Westernblot如何进行实验质控
WB实验总做不好，那么如何进行WB实验质控呢？ 做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安，出来结果时的彷徨无措，为什么条带没有出啦，为什么背景这么高，为什么受伤的总是我，看着旁边小伙伴漂亮的结果图，心生羡慕嫉妒，那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。 蛋白样品： 准备好裂解液后，使用BCA或Bradford等检测方法仔细测量蛋白浓度。进行上样时，确保加入等量的蛋白样品，以确保公平比较，从而最大限度地减少上样误差。不要使凝胶过载！如果您的表达目标非常低，可选择加样孔体积大的凝胶，这样可提高上样量。 阳性和阴性对照： 这些质控对于证明您的结果有效至关重要。阳性对照通常是裂解物或组织提取物，其具有过度表达的蛋白。当您的阳性对照未能发出信号时，您知道该方法可能存在问题。如果您正在使用重组蛋白，那么包含内源形式靶标的阳性对照也是一个好主意。这将有助于理清与一抗相关的任何特异性问题。......阅读全文
western－blot试验心得
前两天做了一个western blot,现在把试验中的一点小小的体会发上来，与大家交流，希望大家多多指点！1 本实验室采用的脱脂奶粉已经存放了近两年了，虽然是四摄氏度保存，但是其封闭质量还是难以保证的。所以本人的试验结果中出现了小斑点。建议最好使用BSA或专用的脱脂奶粉进行封闭，虽然贵点，但还是有个
Western－Blot－with－Platelet－Protein
OUTLINEWestern blot is a wide used technique to identify a target protein/s for the certain antibody.PROTOCOLPrepare platelets.Lyse washed platelets (
Western－Blot操作步骤
背景： 蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术
Western－Blot详解（四）
还有一种离子交换型膜是羧甲基（CM）修饰的纤维素膜，它可以结合蛋白和多肽分子，以及其他的一些带正电荷的样品，最适结合pH范围在4-7。结合的多肽分子可以从CM膜上洗脱下来，用于氨基酸系列分析或微测序。5.Marker的相关疑问MM.我用的是可视marker（BIO_RAD），但是电泳总跑不全8条带，
Western－Blot详解（三）
3.抗体 T.做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。 U.同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的E
如何提细胞的组蛋白做western－blot
你的意思就是提取核蛋白，提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的。一般情况下我们都是买试剂盒，里面包含有细胞裂解液和核裂解液，按照说明书实用就行了。120mmol/L的Hepe（PH7.9）2420mmol/LNaCl31.5mmol/LMgCl242%Igepal50.5mmo/LEDTA620
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验需要准备什么试剂和耗材
1.1细胞①将细胞培养皿置于冰上，用冰冷得PBS洗涤细胞2次②吸出PBS，加入裂解液（碧云天P0013；1%TritonX-100；）a.融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶
Western－Blot实验中封闭液的选择
封闭是Western Blot 至关重要的一部分， 所以正确的封闭液选择可以让抗体更特异地和抗原结合，为成功的WB奠定基础。虽然这个步骤操作简单，但是封闭液的选择确是很多科研人员的难题。为了让大家更方便的选择适合自己实验的封闭液，这里给大家介绍6种不同的封闭液，以及它们的优缺点。1、脱脂奶粉最好
Western－blot实验步骤及注意事项1
一.实验步骤1. 组织块称重2. 利用液氮、研钵粉碎组织块3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PM
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
为什么要使用多重荧光方法进行western－blot的检测？
最近关于western blot数据造假的学术新闻成了科研的热搜词条，其数据造假包括，均存在一图多用，用了剪切，拼接，翻转，旋转，调整大小，故意抹平背景等P图手法，那我们来看看这些造假的数据。 一、一图两用——用同一条带，P图后代表不同实验结果。 两个不同实验，同一条带代表不同蛋白（
为什么要使用多重荧光方法进行western－blot的检测？
最近关于western blot数据造假的学术新闻成了科研的热搜词条，其数据造假包括，均存在一图多用，用了剪切，拼接，翻转，旋转，调整大小，故意抹平背景等P图手法，那我们来看看这些造假的数据。一、一图两用——用同一条带，P图后代表不同实验结果。两个不同实验，同一条带代表不同蛋白（GST-IkBa和C
Azure－biosystems－如何选择合适的western－Blot成像方法
如何选择合适的western Blot成像方法 最合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息，以下内容将帮助您选择最佳实验方法。 化学发光方法 化学发光western blot是相对容易且灵敏度极高的检测方法，灵敏度可以达到fg级。 分子量差异显著的蛋
Azure－biosystems－如何选择合适的western－Blot成像方法？
如何选择合适的western Blot成像方法最合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息，以下内容将帮助您选择最佳实验方法。化学发光方法化学发光western blot是相对容易且灵敏度极高的检测方法，灵敏度可以达到fg级。分子量差异显著的蛋白，通过电泳可轻松分离，使用“化学发
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
Western－Blot哪种染色好？
阴离子染料是较常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达1.5ug，考马斯亮蓝虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S和快绿在检测后容易从蛋白质中除去，以便进行随后的氨基酸分析。胶体金，灵敏度高，检测范围可达到pg级，但染色稳定。 生物素话灵敏度位于1.2之间，可用于任何一种膜。
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
western－blot－中甲醇作用
westernblot转膜不用甲醇可以蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即westernblot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息
western－blot结果怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量
western－blot结果怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量
western－blot－条带怎么分析
把条带圈出来然后点测量 就是measure 出来的那个mean的数值就是灰度 应该说是白度值 条带越深数值越小
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
western－blot－marker的作用
电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以：1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移；2 确认转膜效率；3 根据marker的条带估计分子量；4 确定目的蛋白位置.
western－blot的条带分析
你的对照组是什么？对照组有没有出现问题？有问题的话是很可能是你在操作过程中有问题膜的质量是否有问题？