大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定（二）
1.4 颗粒细胞鉴定1.4.1 HE染色 取生长旺盛的第4 d的细胞，用0.25％胰蛋白酶－0.02％EDTA消化后制成1×105/ml的细胞悬液，种植于已预置好小盖玻片的24孔培养板中，放人CO2 培养箱中，在37 ℃、5％ CO2及完全饱和湿度条件下进行培养。当细胞生长至70％融合时取出玻片，用PBS冲洗盖玻片3次，每次5 min。4％多聚甲醛固定20 min。取出细胞爬片，PBS冲洗2次，苏木素染色2 min，流水冲去浮色，入盐酸酒精中分色数秒，流水冲洗3 min，镜下细胞核染色清晰，胞浆不着色。5％伊红染色2～3 min，流水冲去浮色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片后光镜下观察细胞形态。1.4.2 FSHR表达鉴定颗粒细胞 细胞爬片制作同前，4％多聚甲醛固定。按以下步骤进行细胞免疫化学染色：固定好的细胞爬片，PBS洗涤3 min×3次；3％ H2O2室温孵育5 min，消除内源性过氧化物酶活性，PBS......阅读全文
卵巢颗粒细胞瘤的病因及病理
病因到目前为止，颗粒细胞瘤的发病原因尚不清楚。但研究发现97%的颗粒细胞瘤在FOXL2中存在一类完全相同的基因缺陷（DNA复制错误），但这类突变不会遗传给后代。很多研究推定此为颗粒细胞瘤的病因。病理对成人型颗粒细胞瘤中，肿瘤多数为单侧性，双侧性占5%至10%，直径平均为12cm；呈囊性、实性或两者兼
卵巢颗粒细胞瘤的诊断方式介绍
卵巢颗粒细胞瘤是临床特征明显的肿瘤。患者附件发现包块伴有明显的雌激素刺激引起的内分泌紊乱症状，诊断多不困难。对于临床症状不典型的患者，则要根据其年龄肿瘤大小、质地、辅助检查等综合材料加以分析、鉴别后，得出较准确的诊断。尚有少数患者，需术中冰冻病理检查得以确诊。 在肿瘤标记方面，血浆抑制素抗
治疗卵巢颗粒细胞瘤的相关介绍
1.手术治疗 手术是颗粒细胞瘤最重要的治疗手段，根据临床期别的不同手术范围亦有区别。 （1）Ⅰ期 行全面分期手术，术中探查十分重要。应仔细检查盆、腹腔脏器、腹膜、子宫直肠窝等处，并多处取材活检。 （2）Ⅱ期以上 均应施行肿瘤细胞减灭术，切除全子宫、双附件、大网膜腹主动脉旁、腹膜
原代培养与传代培养知识
原代培养:即第一次培养，是指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义： ●培养物一经接种到培养器皿（瓶）中就不在分割，任其生长繁殖； ●原代培养中的“代”并非细胞的“代”数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生多代子细胞； ●原代培养过程
浅谈原代细胞培养那些事（二）
四、原代细胞培养流程（例：乳鼠肺组织）1.取材：将1-3天新生乳鼠尾巴提起，整个身体浸入装有75%酒精的烧杯中3秒左右（默数5下），取出放置到灭菌的培养皿中，移入工作台内。小鼠仰位固定在泡沫塑料板上，大头针分别固定头、尾和四肢。用碘酒、75%酒精消毒胸廓部位皮肤。在胸廓正中线中位处，用两把眼科弯镊夹
原代细胞的培养与建系1
原代细胞的培养与建系 细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20
原代细胞的培养与建系5
三、原代细胞的培养方法原代细胞的培养也叫初代培养 是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。原代细胞因刚从组织中分离开，生物学特性未发生很大变化，仍保留原来的遗传特性，也最接近和反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。原代细胞往往有多种细胞
原代细胞的培养与建系2
（四）骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材取上述标本时，除严格无菌，注意抗凝外，还要尽快分离培养，一般无需其他处理，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。具体操作详见后面有关章节。（五）动物组织取材1、鼠胚组织取材首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物，然后将其整个
原代细胞的培养与建系3
（二）消化分离法组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易
原代细胞的培养与建系1
细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增
原代细胞的培养与建系2
(二)原代细胞的维持 1、贴壁细胞（包括半贴壁细胞的换液） 贴壁细胞长成网状或基本单层时，由于营养缺乏，代谢产物增多，pH变酸，不适宜细胞生长，此时细胞还未长成单层，未达到饱和密度，仍需继续培养，因此，需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单，即弃去旧液，
原代细胞的培养与建系3
下面为美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）入库细胞的基本要求： （1）培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态，细胞已传代数等。 （2）冻存液 培养基和保护剂名称。 （3）细胞活力 冻融前后细胞接种存活率和生长特性(生长繁殖曲线，分裂指数等)。 （4
原代细胞的培养与建系4
（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用
原代细胞的培养与建系4
4.软琼脂克隆分离法 本法仅适用于悬浮培养的类淋巴细胞或恶性程度高的贴壁细胞，而正常贴壁细胞在软琼脂中不能形成克隆。 （1）将对数生长期的细胞制成单个细胞悬液(贴壁细胞用0.25%胰蛋白酶消化使之分散成单个细胞)作活细胞计数。调整细胞浓度至1×106细胞/L，然后根据实验要求再作梯倍稀释。通
原代细胞培养优点与用途？
一、优点 (1) 细胞刚离开机体，生物学性状与原体内细胞比较接近，相比之下，细胞系的一个缺点是它们往往与原始的组织有不一样的遗传和表型，而原代细胞保持了细胞在体内的许多重要标志和功能。 (2) 细胞的初代培养也是建立各种细胞株（系）的必经阶段。 二、原代细胞培养的临床应用： (1) 细胞
原代细胞分离与培养方法介绍
前言 凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。 原代细胞最接近和最能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。
厌氧菌的分离、培养及鉴定（二）
4．1．3 分离 （1）编号 取五支无菌水试管，分别用记号笔标明10-1、10-2……10-5。 （2）稀释 在无氧无菌的超净厌氧手套箱中的条件下，用无菌注射器吸取1mL混合均匀的液体样品，加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中，用震荡器将其混合均匀，制成10-1稀释液。用无菌注射器吸取1mL10-1稀
大鼠脑微血管内皮细胞原代培养实验
酶消化法 实验方法原理 以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养，成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法，并获得纯度较高的
大鼠肝星状细胞原代培养实验_胰酶消化法
大鼠肝星状细胞原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD大鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠小牛血清DMEM酶消化液
正常大鼠原代主动脉平滑肌细胞培养
一、实验试剂 1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S4、染色液
大鼠脑微血管内皮细胞原代培养实验
酶消化法 实验方法原理 以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养，成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法，并获得纯度较高的
小脑颗粒细胞的培养
实验方法原理将 4~8 只新生鼠的小脑切成小立方块，放入 HBSS，在 37°C 条件下用胰蛋白酶消化 15 min。将细胞接种于涂有 L-多聚赖氨酸的培养皿或培养瓶。实验材料DMEMHBSSL-多聚赖氨酸阿糖胞苷0.025% 胰蛋白酶硅酮仪器、耗材P e tr i培养皿解剖刀解剖剪解剖镊Paste
小脑颗粒细胞的培养
实验方法原理将 4~8 只新生鼠的小脑切成小立方块，放入 HBSS，在 37°C 条件下用胰蛋白酶消化 15 min。将细胞接种于涂有 L-多聚赖氨酸的培养皿或培养瓶。实验材料DMEM
细胞传代培养与原代培养的区别
原代培养：即第一次培养，是指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义： 1、培养物一经接种到培养器皿（瓶）中就不再分割，任其生长繁殖； 2、原代培养中的“代”并非细胞的“代”数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生多代子细胞； 3、原代培养过程中不分割
关于卵巢颗粒细胞瘤的检查方式介绍
1.实验室检查 内分泌激素测定：可以通过检测患者血中雌激素、孕激素、睾酮、促性腺激素及尿中雌激素水平协助临床分析及诊断。绝经后妇女受激素水平影响，阴道细胞学涂片检查结果可显示，该检查简单、易行，但对诊断可以起到极大的帮助作用。 2.影像学检查 MRI、CT、B超等检查方法一般都可以明确判断
关于卵巢颗粒细胞瘤的鉴别诊断介绍
1.颗粒细胞瘤与小细胞癌、未分化癌 小细胞癌、未分化癌的瘤细胞分化差，细胞形态与颗粒细胞瘤细胞有时很相似，尤其在呈弥漫性或类似滤泡样排列时经验不丰富的病理医师会做出错误的诊断。但颗粒细胞瘤与后两者在临床症状体征、术中探查诸方面均有较明显的不同。 2.颗粒细胞瘤与其他类型性索间质肿瘤 最常见
简述卵巢颗粒细胞瘤的临床表现
由于肿瘤细胞可以分泌雌激素，若肿瘤发生在青春期前儿童，多数表现为性早熟。此类性早熟为肿瘤刺激所引起，又称假性性早熟，临床可出现乳房增大、阴阜发育、阴毛腋毛生长、内外生殖器等异常发育，甚至出现无排卵性月经。有的还出现身高、骨龄过度超前发育。若肿瘤发生于生育期妇女，由于肿瘤分泌的雌激素引起子宫内膜增
胚胎小鼠纹状体神经干细胞分离培养鉴定_原代传代培养
实验材料孕13d的昆明种二级小鼠试剂、试剂盒胎牛血清青霉素链霉素胰酶阻断剂葡萄糖台盼蓝蔗糖酚红磷酸氢二钾磷酸氢二钠FITC 偶联荧光抗小鼠二抗氯化钠氯化钾碘酒乙醇仪器、耗材解剖剪虹膜剪眼科剪离心机自动双重纯水蒸馏器微孔滤膜滤器培养箱体视显微镜无菌超净工作台培养瓶96孔细胞培养板24孔细胞培养板6 孔
原代细胞培养之——细胞分离技术（二）
（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用PBS和含血清的
原代细胞的培养
原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。[1] 最常用的原代细胞的培养有组织块培养和分散细胞培养