mL硫酸。 1、将消化管分别放入各个消化架的各个孔内,然后置于消化器上,放上已装好密封圈的排污管。 2、打开抽气三通进水(自来水),使抽气三通处于吸气状态。 3、再接通电源
消化酶的作用原理简介
人体的消化功能依靠胃肠运动的机械性消化和消化酶作用的化学性消化来完成。消化液中含有大量消化酶,可促进食物中糖、脂肪、蛋白质的水解。由大分子物质变为小分子物质,以便被人体吸收利用。葡萄糖、甘油、甘油-酯、氨基酸等都是可溶解的小分子物质,可被小肠吸收。临床中,消化酶不足引起广泛的消化不良症候群,如胃
消化酶的作用和分类
动物体内能够合成并分泌消化酶到消化道中消化营养物质,若需要强化动物内源酶作用,则需要使用外源的动物消化酶类似物。后者结构和性质可能不同于内源酶,但其作用却相同,主要包括淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。
限制性内切酶消化DNA实验——消化多个DNA
实验方法原理当消化多个样品时,以下方案可减少取吸次数,节省时间和减少污染的机会。实验材料DNA实验步骤1. 分别加入相同体积的各个样品DNA至不同微量离心管中。 为避免交叉污染,各样品用不同的吸头。 2. 制备好"预混合液",它含有足够量的消化所有样品的10x反应缓冲液和水,置于冰浴。 3.