用PCR控制基因组DNA文库的质量实验
试剂、试剂盒 ddH20Vent 缓冲液Vent DNA 聚合酶 dNTP质粒 DNAPCR 引物仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备热循环仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ddH202. 酶和酶缓冲液10X Vent 缓冲液Vent DNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸dNTP，各 20 mmol/LPCR 引物，可以与基因组 DNA 文库克隆位点两侧的载体序列退火质粒 DNA(见下面第 1 步）4. 特殊设备琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备，包括溴化乙锭 (见第 5 步）热循环仪二、方法1. 在细菌中扩增后，用基因组文库制备的质粒 DNA 建立下列反应。10~50ng 的质粒 DNA50pmol 的各引物5ul 的 10XVent 缓冲液dATP、dCTP、dTTP 和 dGTP, 各 0.5ul1U 的 Vent DNA 聚合酶用 ddH20 定容至 50ul对下面的每种质粒载体应......阅读全文
高质量－DNA－的纯化实验
实验材料 乳腺瘤组织 试剂、试剂盒 EDTA 异丙醇裂解缓冲液 细胞核裂解缓冲液
高质量－DNA－的纯化实验
实验材料 乳腺瘤组织试剂、试剂盒 EDTA异丙醇裂解缓冲液细胞核裂解缓冲液Triton 裂解缓冲液仪器、耗材 水浴锅破璃棒实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂EDTA，100 mmol/L异丙醇裂解缓冲液10 mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTA150 mmol/LNaCl0.5
高质量－DNA－的纯化实验
应用经过修改的 Miller 等（1988) 的盐沉淀方法纯化 DNA，不使用酚和氯仿，比较温和，有效防止了长的染色体 DNA 的断裂。在第 9 章中讲述了另一种 DNA 纯化的方法。这种方法可以沉淀细胞核，已被成功地用于对血液样品、培养的细胞和乳腺瘤组织DNA 的纯化。本实验来源于 PCR 实验指
酵母菌基因组转座子的诱变实验—－小载体聚合酶链反应
实验材料诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒锚定囊泡引物1和2 、1 mol L MgCl2、普通小载体（UV)和mTn引物、转座子诱变酵母菌株、合适的限制性内切核酸酶（如AZmI或DraI)和缓冲液、10×T4 DNA连接酶缓冲液、5 mmol L ATP、400 U μL T4 DNA连接
BAC/PAC－文库的构建
BAC文库的构建 实验方法原理 BAC是一种装载DNA大片段的克隆载体系统，用于人、动物和植物基因组文库构建。BAC具有插入片段较大(几千个碱基至350kb)
ChIPSeq分析常见问题集锦
染色质免疫共沉淀测序（ChIP-Seq）是指对染色质免疫共沉淀（ChIP）获得的DNA片段进行大规模测序，并能把所研究蛋白的DNA结合位点精确定位到基因组上。Roche GS FLX Titanium 、Illumina Hiseq2000和AB SOLID 4 这3种测序技术均可以用于ChIP-
用－dUTP－净化－PCR－产物的实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 MgCl2 溶液PCR 缓冲液引物尿嘧啶-DNA-糖基酶 Taq DNA 聚合酶仪器、耗材 PCR 仪离心管实验步骤 一、材料1. 试剂（1）dNTP溶液（含有dATP、dCTP、dGTP和dUTP，每种浓度10 mmol/L)多数情况下，直接替换dUTP就可以
用－dUTP－净化－PCR－产物的实验
在 PCR 扩增过程中将 dUTP 掺入复制子是最为有效和广泛使用的净化 PCR 产物的方法（Longoetal.1990;HartleyandRashtchian1995)。下面介紹这一方法的详细操作过程。本实验来源于PCR实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒dNTP 溶液MgCl
用－dUTP－净化－PCR－产物的实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 MgCl2 溶液 PCR 缓冲液 引物 尿嘧啶-DNA-糖基酶 Taq DNA 聚合酶
BAC/PAC－文库的构建
BAC (Bacterial Artificial Chromosome，细菌人工染色体)文库可用于：（1）全基因组测序；（2）构建物理图谱、染色体步查；（3）基因筛选；（4）基因图位克隆。实验方法原理BAC是一种装载DNA大片段的克隆载体系统，用于人、动物和植物基因组文库构建。BAC具有插入片段较
用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法（一）
一种用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法 来源：方统科技----------------------------------------------------------------------------------摘要： 本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法
用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法（二）
2 结果与讨论2.1 PCR模板DNA的快速制备本方法是将少量植物叶片在TE溶液或去离子水中，经钨合金珠在离心管内的振荡破碎，直接获得DNA溶液。用多功能组织细胞研磨器（MTM-60）一次可操作60个样品。琼脂糖凝胶电泳表明，用TE和去离子水都可获得分子量较大的DNA片段（图1A）。用TE制备的DN
让基因组测序绕过PCR
在基因组测序中，PCR扩增似乎是绕不过去的一步。然而，PCR也带来一些问题，包括不均匀扩增，导致某些序列的比例过高。对目前的新一代测序（NGS）平台而言，测序某些碱基组成上存在严重偏向的基因组区域仍是一大挑战。在GEN杂志上，Patricia Fitzpatrick Dimond博士介绍了PCR-
让基因组测序绕过PCR扩增
在基因组测序中，PCR扩增似乎是绕不过去的一步。然而，PCR也带来一些问题，包括不均匀扩增，导致某些序列的比例过高。对目前的新一代测序（NGS）平台而言，测序某些碱基组成上存在严重偏向的基因组区域仍是一大挑战。在GEN杂志上，Patricia Fitzpatrick Dimond博士介绍了PCR
基因分离克隆的方法
1 基因芯片技术分离目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的，并按预先设定好的顺序点阵。基因芯片是生物芯片的一种，其上固定的是核算类物质，主要用于DNA、RNA分析。分为DNA芯片和微点阵两种。分离目的基因是是指从基因组中发现或找出某个
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板试剂、试剂盒 dNTP PCR 缓冲液聚合酶混合液嵌套引物LB-氨苄
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
对于高通量的筛选，推荐使用几个热循环仪厂家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板，或者使用单个的管子。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验方法原理dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR
BAC文库构建方法与技巧
基因组DNA文库有十分广泛的用途，如用于分析、分离特定的基因片段，用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DNA
BAC文库构建方法与技巧
基因组DNA文库有十分广泛的用途，如用于分析、分离特定的基因片段，用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DNA
Agilent针对新一代测序技术推出高灵敏度DNA试剂盒
安捷伦科技公司推出针对新一代测序技术流程中DNA文库检测的高灵敏度DNA试剂盒 2009年4月30日，北京 ——安捷伦科技公司（NYSE：A）正式推出了一种新型的高灵敏度DNA试剂盒，可以用于新一代测序（NGS）技术流程中的DNA剪切和文库构建等关键步骤的质量控制、DNA片段
BAC文库构建方法与技巧
基因组DNA文库有十分广泛的用途，如用于分析、分离特定的基因片段，用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA（gDNA）
动物基因组DNA－的分离纯化实验
实验方法原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出, 达到分离提纯的目的。在0 . 14 mol/ L 的氯化钠溶液中, RNA 核蛋白(RNP) 溶解度大, 而DNA
动物基因组DNA－的分离纯化实验
盐溶法 实验方法原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用
水稻幼苗或其它禾木科植物提取
实验概要本实验以水稻幼苗(禾本科)、李(苹果)叶子为材料，学习基因组DNA提取的一般方法。实验原理基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的
用－PCR－分析连接反应的底物和产物
由 PCR 产生的合成 DNA 文库，可以经过酶切消化，连接到线性化的表达载体系统上。在这里所列的方案中，文库的 5’（NotⅠ）和 3'(ClaⅠ) 末端是不同的酶切位点，也用同样的酶切位点克隆进载体。可以用 PCR 分析线性化反应和连接反应的效率。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版）
研究揭示线粒体DNA质量控制的新机制
广州医科大学基础医学院教授冯杜团队研究揭示了线粒体DNA（mtDNA）质量控制的新机制，报道了线粒体转录因子A（TFAM）作为自噬受体介导胞质中mtDNA的清除，进而限制炎症反应。相关成果5月23日在线发表于《自然-细胞生物学》（Nature Cell Biology）。TFAM介导应激状态下m
研究揭示线粒体DNA质量控制的新机制
广州医科大学基础医学院教授冯杜团队研究揭示了线粒体DNA（mtDNA）质量控制的新机制，报道了线粒体转录因子A（TFAM）作为自噬受体介导胞质中mtDNA的清除，进而限制炎症反应。相关成果5月23日在线发表于《自然-细胞生物学》（Nature Cell Biology）。TFAM介导应激状态下mtD
细菌中制备基因组DNA实验
小量制备 氯化铯法 实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿
细菌中制备基因组DNA实验
实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。实验材料 细菌试剂、试剂盒 TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB仪器、耗材 离心机摇床实验步骤 1