层析技术的应用(六)
(五)聚焦层析法 聚焦层析是一种操作简单、廉价的层析技术。它的原理是根据各种蛋白质的等电点不同进行分离的过程,因此本方法具有高分辨、高度浓缩和高度专一等特点。聚焦层析所用的凝胶首先用高pH溶液平衡,然后用多元缓冲液进行洗脱,多元缓冲液pH呈梯度下降。聚焦层析所用凝胶主要有两种:MONOP和多元缓冲液交换剂(PBE)。其中MONOP是带孔小珠,孔中被带正电荷的胺基填充,适用于高效聚焦层析。多元缓冲液交换剂是一种交换凝胶,适用作普通聚焦层析的介质。各种凝胶性质见表16-8。凝胶名称 pH范围 洗脱MONOP 11-8Pharmalyte 8-10.5PBE 11-8Pharmalyte 8-10.5MONOP 9-6多元缓冲液96PBE 947-4多元缓冲液74PBE947-4多元缓冲液74表16-8 聚焦层析技术数据NONOP可制成两种高效液相柱:MONOP HR5/5(1ml),和MONOP HR5/20(5ml)。使用时根......阅读全文
快速蛋白质液相层析的概念和应用
中文名称快速蛋白质液相层析英文名称fast protein liquid chromatography;FPLC定 义以高流率代替高效液相层析高压力的一种改良的中压(< 5 MPa)液相层析技术。具有快速、容量大和分辨率高的特点。可使用多种层析介质,多用于蛋白质的分离,也可以用于其他物质的分离。应
快速蛋白质液相层析的基本概念
中文名称快速蛋白质液相层析英文名称fast protein liquid chromatography;FPLC定 义以高流率代替高效液相层析高压力的一种改良的中压(< 5 MPa)液相层析技术。具有快速、容量大和分辨率高的特点。可使用多种层析介质,多用于蛋白质的分离,也可以用于其他物质的分离。应
共价层析的基本概念
中文名称共价层析英文名称covalent chromatography定 义作为层析填料的固相载体,与流经它的欲分离物质发生化学反应并以共价键相连,洗去不与其反应的其他物质后,再以另一化学反应使目的物从载体上释放洗脱下来,载体则恢复其原来形式的层析技术。如巯基交换层析。应用学科生物化学与分子生物学
共价层析的概念和原理
中文名称共价层析英文名称covalent chromatography定 义作为层析填料的固相载体,与流经它的欲分离物质发生化学反应并以共价键相连,洗去不与其反应的其他物质后,再以另一化学反应使目的物从载体上释放洗脱下来,载体则恢复其原来形式的层析技术。如巯基交换层析。应用学科生物化学与分子生物学
快速蛋白质液相层析的基本概念
中文名称快速蛋白质液相层析英文名称fast protein liquid chromatography;FPLC定 义以高流率代替高效液相层析高压力的一种改良的中压(< 5 MPa)液相层析技术。具有快速、容量大和分辨率高的特点。可使用多种层析介质,多用于蛋白质的分离,也可以用于其他物质的分离。应
凝胶[过滤]层析的基本概念
中文名称凝胶[过滤]层析英文名称gel [filtration] chromatography定 义使用有一定大小孔隙的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等),利用凝胶颗粒对分子量和形状不同的物质进行分离的层析技术。由于各种分子的大小、形状不同,扩散到凝胶孔隙内的速度不同,因
柱层析的相关内容介绍
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术,主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离开来。 柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗
青霉素酶的和青霉素
青霉素酶又称β-内酰胺酶(β-lactamase,EC 3.5.2.6),可水解β-内酰胺类抗生素。它采用基因重组技术构建了β-内酰胺酶高效表达菌株,通过色谱层析技术获得重组β-内酰酶(TEM1),具有纯度高、活性高、专一性强等特点。本品可以有效的分解β-内酰胺类抗生素,包括青霉素G;氨基青霉素类,
凝胶[过滤]层析的概念和原理
中文名称凝胶[过滤]层析英文名称gel [filtration] chromatography定 义使用有一定大小孔隙的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等),利用凝胶颗粒对分子量和形状不同的物质进行分离的层析技术。由于各种分子的大小、形状不同,扩散到凝胶孔隙内的速度不同,因
什么是柱色谱法?
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术,主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离开来。 柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗
关于高压液相层析的基本介绍
高压液相层析(HPLC):使用颗粒极细的介质,在高压下分离蛋白质或其他分子混合物的层析技术。 载体多为颗粒直径较小,机械强度及比表面积均大的球形硅胶微粒,其上并键和不同极性的有机化合物以适应不同类型分离工作的需要,因而柱效较经典柱色谱柱大大提高。此外在色谱柱出口处常常配以高灵敏度的监测器,以及
概述胆汁酸的临床意义
1、肝胆疾病 2、胃肠疾病 3、引起胆汁酸代谢发生改变的其它疾病 在研究各种疾病对胆汁酸代谢的干扰作用时,经常对生物标本进行严格的分级分离,并运用层析技术对各个胆汁酸组分进行详尽的研究。但是,在临床实践中,大多数情况下,如对肝病的筛选,只需对总胆汁酸水平进行简单的酶学测定。本章将集中计论血
高效亲和层析的原理和应用
中文名称高效亲和层析英文名称high-performance affinity chromatography;HPAC定 义利用分子间的结合作用(如抗原-抗体、酶-抑制物、激素-受体、糖类-外源凝集素或核酸的互补链之间的结合),将其中配对结合的任何一方固定在硬质的支持物(如硅酸微粒、合成的多聚物等
树脂柱和层析柱一样吗
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。凝胶过滤层析是利用一定大小孔隙的具有网状结构的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)而树腊吸附柱;通俗的说,就是一种装载(阳、阴)离子交换树脂的设备,简称离子交换(柱)器,目的是离子交换树脂“吸附”水中阳离子或阴离子等盐类
POCT新技术-——磁敏免疫分析技术
在体外诊断行业(IVD)中,即时检测(POCT)作为检验医学重要组成部分,因其具有体积小,携带方便,容易操作,为临床提供结果快速等优点,在临床科室的应用中发展迅速,年均增幅高达 30%。在医院内,POCT 主要应用于院内急诊科、ICU、呼吸科、心内科、手术室等临床科室。这种技术在时效性和灵活性方面与
亲和层析原理及应用介绍
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力,从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 具有专一亲和力的生物分子对主要有:抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素(或药物)与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。
亲和层析原理及应用介绍
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力,从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 具有专一亲和力的生物分子对主要有:抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素(或药物)与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。
亲和层析原理及应用介绍
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力,从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 具有专一亲和力的生物分子对主要有:抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素(或药物)与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。
POCT方法学发展(二)
d、基于显色原理的层析技术e、胶体金免疫渗滤技术技术原理:免疫渗滤技术也采用胶体金作为示踪物,基于抗原和抗体结合的原理,不同之处在于渗滤技术层析方向是垂直的。试剂盒组成操作步骤f、分子发光原理S0:基态;S1:第一电子激发单重态;S2:第二电子激发单重态;T1:第一电子激发三重态;T2:第二电子激发
关于气相色谱层析的基本介绍
气相色谱层析即为混合样品的气流通过固定相时,根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。气相色谱仪的基本流程。利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强,能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点,常在数十分钟甚至数小时就可以对传染病做出早期
对角线层析的基本概念
中文名称对角线层析英文名称diagonal chromatography定 义一种用于确定某一混合物中特定组分对光或某些化学处理(如氧化)等敏感性的双向层析技术。样品加样后先从一个方向进行层析分离,经光或化学等处理后,再以与第一次层析垂直方向进行第二次层析分离,则经过处理未被修饰的组分皆位于层析图
凝胶过滤层析简介
凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离
金属亲和层析的概念和应用
中文名称金属亲和层析英文名称metal affinity chromatography定 义利用固相化的金属离子介质进行的亲和层析技术。欲分离的物质与金属离子形成共配位复合物而结合,再通过降低pH、加入竞争物(如咪唑、组氨基酸等)、使用螯合剂(如乙二胺四乙酸)等方法洗脱。常用于蛋白质的纯化分离,如
离子配对层析的概念和原理
中文名称离子配对层析英文名称ion-pairing chromatography;ion pair chromatography;paired ion chromatography定 义在流动相中加入适当的具有与待分离离子相反电荷的离子(即离子对试剂),使之与待分离离子形成中性的离子对化合物的层析
什么是凝胶过滤层析
凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离
对角线层析的概念和原理
中文名称对角线层析英文名称diagonal chromatography定 义一种用于确定某一混合物中特定组分对光或某些化学处理(如氧化)等敏感性的双向层析技术。样品加样后先从一个方向进行层析分离,经光或化学等处理后,再以与第一次层析垂直方向进行第二次层析分离,则经过处理未被修饰的组分皆位于层析图
离子配对层析介绍
中文名称离子配对层析英文名称ion-pairing chromatography;ion pair chromatography;paired ion chromatography定 义在流动相中加入适当的具有与待分离离子相反电荷的离子(即离子对试剂),使之与待分离离子形成中性的离子对化合物的层析
如何提取卵黄抗体?
卵黄的收集:首先需要从鸡蛋中收集卵黄。 卵黄的破碎和匀浆:将收集到的卵黄通过机械或化学方法破碎,形成均一的悬浮液。 初步分离:通过离心等物理方法,将卵黄中的大颗粒物质分离出来,留下上清液。 蛋白质纯化:利用离子交换层析、凝胶过滤层析或亲和层析等技术,根据卵黄抗体与其他蛋白质不同的物理化学性
纳微层析介质在血液制品纯化中的应用(一)
血液制品是全球人类临床使用和必备的一线用药,其品种的多样性和质量的高低会直接影响医疗救助水平。此前有报道称截至2015年,我国由于存在年投浆量少、分离技术起步晚、研发力度不足等原因,导致血液制品仅能生产近10个品种,远少于国外发达国家的28个品种,而我国目前需求量最大的白蛋白、静脉注射用免疫球蛋白、
亲和层析原理及应用介绍
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力,从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 具有专一亲和力的生物分子对主要有:抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素(或药物)与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。