BAL31核酸酶消化法产生双向缺失突变体实验
试剂、试剂盒 BAL31 缓冲液EGTA乙醇酚氯仿醋酸钠蔗糖凝胶上样缓冲液TE噬菌体 T4DNA 聚合酶BAL31 核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段限制性内切酶琼脂糖凝胶用于凝胶电泳的 DNA 分子量标准仪器、耗材 计时钟水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1, 将贮存液稀释到合适的浓度。5XBAL31 缓冲液2.5mol/LNaCl62.5 mmol/LCaCl262.5 mmol/LMgCl2100 mmol/LTris-Cl(pH8.0)有 4 种 dNTP 的溶液，每种浓度为 0.5 mmol/LEGTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)醋酸钠（3mol/L，pH5.2)蔗糖凝胶上样缓冲液TE(pH7.6)酶和缓冲液噬菌体 T4DNA 聚合酶BAL31 核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段限制性内切酶请见步骤 3、23 和 3......阅读全文
分离的细胞核的染色质的微球菌核酸酶消化实验
实验材料动物组织 ［如肝、肾和（或）脾］试剂、试剂盒核缓冲液 A、B、C无 Ca 和 Mg 离子（CMF） 的 PBSNaOH2×TNESK 溶液CaCl2微球菌核酸酶（MNase） 储液仪器、耗材剃刀刀片或解剖刀培养皿带有聚四氟乙烯包被的磨棒的组织匀浆器电动组织磨碎机相差显微镜轻薄棉布玻璃离心管（
分离的细胞核的染色质的微球菌核酸酶消化实验
实验方法原理 实验材料 动物组织 ［如肝、肾和（或）脾］试剂、试剂盒 核缓冲液 A、B、C 无 Ca 和 Mg 离子（CMF） 的 PBSNaOH 2×TNESK 溶液CaCl2微球菌核酸酶（MNase） 储液仪器、耗材 剃刀刀片或解剖刀培养皿带有聚四氟乙烯包被的磨棒的组织匀浆器电动组织磨碎机 相差
蛋白质的双向电泳实验_等电聚焦法
蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。本实验目的是
于洋博士等发现基因组长片段DNA插入的新机制
我们身体中每个细胞的基因组DNA每天都会面临成千上万次的损伤。所幸的是，细胞中有一套能够修复各种类型损伤的机器来保证基因组的完整性（genome integrity）。修复DNA损伤的机器在从酵母到人所有的真核生物中都是非常保守的，因此酵母作为模式生物被广泛应用于DNA修复（DNA repair
双向扩散法—平板法的相关信息介绍
平板法是鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一。平板法的基本步骤是：先在平板玻璃上倾注一均匀的琼脂薄层，凝固后在琼脂板上打孔，孔径一般为3mm，孔间距通常在3～5mm，孔的排列可呈梅花形、双排形或三角形等。在相对的孔中加入抗原或抗体，放置湿盒37~C18—24h后，琼脂中各自扩散的抗原和相对应的
用缺失定位法进行基因定位
缺失定位法一个细胞中的两个同源染色体中的一个上有一个突变基因，另一染色体上有一小段已知范围的缺失，如果这一突变基因的位置在缺失范围内，便不可能通过重组而得到野生型重组体；如果突变基因不在缺失范围内，那么就可以得到野生型重组体。利用一系列已知缺失位置和范围的缺失突变型，便能测定突变型基因的位置。
大鼠星型胶质细胞培养实验——酶消化法
大鼠星型胶质细胞培养可以：（1）用于神经系统发育、分化及再生等基础研究；（2）脑缺血预处理上调神经保护蛋白的机制研究；（3）脑损伤和脑疼痛的研究；（4）新蛋白的功能研究。实验方法原理大鼠星形胶质细胞原代培养后，作胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定，应用缺氧D-Hanks'液及缺
小鼠肝细胞原代培养实验——胰酶消化法
小鼠肝细胞原代培养可用于：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS
人滑膜细胞原代培养实验_酶消化法
人滑膜细胞原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）用于相应细胞生理、形态学研究；（3）用于相关疾病研究。实验方法原理将人滑膜从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置α-MEM生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料滑膜组织试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清生理盐水
人滑膜细胞原代培养实验_酶消化法
人滑膜细胞原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）用于相应细胞生理、形态学研究；（3）用于相关疾病研究。实验方法原理将人滑膜从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置α-MEM生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料滑膜组织试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清生理盐水
双向免疫扩散实验
抗原、抗体在凝胶中扩散，并进行沉淀反应，叫做免疫扩散反应（immunodiffusion）。将抗原与其相应抗体放在凝胶（如琼脂）平板中的邻近孔内，使它们互相扩散，当扩散到两者浓度比例合适的部位相遇时，即出现乳白色的沉淀线，称为双向免疫扩散试验。此方法是由 Ouchterlony 所提出，因此又称 O
双向免疫扩散实验
实验方法原理 双向免疫扩散试验不仅可对抗原或抗体进行定性鉴定和测定效价，还可对抗原或抗体进行纯度分析和同时对两种不同来源的抗原或抗体进行比较，分析其所含成分的异同。若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线（图 1）。因此，利用此法可进行抗原或抗体的纯度分析。图 1 双
湿法消化法的特点
湿法的特点是分解速度快，时间短，因加热温度低可减少金属的挥发逸散损失。缺点是消化时易产生大量有害气体，需在通风橱中操作，另外消化初期会产生大量泡沫外溢，需随时照看，因试剂用量较大，空白值偏高。
湿法消化法的分类
湿法破坏根据所用氧化剂不同分为如下几类：硫酸-硝酸法将粉碎好的样品放入250~500 mL凯氏瓶中（样品量可称10~20 g），加入浓硝酸20 mL，小心混匀后，先用小火使样品溶化，再加浓硫酸10 mL，渐渐加强火，保持微沸状态并不断滴加浓硝酸，至溶液透明不再转黑为止。每当溶液变深时，立即添加硝酸，
自杀法筛选营养突变体的方法介绍
中文名称自杀法英文名称suicide method定 义(1)筛选营养突变体的方法。在营养缺陷的培养基中，营养缺陷突变型的细胞或细菌不能生长。(2)将一种基因导入肿瘤细胞，该基因的产物能够将环境中某种物质转变成毒物而杀死肿瘤细胞的一种体细胞基因治疗方案。如将单纯疱疹病毒(HSV)的胸苷激酶(TK)
噬菌体铺平板产生噬斑实验——连续稀释法
实验方法原理这种方法能从单个噬斑中分离出纯的噬菌体部落，而且可以对噬菌体母液进行浓度测定。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒麦芽糖培养基仪器、耗材平板微波炉试管加热器毛细管实验步骤1. 在含0.2 %麦芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉汤培养基培养大肠杆菌至饱和。加0.3 ml的大肠杆菌培养液到
用插入诱变法分离突变体实验
实验材料酵母菌株BY4741试剂、试剂盒T4 DNA连接酶缓冲液Taq DNA 聚合酶仪器、耗材YPD平板锥形瓶SC-leu平板RNase A实验步骤展
大鼠星型胶质细胞培养实验——胰酶消化法
实验材料SD大鼠试剂、试剂盒苯巴比妥解剖液胰蛋白酶DnaseDM培养液仪器、耗材离心管培养箱手术器材实验步骤一、 取14.5d SD大鼠一只。二、 苯巴比妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手术台上，酒精棉球消毒皮肤，开腹取出子宫（约12-14个），放入解剖液中，剖开子宫，取出胚胎，放入解剖液中，
神经胶质细胞培养实验_胰蛋白酶消化法
实验材料大鼠试剂、试剂盒CMF-Hanks液胰蛋白酶DMEM F12仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤一、原代培养1. 选用生后1周的新生大白鼠，用碘酒,酒精棉球消毒，断头取其大脑皮层组织。 2. 解剖显微镜下，剥离脑膜，切除大脑髓质部分。 3. 将大脑皮质在无Ca2+、Mg2+Hanks液(CM
大鼠肝星状细胞原代培养实验_胰酶消化法
大鼠肝星状细胞原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD大鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠小牛血清DMEM酶消化液
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验_酶消化法
大鼠乳鼠成骨细胞培养培养用于：（1）获得大鼠乳鼠成骨细胞；（2）骨修复的细胞学机制研究。实验方法原理取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞是一种可靠、简便、快速的细胞原代分离培养
组织的分离实验_胶原酶消化分离法
实验方法原理胶原酶是一种由细菌中提取出的酶，对胶原有很强的消化作用，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。上皮细胞本身对胶原酶有一定耐性，但胶原酶对细胞间质有好的消化作用，可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害，效果甚好。此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性，故可用BSS和含有血清的培养液配制。实验
人脐动脉平滑肌细胞培养实验——消化法
人脐动脉平滑肌细胞培养可以：（1）获得人脐动脉平滑肌细胞；（2）作为重大动脉疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。实验方法原理运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。实验材料脐带试剂、试剂盒胶原
双向电泳的实验过程
实验原理2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。主要试剂1. BSA2. Bradford液3. DTT 4. 0.05% 的溴酚兰 5. IPG buffe
双向电泳的实验过程
实验概要本实验介绍了双向电泳的详细实验过程。实验原理2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。主要试剂1. BSA2. Bradford液3. DTT4. 0.
双向电泳的实验过程
一、 实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。二、 实验步骤：1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300u
琼脂扩散实验——双向琼脂扩散
实验材料待测血清试剂、试剂盒生理盐水琼脂粉仪器、耗材载玻片打孔器微量进样器实验步骤1. 取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0毫升加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。2. 凝固后，用直径3毫米打孔器，孔间距为5毫米。孔的排列方式如图2所示。图2 双向琼脂扩散原抗体孔位置示意图3. 用微量进样器于中央
消化炉微波消化法的优势及注意事项
一般而言消化炉的应用十分常见，在物质消化过程中的优势也是十分常见的。目前,微波消化技术已广泛应用于地质、冶金、煤炭、石油、坏保等领域的分析工作中。针对生物样品的特点,改革了常用的微波消化方法,取得满意结果。 准确取一定量样品于合适的消化罐的聚四氟乙烯内胆中,加入一定量的消化试剂后晃动几次,使样品与试
IEF/SDSPAGE双向电泳法
1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外
脐带和脐血来源干细胞的培养实验_酶消化法
实验材料脐带试剂、试剂盒Wharton胶PBSA胶原酶仪器、耗材培养瓶实验步骤(a)脐带取材后，可在PBSA中保存1〜24h。(b)除去血管，将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块。(c)将剪碎的组织块转移到50mL离心管，用无血清DMEM洗，室温250g离心5min。(d)倒掉上清液，将离