自学动手共聚焦显微镜荧光样品的制备全过程
一、样品的预处理 样品的预处理包括给药、切片或细胞标本的制备。其中给药过程要根据实验目的来进行,在这里主要介绍切片和细胞标本的制备。 1、组织切片样品的处理 其制作过程主要包括组织样品固定、切片制作。组织切片的优点是能够完好地保存细胞间的相互关系和结构,因此是生物医学实验中应用广泛的样品形式。用于共聚焦显微镜测定的切片形式有:活的组织切片、冰冻切片及固定切片。活的组织切片无需固定,活体直接切片后用于观察或测定组织具有活性状态下的一些生理指标。该类切片的缺点是保存条件要求高、时间短,切片比较厚,深层不容易染色。冰冻切片的优点是荧光背景低,引入杂质干扰少,常用于免疫荧光的标记和检测。 2、细胞标本的制备 荧光标记前细胞标本的制备过程包括细胞的培养和细胞的预处理等步骤,细胞的培养和预处理要注意细胞种类和纯度、密度、细胞形态等应符合实验目的。 ①细胞种类和纯度实验所选用细胞的种类一般是由实验目或测......阅读全文
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。二、特点不同1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
一、原理不同 1、荧光显微镜:是以紫外线为光源, 用以照射被检物体, 使之发出荧光, 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 2、激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。 二、特点不同 1、荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收、运输
样品的制备
6 分析步骤6.1样品的制备测定前,应保证实验室样品至少在室温(20℃~25℃)下保持48h,以便使影响不溶度指数的因素,在各个样品中趋于一致。然后反复振荡和反转样品容器,混合实验室样品。如果容器太满,则将全部样品移入清洁、干燥、密闭、不透明的大容器中,如上所述彻底混合。对于速溶乳粉,应小心地混合,
熔融法制备X射线荧光分析固体样品的介绍
熔融法也称为玻璃熔片法,相对于压片法来说,熔融法的制样过程比较复杂,必须预先进行条件试验才可以获得理想的熔片。对于某些物质的X射线荧光分析,只有通过熔融形成玻璃体,才能消除矿物效应和颗粒度效应。对于矿物而言,复杂的组成会影响分析结果,如碱性辉长岩矿。 选择合适的熔剂在熔融法中是非常重要的。熔剂
X射线荧光光谱分析的样品制备
进行X射线荧光光谱分析的样品,可以是固态,也可以是水溶液。无论什么样品,样品制备的情况对测定误差影响很大。 对金属样品要注意成分偏析产生的误差;化学组成相同,热处理过程不同的样品,得到的计数率也不同;成分不均匀的金属试样要重熔,快速冷却后制成圆片;对表面不平的样品要打磨抛光;对于粉末样品,要研
透射电子显微镜的样品制备
一、样品要求1.粉末样品基本要求(1)单颗粉末尺寸最好小于1μm;(2)无磁性;(3)以无机成分为主,否则会造成电镜严重的污染,高压跳掉,甚至击坏高压枪;2.块状样品基本要求(1)需要电解减薄或离子减薄,获得几十纳米的薄区才能观察;(2)如晶粒尺寸小于1μm,也可用破碎等机械方法制成粉末来观察;(3
扫描电子显微镜样品的制备技术
化学方法制备样品 编辑 化学方法制备样品的程序通常是:清洗→化学固定→干燥→喷镀金属。 清洗 某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴液及粘液等异物,掩盖着要观察的部位,因而,需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。亦可用5%碳酸钠冲洗或酶消化
透射电子显微镜的样品制备
一、样品要求1.粉末样品基本要求(1)单颗粉末尺寸最好小于1μm;(2)无磁性;(3)以无机成分为主,否则会造成电镜严重的污染,高压跳掉,甚至击坏高压枪;2.块状样品基本要求(1)需要电解减薄或离子减薄,获得几十纳米的薄区才能观察;(2)如晶粒尺寸小于1μm,也可用破碎等机械方法制成粉末来观察;(3
透射电子显微镜的样品制备
一、样品要求1.粉末样品基本要求(1)单颗粉末尺寸最好小于1μm;(2)无磁性;(3)以无机成分为主,否则会造成电镜严重的污染,高压跳掉,甚至击坏高压枪;2.块状样品基本要求(1)需要电解减薄或离子减薄,获得几十纳米的薄区才能观察;(2)如晶粒尺寸小于1μm,也可用破碎等机械方法制成粉末来观察;(3
电子显微镜生物样品的制备实验
一、目的要求学习并掌握制备微生物及核酸电镜样品的基本方法。二、电子显微镜与光学显微镜的主要区别显微镜的分辨率取决于所用光的波长,1933年开始出现的电子显微镜正是由于使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源,使其所能达到的分辨率较光学显微镜大大提高。而光源的不同,也决定了电子显微镜与光学显微镜的一系
透射电子显微镜的样品制备
一、样品要求1.粉末样品基本要求(1)单颗粉末尺寸最好小于1μm;(2)无磁性;(3)以无机成分为主,否则会造成电镜严重的污染,高压跳掉,甚至击坏高压枪;2.块状样品基本要求(1)需要电解减薄或离子减薄,获得几十纳米的薄区才能观察;(2)如晶粒尺寸小于1μm,也可用破碎等机械方法制成粉末来观察;(3
荧光酶免疫分析筛选方法所用样品制备过程
一、仪器①微量孔板的洗孔器或移液器 有12个管可以洗整个的板。②微量移液器 能够吸移5~200μL 液体。③水浴 能够于100℃恒温,亦可用调至100℃的高压灭菌器代替作为流动蒸汽发生器。④荧光计 用于 FS 检测。测量微量孔内容物的相对荧光量(MicroFLUOR Reader Dynat
扫描电子显微镜样品制备技术
扫描电子显微镜样品制备技术(preparationof specimens for scanning electron microscopy):扫描电子显微镜以观察样品的表面形态为主,因此扫描电子显微镜样品的制备,必须满足以下要求:①保持完好的组织和细胞形态;③充分暴露要观察的部位;③良好的导电性和
扫描电子显微镜样品制备实验
实验方法原理 1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能最大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水,也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。2. 目前采用最多、效果
扫描电子显微镜样品制备实验
实验方法原理1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能最大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水,也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。2. 目前采用最多、效果最好的方法
激光扫描共聚焦荧光显微镜的辅助设备
风冷、水冷冷却系统及稳压电源。 激光扫描共聚焦显微镜的基本工作原理是首先由激光器发射的一定波长的激发光,光线经放大后通过扫描器内的照明针孔光栏形成点光源,由物镜聚焦于样品的焦平面上,样品上相应的被照射点受激发而发射出的荧光,通过检测孔光栏后,到达检测器,并成像于计算机监视屏上。这样由焦平面上样
激光扫描共聚焦荧光显微镜的历史发展
·1957年,Marvin Minsky提出了共聚焦显微镜技术的某些基本原理,获得了美国的ZL。 ·1967年,Egger和Petran成功地应用共聚焦显微镜产生了一个光学横断面。 ·1977年,Sheppard和Wilson首次描述了光与被照明物体的原子之间的非线性关系和激光扫描器的拉曼光
共聚焦激光扫描显微镜的应用及荧光探针
一、LSCM常用的检测内容及其荧光探针 LSCM检测内容和应用范围非常广泛,以下仅简单介绍LSCM常用的检测内容及其荧光探针。 1.细胞内游离钙 共聚焦激光扫描显微镜常用的有Fluo-3、Rhod-1、Indo-1、Fura-2等,前两者为单波长激光探针,利用其单波长激发特点可直接测量细胞内Ca
样品和标准样品的制备
1.固体样品野外采回的土壤样品和岩石样品,经自然风干、粉碎、研磨、过筛(100~200目),混合均匀,干燥保存;称样50mg到1g,用高纯铝箔包好(作好编号)。根据待测元素的种类及核反应特征,制备标准样品。一般使用光谱纯或分析纯的待测元素的金属或化合物,根据(估计)待测元素含量范围,称取一定量的化学
样品和标准样品的制备
1.固体样品野外采回的土壤样品和岩石样品,经自然风干、粉碎、研磨、过筛(100~200目),混合均匀,干燥保存;称样50mg到1g,用高纯铝箔包好(作好编号)。根据待测元素的种类及核反应特征,制备标准样品。一般使用光谱纯或分析纯的待测元素的金属或化合物,根据(估计)待测元素含量范围,称取一定量的化学
样品和标准样品的制备
1.固体样品野外采回的土壤样品和岩石样品,经自然风干、粉碎、研磨、过筛(100~200目),混合均匀,干燥保存;称样50mg到1g,用高纯铝箔包好(作好编号)。根据待测元素的种类及核反应特征,制备标准样品。一般使用光谱纯或分析纯的待测元素的金属或化合物,根据(估计)待测元素含量范围,称取一定量的化学
共聚焦荧光显微镜基本原理
共聚焦荧光显微镜基本原理:采用点光源照射标本,在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点,该点被照射后发出的荧光被物镜收集,并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔,分别称为照明针孔和探测针孔。两者的几何尺寸一致,约100-200nm;相对于焦
激光共聚焦荧光显微镜原理是什么
激光扫描共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、目前最先进的分子细胞生物学的分析仪器。主要用于观察活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化,定量分析,以及实时定量测定等。 原理:
简述荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别
激光共聚焦显微镜是采用激光作为光源,在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块(包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器)、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备(显示器、彩色打印
进行X射线荧光光谱分析的样品制备
进行X射线荧光光谱分析的样品,可以是固态,也可以是水溶液。无论什么样品,样品制备的情况对测定误差影响很大。对金属样品要注意成份偏析产生的误差;化学组成相同,热处理过程不同的样品,得到的计数率也不同;成分不均匀的金属试样要重熔,快速冷却后车成圆片;对表面不平的样品要打磨抛光;对于粉末样品,要研磨至
透射电子显微镜粉末样品的制备
1.选择高质量的微栅网(直径3mm),这是关系到能否拍摄出高质量高分辨电镜照片的第一步;(注:高质量的微栅网本实验室还不能制备,是外购的,价格20元/只;普通碳膜铜网免费提供使用。) 2.用镊子小心取出微栅网,将膜面朝上(在灯光下观察显示有光泽的面,即膜面),轻轻平放在白色滤纸上; 3.取适
透射电子显微镜的样品制备方法
一、样品要求1.粉末样品基本要求(1)单颗粉末尺寸最好小于1μm;(2)无磁性;(3)以无机成分为主,否则会造成电镜严重的污染,高压跳掉,甚至击坏高压枪;2.块状样品基本要求(1)需要电解减薄或离子减薄,获得几十纳米的薄区才能观察;(2)如晶粒尺寸小于1μm,也可用破碎等机械方法制成粉末来观察;(3
电子显微镜生物样品的制备与观察
一、电子显微镜与光学显微镜的主要区别显微镜的分辨率取决于所用光的波长,1933年开始出现的电子显微镜正是由于使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源,使其所能达到的分辨率较光学显微镜大大提高。而光源的不同,也决定了电子显微镜与光学显微镜的一系列差异。根据电子束作用于样品的方式的不同及成像原理的差异,
光学和电子显微镜样品制备的技术
透射电子显微镜制片技术透射电子显微镜制片技术 其基本要求是:①尽可能保持材料的结构和某些化学成分生活时的状态。②材料的厚度一般不宜超过1000埃。组织和细胞,必须制成薄切片,以获得较好的分辨率和足够的反差。③采用各种手段,如电子染色、投影、负染色等来提高生物样品散射电子的能力,以获得反差较好的图像。