用PCR控制基因组DNA文库的质量实验
试剂、试剂盒 ddH20Vent 缓冲液Vent DNA 聚合酶 dNTP质粒 DNAPCR 引物仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备热循环仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ddH202. 酶和酶缓冲液10X Vent 缓冲液Vent DNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸dNTP，各 20 mmol/LPCR 引物，可以与基因组 DNA 文库克隆位点两侧的载体序列退火质粒 DNA(见下面第 1 步）4. 特殊设备琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备，包括溴化乙锭 (见第 5 步）热循环仪二、方法1. 在细菌中扩增后，用基因组文库制备的质粒 DNA 建立下列反应。10~50ng 的质粒 DNA50pmol 的各引物5ul 的 10XVent 缓冲液dATP、dCTP、dTTP 和 dGTP, 各 0.5ul1U 的 Vent DNA 聚合酶用 ddH20 定容至 50ul对下面的每种质粒载体应......阅读全文
DNA文库的构建及其筛选
实验方法原理 高等植物基因组的一个显著特征是其内含有大量的 DNA 重复序列, 重复序列常位于异染色质区, 因此可能与染色体的结构有关 . 季静等根据国际上 对基因组、染色体、结构蛋白的研究前沿, 提出染色体 DNA 平均每隔 30 kb
DNA文库的构建及其筛选
实验材料 DNA试剂、试剂盒 升汞MS培养基琼脂糖EcoR IHind IIIBamH IBg lII Pst I仪器、耗材 电泳仪尼龙膜实验步骤 1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取参照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分离总基因组DNA并略有修改。 通过
DNA文库的构建及其筛选
DNA文库的构建和筛选可以用于：（1）将某生物的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度的DNA片段，再与适合的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。 （2）采用“化整为零”策略，将庞大的基因分解成一段段，每段包含一个或几个基因。实验方法原理高等植物基因组的一个显著特征
纯化DNA实验_基因组DNA的快速纯化
试剂、试剂盒尾部缓冲液蛋白酶 K仪器、耗材离心管玻璃棒实验步骤第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液（配 25 ml）50 mmol/L
用杂交的方法筛选大片段插入的文库实验
实验步骤由于原代的转化子只能产生数目有限的滤膜，因而随机铺板不适合滤膜的制备以及 YAC、BAC 和 PAC 文库的保存，而且由于克隆增殖率存在差别，因而无论是哪一种扩增形式都会将偏差带人文库中去。因此，原代的转化子应加入微孔板中，放置于-8℃ 保存。这使得制造分配用的文库拷贝变得简单易行，而且使组
用杂交的方法筛选大片段插入的文库实验
由于原代的转化子只能产生数目有限的滤膜，因而随机铺板不适合滤膜的制备以及 YAC、BAC 和 PAC 文库的保存，而且由于克隆增殖率存在差别，因而无论是哪一种扩增形式都会将偏差带人文库中去。因此，原代的转化子应加入微孔板中，放置于-8℃ 保存。这使得制造分配用的文库拷贝变得简单易行，而且使组
PCR扩增DNA（PCR－Amplify－DNA）实验原理、材料和操作步骤
【实验原理】聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是一种体外 DNA扩增技术，1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中，将人为选定的一段DNA扩增几百万倍，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点，目前已成为分子生物学及基因工程中极为
提取基因组dna后，怎样判断dna的纯度和质量
用紫外分光光度计测od值a260/a280正常1.8左右如果制备的dna样品a260/a2802，说明样品中rna过高，可用rnase消化后，用酚、氯仿、异戊醇抽提，再用乙醇沉淀dna
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验
酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA 改进的石蜡切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰冻片 含血标本 胸腹水或尿液
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验
实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打开 Eppendor
目的基因的获取1
基因工程的主要目的是使优良性状相关的基因聚集在同一生物体中，创造出具有高度应用价值的新物种。为此必须从现有生物群中，根据需要分离出用于克隆的此类基因。这类基因称之为目的基因，即准备要分离、改造、扩增或表达的基因。目前目的基因的获取方法主要有以下2类：（1）已知基因的获得：PCR分离法和化学合成法等（
痘苗DNA检测实验——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 杂交可以检测病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA。实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
PCR检测质量的控制方法及影响因素分析
PCR检测质量的控制是一个系统工程，总体上涉及三个方面：一是试验仪器；二是试验试剂与耗材；三是人员操作。任何一个方面出现问题，都会影响PCR检测质量。 一、试验仪器 PCR仪和紫外凝胶成像系统（紫外分析仪或手提紫外等）以及移液器都可能影响PCR检测的质量。PCR仪是控制PCR反应温度变化的，
新一代高通量测序技术SOLiD简介
目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligation
新一代高通量测序技术SOLiD简介
目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligation
高通量测序技术SOLiD简介
目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligat
PCR室间质量控制操作程序
1．目的：室间质评（EQA）是实验室质量控制体系中重要部分，是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠性，以及各实验室间结果的可比性的重要手段。2．适用范围：卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。3．负责人： 操作人：4．程序：4.1质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人
细菌基因组DNA提取实验
细菌基因组DNA提取可应用于：（1）获得细菌基因组DNA；（2）作为PCR模板；（3）用于测序、遗传信息分析等。实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DN
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K 裂解）从抗凝全血中得到基因组DNA。 实验材料 抗凝全血
细菌基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。实验材料 细菌培养物
细菌基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K 裂解）从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料 抗凝全血试剂、试剂盒 血基因组DNA 试剂盒仪器、耗材 96孔深孔板96圆孔板96孔DNA制备板
基因克隆技术
一、目的基因的获得 目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-
基因克隆技术
一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-多聚酶链式
NGS上Hiseq机器前的准备工作：核酸提取、文库构建、簇生成
完整的二代测序工作流程都包括5个环节：核酸提取，文库制备，簇生成，测序，数据分析。本文讲述illumina公司NGS文库上机前的准备工作：核酸提取、文库构建、簇生成。1 核酸提取 (DNA/RNAExtraction)按照常规方法从培养的细胞、外周血、新鲜冷冻组织或石蜡包埋组织(FFPE)等不同种类
Illumina平台测序文库精确定量试剂盒的实用数据对比
生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。 第一代测序仪对电泳分离技术的依赖，使其难以进一步提高分析的速度和并 行化程度，也难以通过微型化降低测序成本。经过不断的技术开发和改进， 21世纪初，以Roche454技术、illumina公司的GenomeAnal
染色体显微切割及新进展
提要 染色体显微切割技术是细胞遗传学与分子遗传学相结合的一项桥梁技术。近年来，该技术在同源基因的定位和克隆的价值深受关注。本文结合显微切割的经验，对其应用和新进展进行了综述。 完成人类基因组计划的全序列分析，需要构建基因高分辨遗传图谱和物理图谱，如何快速有效的获得染色体区
染色体显微切割及新进展
提要 染色体显微切割技术是细胞遗传学与分子遗传学相结合的一项桥梁技术。近年来，该技术在同源基因的定位和克隆的价值深受关注。本文结合显微切割的经验，对其应用和新进展进行了综述。 完成人类基因组计划的全序列分析，需要构建基因高分辨遗传图谱和物理图谱，如何快速有效的获
用－dUTP－净化－PCR－产物的实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 MgCl2 溶液 PCR 缓冲液 引物 尿嘧啶-DNA-糖基酶 Taq DNA 聚合酶
用－dUTP－净化－PCR－产物的实验
在 PCR 扩增过程中将 dUTP 掺入复制子是最为有效和广泛使用的净化 PCR 产物的方法（Longoetal.1990;HartleyandRashtchian1995)。下面介紹这一方法的详细操作过程。本实验来源于PCR实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒dNTP 溶液MgCl