蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
实验材料 带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒pVgRXR培养的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 新霉素松甾酮 AZeocin培养液实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。新霉素松甾酮 A蜕皮激素的另一种类似物是 muristerone A(Sigma 公两)。Zeocin培养液适合要转染的细胞生长的培养液根据不同需要,培养液必须补充 Zeocin、新霉素和松甾酮 A。附加试剂本方案步骤 1、2 和 6 需要列在第 16 章适合的转染方案中的试剂。本方案步骤 4 需要列在本章方案 6 中的试剂。本方案步骤 8 需要列在第 6 章方案 8、第 7 章方案 8 或附录 8 中的试剂。载体和菌株带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒(如 Invitrogen 公司的 pIND 系列)带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒pVgRXR (Invitrogen 公司)细胞和组......阅读全文
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
实验材料 带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒 带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒 pVgRXR 培养的哺乳动物细胞
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
下面的方案是从蜕皮激素诱导的哺乳动物表达系统(Invitrogen 公司)附带的方案修改而来。Stratagene 公司也出售相似的系统。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验材料带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
实验材料 带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒pVgRXR培养的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 新霉素松甾酮 AZeocin培养液实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。新霉素松甾酮 A蜕皮激素的另一种类似物是 muristerone A(Sig
四环素作为可诱导基因表达的调控物实验
下面的方案分成 3 个阶段:用 pTet-tTAk 稳定转染成纤维细胞,稳定转染可诱导表达 tTA 的 NIH-3T3 细胞,分析转染细胞中的蛋白表达。稳定转染细胞系表达反式激活因子和靶基因分为两个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验
四环素作为可诱导基因表达的调控物实验
实验材料 pSV2-His 带有靶基因开放阅读框的 pTet-Splice 带有报道基因的 pTet-Spliqe NIH-3T3 细胞 pPGKPuro
四环素作为可诱导基因表达的调控物实验(一)
实验材料 pSV2-His带有靶基因开放阅读框的 pTet-Splice带有报道基因的 pTet-SpliqeNIH-3T3 细胞pPGKPuro可诱导表达自调控 tTA 的稳定细胞系试剂、试剂盒 CaCl2小牛血清 氯喹HEPES 缓冲液磷酸缓冲液合适的限制性内切酶胰酶-EDTADMEM 完全培养
四环素作为可诱导基因表达的调控物实验(二)
21. 当单层细胞再次生长到大约 80% 汇合度,每个细胞克隆收集一部分,在液氮中冻存。余下的细胞进行传代培养,直到数量足够用于测试蛋白的诱导表达。以后使用冻存细胞的时候, 需要复苏,然后在含有 500umol/L L-组氨醇和 0.5ug/ml 四环素-HCl 但不含组氨酸的 DMEM 培养液中培
什么是基因表达调控?基因表达调控有什么意义
意义:1.适应环境、维持生长和增殖:生物体赖以生存的外环境是在不断变化的,为了生存,所有活细胞都必须对外环境变化作出适当反应,调节代谢,以适应环境变化。生物体适应环境、调节代谢的能力与蛋白质分子的生物学功能有关。而蛋白质的水平又受基因表达的调控。2.维持个体发育与分化:多细胞生物调节基因的表达除为适
华人教授:细胞基因表达调控新见解
最近,康奈尔大学的研究人员,通过在纳米级的精密度上追踪蛋白质在活细胞中的运动,对细胞调节其基因表达的方式,获得了新的认识。 每个活细胞里的DNA都包含着“基因蓝图”,指导细胞制造所需要的蛋白质。当需要一种特定的蛋白质时,一个调节蛋白会结合到DNA链上适当的位置,从而导致相邻的基因被“表达”而制
基因表达的调控
转录调控可分为三种主要途径:1)遗传调控(转录因子与靶标基因的直接相互作用);2)调控转录因子与转录机制相互作用,3)表观遗传调控(影响转录的DNA结构的非序列变化)。通过转录因子直接调控靶标DNA表达是最简单和最直接的转录调控改变转录水平的方法。基因的编码区周围通常都具有几个蛋白质结合位点,具有调
外源基因的诱导表达
1.目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2.原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长,lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖),解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-
基因表达调控主要表现
基因表达调控主要表现在以下几个方面:①转录水平上的调控;②mRNA加工、成熟水平上的调控;③翻译水平上的调控;
基因表达调控的概念
基因表达调控是生物体内基因表达的调节控制,使细胞中基因表达的过程在时间、空间上处于有序状态,并对环境条件的变化作出反应的复杂过程。基因表达的调控可在多个层次上进行,包括基因水平、转录水平、转录后水平、翻译水平和翻译后水平的调控。基因表达调控是生物体内细胞分化、形态发生和个体发育的分子基础。
什么是基因表达调控
意义:1.适应环境、维持生长和增殖:生物体赖以生存的外环境是在不断变化的,为了生存,所有活细胞都必须对外环境变化作出适当反应,调节代谢,以适应环境变化。生物体适应环境、调节代谢的能力与蛋白质分子的生物学功能有关。而蛋白质的水平又受基因表达的调控。2.维持个体发育与分化:多细胞生物调节基因的表达除为适
基因表达调控主要表现
基因表达调控主要表现在以下几个方面:①转录水平上的调控;②mRNA加工、成熟水平上的调控;③翻译水平上的调控;
什么是基因表达调控
分为转录水平上的基因表达调控和翻译水平上的基因表达调控。1.转录水平的调控:包括DNA转录成RNA时的是否转录及转录频率的调控,DNA的序列决定了DNA的空间构型,DNA的空间构型决定了转录因子是否可以顺利的结合到DNA的调控序列上,比如结合到TATA等序列上。2.翻译水平的调控:翻译水平的调控又可
四环素控制系统诱导基因表达实验
pTet-tTAK 稳定转染(第一轮) pTet-tTAK 稳定转染(第二轮) 实验方法原理 tTA 是一种融合蛋白,它是由来自于大肠杆菌的四环素抑
四环素控制系统诱导基因表达实验
实验方法原理 tTA 是一种融合蛋白,它是由来自于大肠杆菌的四环素抑制蛋白和疱疹病毒的 VP16 蛋白的转录激活区域组成的。在缺乏四环素时,tTA 就结合到并激活位于基因前端的由 Tn10 和一个小的 CMV 启动子组成的七聚体结构的四环素抗性控制子(简称 Tet P)。当 tTA 结合
基因表达的调控模式介绍
转录调控可分为三种主要途径:1)遗传调控(转录因子与靶标基因的直接相互作用);2)调控转录因子与转录机制相互作用,3)表观遗传调控(影响转录的DNA结构的非序列变化)。通过转录因子直接调控靶标DNA表达是最简单和最直接的转录调控改变转录水平的方法。基因的编码区周围通常都具有几个蛋白质结合位点,具有调
基因表达调控的主要表现
基因表达调控主要表现在以下几个方面:①转录水平上的调控;②mRNA加工、成熟水平上的调控;③翻译水平上的调控;
基因表达调控定义是什么
基因表达调控的意义一方面是使生物体适应环境的不断变化,维持其生存的需要。从低等生物到人体各种生物在处于环境变化,如营养、温度、渗透压改变时,能够对环境信号作出反应,改变各种自身基因表达速率,调整体内参与相应功能的蛋白质的种类、数量,改变代谢状况/-以适应环境需要。另一方面是保证多细胞生物进行正常地分
细胞化学基础植物叶绿体基因组基因表达调控的研究
叶绿体基因组的特点是具相同或相关功能的基因组成复合操纵子结构。这一特点有利于叶绿体基因的表达与调控,例如rpoB-rpoC-rpoC 2操纵子是由编码RNA聚合酶各个亚基的基因聚合在一起而形成的,而psbI-psbK-psbD-psbC操纵子则编码PSⅡ的部分蛋白质。叶绿体基因组基因表达调控方式。转
组蛋白修饰分工调控基因表达水平和基因表达噪音
基因表达过程依赖于转录因子、染色质调控因子和染色质等生物大分子在布朗运动过程中的随机碰撞,因此,即使是基因型和分化类型完全相同的细胞在相同环境下也存在基因表达的差异,被称为基因表达噪音。研究基因表达噪音,对研究干细胞增殖分化、个体发育、病原菌的抗药性以及农作物的稳产有着重要的意义,而其在人类早期
单细胞基因表达分析解密血液早期发育调控网络
近日,著名国际期刊nature biotechnology发表了英国科学家的一项最新研究成果,他们应用单细胞基因表达分析与计算方法描述了血液发育的转录调控网络。这项研究为分析器官发育的调控网络提供了一种可行的方法。 研究人员指出,重建调控器官发育的分子途经受限于缺少对胚胎祖细胞进行研究的方法,
《细胞》:三效合一的新型基因表达调控技术
研究人员研制出一种分子开关,能够可逆控制哺乳动物基因的开启和关闭,控制基因的表达水平,将对生物学过程和疾病相关基因的研究的精确度提高到一个更高的水平。详细内容刊登于上周《Cell》。 作者对这项研究“允诺了很多,”明尼苏达大学Perry Hackett(未参与研究)说,“他们兑现了允诺。” 研究
“调控护盾”让小菜蛾进化出杀虫剂高抗性
苏云金芽胞杆菌(Bt)能产生多种杀虫蛋白,高效特异的杀死多种农业害虫。然而,全世界已经有13种重要的农业害虫对Bt生物杀虫剂或转Bt基因抗虫作物产生了抗药性。 近日,中国农业科学院蔬菜花卉研究所研究员张友军团队破解了最早被报道对Bt生物杀虫剂产生抗药性的农业害虫小菜蛾适应性进化的分子机制,首次
“调控护盾”让小菜蛾进化出杀虫剂高抗性
苏云金芽胞杆菌(Bt)能产生多种杀虫蛋白,高效特异的杀死多种农业害虫。然而,全世界已经有13种重要的农业害虫对Bt生物杀虫剂或转Bt基因抗虫作物产生了抗药性。小菜蛾幼虫。受访者供图近日,中国农业科学院蔬菜花卉研究所研究员张友军团队破解了最早被报道对Bt生物杀虫剂产生抗药性的农业害虫小菜蛾适应性进化的
关于基因表达调控的技术简介
基因调控是现代分子生物学研究的中心课题之一。因为要了解动植物生长发育规律。形态结构特征及生物学功能,就必须搞清楚基因表达调控的时间和空间概念,掌握了基因调控机制,就等于掌握了一把揭示生物学奥秘的钥匙。基因表达调控主要表现在以下几个方面: ①转录水平上的调控; ②mRNA加工、成熟水平
基因表达调控的方式有哪些
基因表达调控分为很多水平:1.DNA和染色体水平:基因丢失、基因修饰、基因重排、基因扩增、染色体结构变化.2.转录水平调控(主要调控方式):转录起始、延伸、终止均有影响.原核生物借助于操纵子,真核生物通过顺式作...
基因表达转录调控的主要途径
基因表达转录调控可分为三种主要途径:1)遗传调控(转录因子与靶标基因的直接相互作用);2)调控转录因子与转录机制相互作用,3)表观遗传调控(影响转录的DNA结构的非序列变化)。