10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液的配制
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1%SDS50%甘油 水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10% SDS5ml补足到10ml......阅读全文
示踪染料在凝胶电泳中起什么作用
凝胶电泳是一种常用的实验室技术,具有许多实际应用,包括DNA指纹图谱和基因组测序。该过程涉及使用电流分离DNA片段,同时跟踪通过过滤凝胶的分子运动速率。在无色DNA样品中添加蓝色或橙色跟踪染料,可以查看样品并获得有关DNA分子在电泳过程中如何运动的信息。鉴定是基于分子迁移后凝胶上DNA条带的大小。凝
上样缓冲液配方中DTT的用法
DTT是一种很强的还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验
sds电泳上样缓冲液如何配置
5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制(10 ml)(本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明)组分:Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);β-巯基乙醇(14.4 mM)配制过程:1. 量取1M Tris-HCl (pH6
Northern杂交试验指导手册(1)
一、RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液:贮存液-在含484ml 水(经DEPC处理), 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠(pH7.0)和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍,加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备
RNA-电泳
①电泳RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。②用新的1XTBE 配制1. 2 %琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(E直接加入凝胶中。③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE ,液面只能刚好同胶面平齐,缓冲液不要淹过胶面。④点样
RNA凝胶电泳试验操作注意事项
本实验中必须保持RNase污染以免RNA降解。所有试剂用DEPC水配制,用具也用DEPC水冲洗,并灭菌。 ①电泳RNA所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。 ②用新的1XTBE配制1.2%琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(EB)直接加入凝胶中。 ③
甲苯咪唑片的检查方法
溶出度照溶出度与释放度测定法(通则0931第二法)测定。溶岀条件以1%十二烷基硫酸钠的0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶出介质,转速为每分钟75转,依法操作,经120分钟时取样。供试品溶液取溶出液适量,滤过,取续滤液(0.1g规格);或精密量取续滤液5ml,置10ml量瓶中,用溶出介质稀释至刻度
十二烷基苯磺酸钠的其他作用介绍
十二烷基苯磺酸钠产品用途十分广泛,除了上述几个方面的应用外,在纺织助剂方面还常作为棉织物精炼剂,退浆助剂,染色时的匀染剂,在金属电镀过程中用作金属脱脂剂;在造纸工业中用作树脂分散剂,毛毡洗涤剂,脱墨剂;在皮革工业上用作渗透脱脂剂;在肥料工业中用作防结块剂;在水泥工业中用作加气剂等诸多方面或单独使
十二烷基苯磺酸钠的洗涤作用介绍
烷基苯磺酸钠是黄色油状体,经纯化可以形成六角形或斜方形强片状结晶,具有微毒性,已被国际安全组织认定为安全化工原料。可在水果和餐具清洗中应用烷基苯磺酸钠,在洗涤剂中使用的量最大,由于采用了大规模自动化生产,价格低廉,在洗涤剂中使用的烷基苯磺酸钠有支链结构(ABS)和直链结构(LAS)两种,支链结构
简述十二烷基苯磺酸钠的工业制法
十二烷基苯磺酸钠是由十二烷基苯与发烟硫酸或三氧化硫磺化,再用碱中和制得。用发烟硫酸磺化的缺点是反应结束后总有部分废酸存在于磺化物料中。中和后生成的硫酸钠带入产品中,影响了它的纯度。目前,工业上均采用三氧化硫-空气混合物磺化的方法。三氧化硫可由60%发烟硫酸蒸出,或将硫磺和干燥空气在炉中燃烧,得到
十二烷基苯磺酸钠的研究简史介绍
20世纪30年代末期,人们将苯与氯化石油进行烷基化,然后将生成的烷基苯进行磺化制得烷基苯磺酸盐。这便是烷基芳磺酸盐的第一批工业产品,当时绝大多数产品用于纺织工业,随后家用配方便很快出现。 第二次世界大战后,出现了十二烷基苯磺酸盐,它是石油催化裂化的副产品。四聚丙烯作为烷基化试剂与苯反应,再经磺
十二烷基苯磺酸钠的作用原理介绍
十二烷基苯磺酸钠是一种性能优良的合成阴离子表面活性剂,它比肥皂更易溶于水,是一种黄色油状液体。易起泡由于它的泡沫粘度低所以泡沫易于消失。它有很好的脱脂能力并有很好的降低水的表面张力和润湿、渗透和乳化的性能。它的化学性质稳定,在酸性或碱性介质中以及加热条件下都不会分解。与次氯酸钠过氧化物等氧化剂混
Western-Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)1
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、 分类i.放射自显影ii.底物化
动物组织细胞总RNA的提取(异硫氰酸胍法和TRIzol法)1
一、实验原理RNA是基因表达的中间产物,存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的,如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败,在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形
Western-Blot的原理和所用试剂汇总
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blo
Western-Blot的原理和所用试剂汇总
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blo
SDS-PAGE电泳过程的常见问题及解决方法
几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS-PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论: Q:SDS-PAGE电泳的基本原理? A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶
标准液的配制
2000mg/l浓度的COD标样 准确称取1.7007g的邻苯二甲酸氢钾,放入50ml的小烧杯中,多次加水,使之完全溶解,并转入1000ml的容量瓶中,用蒸馏水(或脱盐水)稀释到标线,摇匀; 4000mg/l浓度的COD标样 准确称取3.4014g的邻苯二甲酸氢钾,放入50ml的小烧杯中,多次
清洁液的配制
清洁液分高、中、低液三种。 低浓度清洁液 重铬酸钾 100g 水 750ml 硫酸 250ml 中浓度清洁液 重铬酸钾 60g 水 300ml 硫酸 460ml 高浓度清洁液 重铬酸钾 100g
蛋白质凝胶电泳凝胶的制备
蛋白质凝胶电泳通常用于(1)分析分子生物学、遗传学和生物化学(2)制备技术(3)采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。实验方法原理将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及硫基乙醇一起加热,使蛋白质变性,多肽链内部
琼脂糖凝胶的配制方法
根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖,加入相应电泳缓冲液中,用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解,加入适量 EB 混匀,适当冷却后倾入凝胶铸槽中,插入梳子,凝胶厚度不超过梳孔,如有气泡产生则用玻璃棒驱除,不能过早拔除梳子,应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。
蛋白质分子量的测定——SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法
目的要求学会SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法原理。掌握用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的操作技术。实验原理:SDS是十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)的简称,它是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键、疏水键打开,并结合到蛋白质分子上(在一定
蛋白质凝胶电泳凝胶的制备
实验方法原理 将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及硫基乙醇一起加热,使蛋白质变性,多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原,肽链被打开。打开的肽链考疏水作用与SDS结合而带负电荷,电泳时在电场作用下,肽链在凝胶中向正极迁移。不同
包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验
试剂、试剂盒 包涵体沉淀 缓冲液 A 脱氧胆酸钠 N-十二烷基肌氨酸钠 仪器、耗材
包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验
试剂、试剂盒 包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材 Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器(FisherScient
包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验
试剂、试剂盒包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器(FisherScientifi
常用染色液和试剂的配制
一、埃利希(Ehrlich)氏苏木精染液 先将苏木精2g溶于100mL乙醇中,再加冰醋酸10mL,混合后加蒸馏水100mL和100mL甘油,然后加硫酸铝钾(约10g)至饱和,搅拌均匀,倒入瓶中。将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上,放在暗处通风的地方,并经常摇动促进“成熟”,直到液体颜色变为深红色为止。
凝胶的原理方法
Native-PAGE原理非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下, 对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于同工酶的鉴定和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电,电泳后将凝胶切成两半,一半
溴化乙锭(10mg/ml)的配制
在100ml水中加入1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。
简述干法上样和湿法上样的优缺点
一、湿法施工优缺点:1、砂浆经过几次冻融循环和风化易产生渗漏,甚至脱落;经雨水冲刷,潮湿的碱性环境,长时间作用于瓦体会降低瓦的颜色等性能;2、瓦片安装性能差,屋面的平整度不易控制,施工进度慢,易受天气影响工期不易保证;3、砂浆污染屋面影响整体立面效果;4、容易产生热桥效应,不利于节能。二、干法施工优