非标记抗体免疫酶组织化学实验

实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」,将它们连接起来,再将酶结合在抗酶抗体上,经显色显示抗原的定位。其基本流程为:抗原+特异性抗体 → 第二抗体(桥抗)→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2(显色)。因为桥抗体对特异性抗体的量是过剩的,与特异性抗体结合后还剩有抗原结合位点,能与抗酶抗体结合,所以桥抗体能起到连接特异性抗体和抗酶抗体的作用。在此过程中,酶是利用免疫学原理与抗酶抗体结合的,从而避免了由于酶标记抗体而引起的酶和抗体的活性损害,提高了方法的敏感性,降低了非特异性染色。染色原理见图 4-7。实验材料 石蜡切片动物血清冰冻切片细胞涂片试剂、试剂盒 胰蛋白酶特异性一抗桥抗体PBSDABH2O2丙酮甲醇抗酶抗体HRP 酶苏木精盐酸乙醇乙醇树胶仪器、耗材 滴管玻片实验步骤 1. 石蜡切片脱蜡至水,冰冻切片或细胞涂片经丙酮固定 10 mi......阅读全文

组织切片的免疫过氧化物酶标记实验

实验材料组织样品试剂、试剂盒PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材离心机加湿盒培养箱实验步骤1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片

组织切片的免疫过氧化物酶标记实验

实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材 离心机加湿盒培养箱实验步骤 1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿

非荧光标记的遗传标记分析技术

近年来,美国GENTEON公司采用激光致导的动态荧光检测技术(Dynamic fluorescence),结合多通道毛细管电泳技术,研制出Capella 400型全自动基因分析系统。该仪器采用动态荧光检测技术,彻底消除了传统荧光DNA标记检测的高成本和复杂性,可精确有效到检测未经标记的单链或双链核苷

标记抗体的应用技术

实验方法原理 ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用

标记抗体的概念和应用

抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体,是免疫电镜样品制备的一种方法,用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上,通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。抗体标记主要是用于抗原的

FITC标记抗体Marsshall氏法

材料:抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25—50ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L 等;方法与步骤:

FITC标记抗体Chadwick氏法

FITC标记抗体-Chadwick氏法试剂:抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L 、1%硫柳汞;材料:离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)等;方法与步骤:抗体的准备。用0—4℃ pH8.

FITC标记抗体Chadwick氏法

试剂:抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞; 材料:离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)等; 方法与步骤:1.       抗体的准备。用0—4℃ pH8.0的PBS

FITC标记抗体Marsshall氏法

材料:抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25—50ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等; 方法

FITC标记抗体改良法

FITC标记抗体-改良法 试剂: 1.0.01mol/L pH7.2 配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g, 溶于2000ml三蒸水中,调整pH至7.2; 2.0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5

酶标抗体制备技术戊二醛交联法的标记步骤

  (1)取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB将25%戊二醛稀释为1.25%),室温(20℃左右)反应结合18h。  (2)用0.15mol/LNaCl平衡过的Sephadex G-50凝胶柱洗脱,除去游离的戊二醛,或用0.01mol/L,pH7.2

简述碱性磷酸酶标抗体制备技术的标记步骤

  (1)取抗体(2~5mg/mL)1mL,加入AP 5mg溶解。   (2)装入透析袋,用0.01mol/L、Ph7.2PBS4℃透析18h,换液3次。   (3)加入2.5%戊二醛20uL,室温(20℃±)放置2h。4℃0.01mol/L、pH7.2PBS透析过夜,换液3次。   (4)移

酶标记的酶具有哪些特性?

  用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。  如今应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。

大鼠细小病毒抗体(RPV)酶联免疫分析

大鼠细小病毒抗体(RPV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中细小病毒抗体(RPV)的含量。实验原理:  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠细小病毒抗体(RPV)水平。用纯化的大鼠细小病毒(RPV)抗原包被微孔板,制成固

小鼠伤寒抗体(St-Ab)酶联免疫分析(ELISA)

小鼠伤寒抗体(St Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中伤寒抗体(St Ab)的含量。实验原理:   本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠伤寒抗体(St Ab)水平。用纯化的小鼠伤寒(St) 抗原包被微

猪细小病毒抗体(RPV)酶联免疫分析

猪细小病毒抗体(RPV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定猪血清,血浆及相关液体样本中细小病毒抗体(RPV)的含量。实验原理:  本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪细小病毒抗体(RPV)水平。用纯化的猪细小病毒 (RPV)抗原包被微孔板,制成固相抗原

小鼠破伤风抗体(Tetanus-Ab)酶联免疫分析

小鼠破伤风抗体(Tetanus Ab)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中破伤风抗体(Tetanus Ab)的含量。实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠破伤风抗体(Tetanus Ab)水平。用纯化的小鼠破

大鼠细小病毒抗体(RPV)酶联免疫分析

大鼠细小病毒抗体(RPV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中细小病毒抗体(RPV)的含量。实验原理:  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠细小病毒抗体(RPV)水平。用纯化的大鼠细小病毒(RPV)抗原包被微孔板,制成固

大鼠肺炎抗体(PneumoniaeAb)酶联免疫分析

大鼠肺炎抗体(Pneumoniae-Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中肺炎抗体(Pneumoniae-Ab)的含量。实验原理:   本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中大鼠肺炎抗体(

人登革热抗体(DFAb)酶联免疫分析

人登革热抗体(DF-Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中登革热抗体(DF-Ab)的表达。实验原理:  本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中人登革热抗体(DF-Ab)。用纯化的抗原包被微孔

人封闭抗体(BA)酶联免疫分析(ELISA)

人封闭抗体(BA)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中封闭抗体(BA)的含量。实验原理:  本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人封闭抗体(BA)水平。用纯化的人封闭抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被抗原的微孔中

猪瘟病毒抗体(CSFV-Ab)酶联免疫说明

本试剂盒仅供研究使用。                                                                   96T使用目的:本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中瘟病毒抗体(CSFV Ab)表达。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪瘟病毒

免疫标记技术常用的标记物介绍

  常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点,是应用最广泛的免疫学检测技术。  常用的免疫荧光素主要有:  1 .异硫氰酸荧光素 (FITC) ,最大吸收光谱为 490~495nm ,最大发射光谱为 520~530nm ,呈黄绿色荧光。  2 .

常用免疫组织化学方法的原理免疫酶标方法

免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,

酶免疫组织化学技术的组织处理有什么要求呢

  主要用于标本中抗原(抗体)的定位和定性检测。常用的标本有组织切片、组织印片和细胞涂片等。该技术染色标本可长期保存,可用普通光镜观察结果,可观察组织细胞的细微结构等优点,尤其是非标记抗体酶免疫组化法的敏感性更优于荧光免疫技术

标记免疫分析技术概述

  一、概要   定义:应用广泛、先进的免疫分析技术,是生物活性物质分析方法的新领域;基本技术是将多种标记示踪技术和高度灵敏性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的分析技术。   特点:灵敏度高,特异性强,重复性好,准确性高,操作简便,易于自动化商品化。   发展:放射免疫分析,免疫放射分析,

标记免疫分析技术概述

一、概要 定义:应用广泛、先进的免疫分析技术,是生物活性物质分析方法的新领域;基本技术是将多种标记示踪技术和高度灵敏性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的分析技术。 特点:灵敏度高,特异性强,重复性好,准确性高,操作简便,易于自动化商品化。 发展:放射免疫分析,免疫放射分析,酶标记免疫分析,

免疫标记法及其分类

免疫标记法及其分类1.荧光免疫法原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮,检测产物发出的荧光,荧光强度与Mb浓度呈正比,可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好,线性范围宽,具有快速、敏感、准确的特点。以双抗夹心法为例,首先将特异性抗体与

概述标记的免疫技术

  免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法,即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂,以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物(例如放射性核素、荧光素、酶等)进行标记,则在与标本中的相应抗体或抗原反应后,可以不必测定抗原抗体复合物

免疫标记技术介绍

免疫标记技术是指将抗原抗体反应与标记技术相结合,将已知的抗体或抗原标记上示踪物质,通过检测标记物,间接测定抗原-抗体复合物的一类实验方法。常用的标记物有酶,荧光素,放射性核素,化学发光物质及胶体金等。