RNA凝胶电泳试验操作注意事项
本实验中必须保持RNase污染以免RNA降解。所有试剂用DEPC水配制,用具也用DEPC水冲洗,并灭菌。 ①电泳RNA所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。 ②用新的1XTBE配制1.2%琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(EB)直接加入凝胶中。 ③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE,液面只能刚好同胶面平齐,缓冲液不要淹过胶面。 ④点样时,样品RNA每10μl加入2μl上样缓冲液,上样缓冲液是用DEPC处理的水配制的50%甘油,另外单独点一样品孔含有3μl溴酚蓝的上样缓冲液作为电泳指示剂,电泳电压4V/cm,电泳时间2h左右便可取出凝胶在紫外灯下观看所提取的RNA的质量或进行拍照记录。......阅读全文
RNA凝胶电泳试验操作注意事项
本实验中必须保持RNase污染以免RNA降解。所有试剂用DEPC水配制,用具也用DEPC水冲洗,并灭菌。 ①电泳RNA所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。 ②用新的1XTBE配制1.2%琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(EB)直接加入凝胶中。 ③
RNA凝胶电泳试验操作步骤
1、将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍,晾干备用。 2、制胶:称取0.5g琼脂糖粉末,加入放有36.5mL的DEPC水(蒸馏水40ml)的锥形瓶中,加热使琼脂糖完全溶解。稍冷(60~70°)却后加入5ml的10x电泳缓冲液、8.5(9)ml的甲醛(+0.5μl溴化乙锭)。然后在胶槽中灌制凝胶,插好
RNA凝胶电泳试验所需实验试剂
1、0.1%DEPC水:200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀,室温放置过夜,高压灭菌。 2、10x电泳缓冲液:吗啉代丙烷磺酸(MOPS)0.4mol/L(pH 7.0);NaAc 0.1mol/L;乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L; 3、50mL变性琼脂糖凝
RNA凝胶电泳试验基本原理
RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,凡是无法确定分子量。只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比。 判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rR
凝胶电泳操作注意事项
1.缓冲系统:在没有离子存在时,电导率最小,DNA不迁移,或迁移极慢,在高离子强度的缓冲液中,电导很高并产热,可能导致DNA变性,因此应注意缓冲液的使用是否正确.长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的.2.琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移
凝胶电泳操作注意事项
1.选用优质的琼脂糖:不同品牌的琼脂糖在质量上有较大的差异。劣质琼脂糖会导致DNA条带模糊,甚至条带缺失。因此请尽量选择质量稳定可靠的品牌。 2.选择适当的凝胶浓度: 琼脂糖凝胶的线性DNA分辨范围 3.凝胶制备:配制凝胶和电泳应选用相同的1x缓冲液;使用的容器体积至少是凝胶
凝胶电泳操作注意事项
1.选用优质的琼脂糖:不同品牌的琼脂糖在质量上有较大的差异。劣质琼脂糖会导致DNA条带模糊,甚至条带缺失。因此请尽量选择质量稳定可靠的品牌。2.选择适当的凝胶浓度:琼脂糖凝胶的线性DNA分辨范围3.凝胶制备:配制凝胶和电泳应选用相同的1x缓冲液;使用的容器体积至少是凝胶溶液的3倍,以免溶液沸腾时溢出
RNA实验操作注意事项
在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的 RNA的纯度和完整性又可直接影响R
RNA提取操作注意事项
RNA抽提纯化是分子生物学研究的基本工作内容。但是由于RNA酶的广泛存在和难以灭活的顽固本性,使得RNA的抽提纯化和后续工作特别困难。虽然 Trizol试剂和各类RNA抽提纯化试剂盒的广泛应用使得RNA抽提和纯化不再特别困难,但是涉及RNA的工作仍然是分子生物学研究中最让人头痛的。归根结底,RN
RNA实验操作注意事项
在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的 RNA的纯度和完整性又可直接影响
凝胶电泳(gel-electrophoresis)操作注意事项
1.缓冲系统:在没有离子存在时,电导率最小,DNA不迁移,或迁移极慢,在高离子强度的缓冲液中,电导很高并产热,可能导致DNA变性,因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。2.琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移
RNA-操作注意事项与实验技巧
操作注意事项: 由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功,请仔细阅读下列注意事项,相信它能帮助您解决常见的问题。 归根究底,RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在,在实验操作的任何一步,任何偶然的疏
RNA实验技巧与操作注意事项
操作注意事项:由于RNA酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功,请仔细阅读下列注意事项,相信它能帮助您解决常见的问题。归根究底,RNA工作的主要问题是防止RNA酶的污染。RNA酶无处不在,在实验操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不当操
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤
一、实验目的学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。二、实验原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,凡是无法确定分子量。只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤
实验方法原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,凡是无法确定分子量。只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤
一、实验目的学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。二、实验原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,凡是无法确定分子量。只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤
实验方法原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,凡是无法确定分子量。只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比。判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的
提取RNA-和反转录的操作注意事项
你按照买的反转录试剂盒来做就行.(1)、从细胞中提取细胞总RNA用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加样器反复吹打,直至细胞完全裂解成均一溶液,不粘稠时
RNA的琼脂糖凝胶电泳
一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变
药敏试验操作注意事项
(1)培养基的厚度对抑菌圈的大小有影响,故平皿中加入培养基要固定,以4mm深度为宜。制备的平板使用时应放于35℃温箱中30min去除过多的水分,以免影响抗菌药物的扩散。(2)接种细菌后应在室温放置片刻,待菌液被培养基吸收后,再贴纸片;但不宜放置太久,否则在贴纸片前细菌已开始生长可使抑菌圈缩小。(3)
琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程
凝胶电泳操作注意事项: 1. 缓冲系统:在没有离子存在时,电导率最小,DNA不迁移,或迁移极慢,在高离子强度的缓冲液中,电导很高并产热,可能导致DNA变性,因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。 2. 琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其
甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验_凝胶电泳法
本实验旨在学会甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA 的方法。琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。实验方法原理琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使
RNA电泳操作步骤
试剂: 琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。 步骤 一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc) 1、称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。 2. 加700mL DEPC水溶解
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验可用于:(1)检测提取的RNA样品的完整性;(2)测定RNA分子量。实验方法原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%~1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
实验方法原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%~1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
实验方法原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量
一.原理带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。其中,凝胶电泳由于其操作简便、快速、灵敏等优点,使它成为分离、鉴定和提纯核酸的首选标准方法。与蛋白质分子类似,核酸分子也是两性解离分子。在pH3.5时,碱基上的氨基基团解离,而三个磷酸基团中只有第一个磷酸解离,整个分子带正电荷,在电场中向负极泳动;在p
双向凝胶电泳操作步骤
样品要求1、建议使用的蛋白质溶解体系为8M尿素/4%CHAPS /40mMTris(Base)/65mM DTT;2、样品浓度大于2 μg/ μl;样品制备双向电泳成功的关键在于建立一套有效的、可重复的样品制备方法。样品制备的影响因素包括蛋白质的溶解性、分子量、电荷数及等电点等。对于不同的样品性质及
工频耐压试验操作注意事项
(1)试验人员应做好分工,明确相互间联系办法。并有专门人监护现场安全及观察试品状态。 (2)被试品应先清扫干净,并绝对干燥,以免损坏被试品和试验带来的误差。 (3)对于大型试验,一般都应先进行空升试验。即不接试品时升压至试验电压,校对各种表计,调整球间隙。 (4)升压速度不能太快,
工频耐压试验操作注意事项
注意事项1、做高压试验时,必须由2人或2个以上人员参加,并明确做好分工,明确相互间的联系方法。并有专人监护现场安全及观察试品的试验状态;2、变压器和控制箱应有可靠的接地;3、试验过程中,升压速度不能太快,也决不允许突然全电压通电或断电;4、在升压或耐压试验过程中,如发现下列不正常情况时,应立即降压,