病毒包装技术5——腺病毒载体的制备介绍
1 菌液的准备 1.1. 取含目的质粒的甘油菌液（-80℃或-20℃冰箱中），待菌液融化后，在超净台用接种环划线于氨苄抗性的平板上，37℃倒置培养12-16h。待平板长出菌落，挑选生长状态良好的单克隆菌落。若无目的质粒的菌液，则需取库存质粒进行转化，然后挑单克隆摇菌。 1.2. 将单克隆接种于5ml氨苄抗性的LB液体培养基中，37℃，220rpm/min，震荡培养12-16h； 1.3. 将上述的5ml LB菌液分装到2个2ml离心管中5000g 离心8 min，弃上清（将离心管倒置于纸巾上数分钟，除尽上清），细菌沉淀待用。 2 腺病毒质粒的抽提（参考AxyPrep™ 质粒小抽试剂盒说明书） 2.1 取250ul 已加入RNase A 的Buffer S1 对细菌沉淀进行悬浮，将细菌沉淀吹打需均匀，不应留有小的菌块。 2.2 取250ul Buffer S2加入到上述菌悬液中，温和并......阅读全文
灭活疫苗与腺病毒载体疫苗的区别
一、制备方法不同1、灭活疫苗：将培养扩增的活病毒通过理化方法，灭活以后经过系列纯化技术制备的疫苗。2、腺病毒载体疫苗：采取5型腺病毒作为载体，导入新冠病毒抗原基因，通过生物反应器制成活载体疫苗。二、特点不同1、灭活疫苗：主要特点是疫苗的成份和天然的病毒结构是比较相似的，是最接近。通常免疫应答也比较强
病毒包装技术7——腺相关病毒(AAV)包装介绍
锐赛小课堂技术篇0702-113 摘要: 腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒， 因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。但是也可以通过新的辅助质粒(pH
病毒包装技术8——病毒包装实验经验总结介绍
锐赛小课堂常识篇0703-115 病毒包装实验经验总结 第一，细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等）是三个主要影响病毒质量的因素。 第二，细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断，比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立
反转录病毒载体的制备实验
实验材料二个反转录病毒包装细胞株反转录病毒载体包含选择性标记试剂、试剂盒PBS细胞染色液组织培养皿仪器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基低蛋白质结合的纤维素乙酸盐注射器式滤器克隆形成环实验步骤展开
基本方案－运用－AdEasy－方法产生重组腺病毒载体
实验材料感兴趣的基因试剂、试剂盒具有卡那霉素抗性的 LB 培养基限制性内切核酸酶穿梭载体 DNA乙酸铵苯酚 氯仿 异戊醇乙醇电促感受态 BJ5183 细胞感受态 DH10B 细胞HBSS 或灭菌的 PBS仪器、耗材铺有卡那霉素抗性的 LB 固体培养基皿琼脂糖凝胶脂质转染 AMINE 试剂Opti-M
Science－|－为腺病毒载体疫苗设计提供新策略
Science | 为腺病毒载体疫苗设计提供新策略——黏膜相关恒定T（MAIT）细胞激活显著增强腺病毒载体诱导的T细胞反应 黏膜相关恒定T（MAIT）细胞是一类非常规的T细胞，可以识别微生物衍生的维生素B2生物合成代谢产物，如5-(2-氧代氧亚丙基氨基)-6-(d-核糖胺基) 尿嘧啶（5-OP
常用的基因转染技术病毒载体介绍
1、逆转录病毒载体 逆转录病毒为RNA病毒，它们的基因组编码在一条单链RNA上，病毒进入细胞通过逆转录作用，病毒RNA即转变为双链DNA分子，DNA进入细胞核并整合在细胞染色体中，这种整合的病毒称为原病毒。在原病毒的两端各有一长末端重复序列（LTR），LTR内侧还有为复制所必需的其他顺序，包括
预防腺病毒的方法介绍
腺病毒感染主要在冬春季流行，容易在幼儿园、学校和军营新兵中暴发流行。一般来说，腺病毒主要通过呼吸道飞沫、眼分泌物，经呼吸道或接触传播；肠道感染主要通过消化道传播。其预防措施和其他呼吸道、消化道传染病预防相似，主要是勤洗手，勤消毒，避免接触患者及其呼吸道飞沫。平常多饮水，多吃蔬菜和水果，注意锻炼身
关于腺病毒的分类介绍
分类及自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来，已陆续发现了100余个血清型，其中人腺病毒有52种，分为A、B、C、D、E和F六个亚群（subgroup）。基因治疗常用的人的2型及5型腺病毒在血清学分类上均属C亚群，在DNA序列上有95%的同源性。二者的增殖能力非常强，滴度通常可以达到109p
病毒包装技术——病毒包装实验经验总结
第一，细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等）是三个主要影响病毒质量的因素。第二，细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断，比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀细胞密度适中否等性状。另外转染时细胞的密度要十分注意，一般在
病毒包装技术——腺相关病毒(AAV)包装（一）
摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒， 因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。但是也可以通过新的辅助质粒(pH3和pH5)，排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AA
病毒包装技术——腺相关病毒(AAV)包装（二）
2.3 蛋白质分析 为了分析AAV Rep和Cap蛋白质表达，按照2.2部分所述进行质粒转染。转染后48小时，将培养物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2)，细胞低速离心沉淀收获。细胞沉淀在冰上用200ml STM-NP缓冲液(25mM蔗糖,10mM Tris-HCl，pH8
腺病毒的抗原检测的介绍
常用来直接检测腺病毒在呼吸道和胃肠道的感染，较快速且灵敏度较高。免疫荧光(尤其对呼吸道标本、咽拭子和活组织标本)和酶免疫分析(尤其对于粪便标本)是常用的方法，与细胞培养相比，免疫荧光所测腺病毒的灵敏性能提高40%~60%，其它直接测定抗原的方法包括免疫层析法和乳胶凝集法。研究证实，与细胞培养检测
广州生物院研究证实腺病毒载体疫苗的安全性
近日，国际著名疫苗学期刊Vaccine杂志发表了中国科学院广州生物医药与健康研究院陈凌博士（客座研究员）指导的课题组的研究成果Epidemiology of adenovirus type 5 neutralizing antibodies in healthy people an
腺病毒载体非洲猪瘟疫苗新策略研究获进展
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/7/504755.shtm
广州生物院在腺病毒载体疫苗领域取得新成果
最近，中科院广州生物医药与健康研究院特聘研究员陈凌博士带领其研究组成员孙彩军博士、冯立强博士等研发了一种可克服体内腺病毒中和抗体的新技术AVIP，并在恒河猴模型中利用腺病毒载体艾滋病疫苗进行了概念验证。相关成果发表于国际病毒学权威期刊《病毒学杂志》（J Virol. 2012,86
腺病毒的基本信息介绍
腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为70～90 nm的颗粒，由252个壳粒呈20面体 [2] 排列构成。每个壳粒的直径为7～9 nm。衣壳里是线状双链DNA分子，约含4.7kb，两端各有长约100 bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5'端同相对分子质量为55X103D
治疗腺病毒肺炎的相关介绍
1、抗病毒药物：以三氮唑核苷治疗腺病毒肺炎，滴鼻效果不明显；改用静脉和/或肌注，在早期病例较对照组为优，晚期病例则效果不明显；雾化吸入治疗的研究有待进行。 2、继发细菌感染的防治：如初步断定有继发感染即应积极治疗，例如金黄色葡萄球菌感染用新型青霉素、先锋霉素等；大肠杆菌用氨基苄青霉素等治疗。
治疗腺病毒肺炎的基本介绍
1.抗病毒药物 以三氮唑核苷治疗腺病毒肺炎，滴鼻效果不明显；改用静脉和/或肌注，在早期病例较对照组为优，晚期病例则效果不明显；雾化吸入治疗的研究有待进行。 2.继发细菌感染的防治 如初步断定有继发感染即应积极治疗，例如金黄色葡萄球菌感染用新型青霉素、先锋霉素等；大肠杆菌用氨基苄青霉素等治疗
关于腺病毒的研究简史介绍
人体腺病毒已知有52种，分别命名为ad1～ad52，研究得最详细是ad2。腺病毒基因组转录产生mRNA，已知的转录单位至少有5个：EⅠ区位于病毒基因组左侧，可再分成EⅠA和EⅠB，与细胞转化有关；EⅡ区编码DNA结合蛋白，参与病毒的复制；EⅢ区编码出现在宿主细胞表面的一种糖蛋白；EⅣ区位于ad2
关于腺病毒诱发疾病的介绍
腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病相关，但一种血清型可引起不同的临床疾患；相反，不同血清型也可引起同一种疾患。 一、呼吸道感染 呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等，包括以下4种不同的综合征
关于腺病毒的防治原则介绍
腺病毒的甲醛灭活疫苗已被用于某些人群的预防，而且将来有被用人二倍体细胞培养的减毒活疫苗所替代的可能。但因腺病毒对动物具有致癌作用，人们对全病毒疫苗的作用与安全性存有疑虑。此外加强游泳池和浴池水的消毒，可使水传播性结膜炎爆发的危险性降至最小，在作眼的检查时应严格无菌操作，对所用设备充分灭菌，也可控
腺病毒简介
腺病毒载体的优点：1. 宿主范围广, 对人致病性低腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数的肿瘤就是上皮细胞来源的。另外，腺病毒的复制基因和致病基因均已
病毒包装哪家公司好？
病毒表达载体是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达载体元件所构建成的真核基因转移工具，目前，腺病毒、慢病毒和腺相关病毒是常用的病毒载体工具。作为病毒包装行业的先行者，维真生物可以向全球客户提供腺相关病毒AAV、腺病毒、慢病毒、假病毒和逆转录病毒的载体设计与病毒包装。公司立足基础科研领域，聚精基因递
病毒感染细胞实验（一）
实验方法原理 一、病毒的种类病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1.1原理慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使
《科学》子刊：腺病毒载体疫苗让免疫治疗“战力爆棚”！
腺病毒（Ad）载体疫苗近些年频繁出现在大众的视野当中，是抗击新冠肺炎的主力军。其实，Ad疫苗的“业务范围”很广，它在肿瘤治疗中同样扮演着举足轻重的角色。 此前已有研究证实，编码肿瘤新生抗原的Ad载体疫苗与PD-1抑制剂联合使用，在小鼠模型中对肿瘤的抑制效果良好[1]。然而，这种联合治疗肿瘤的作
关于腺病毒的诱发疾病的介绍
腺病毒对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，人腺病毒约1/3的已知血清型通常与人类疾病相关，但一种血清型可引起不同的临床疾患；相反，不同血清型也可引起同一种疾患。 呼吸道感染 呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等，包括以下4种不同的综合征。
关于腺病毒的传播特点的介绍
１、宿主范围广对人致病性低 腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是：腺病毒具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数的肿瘤就是上皮细胞来源的。另外，腺病毒的复制基因和致病基因均已相当清楚，在人群
六大病毒载体技术的比较；不同基因传递方法的比较－一
病毒载体经典的病毒载体主要有四类，腺病毒，腺相关病毒，逆转录病毒和慢病毒。他们具备侵染细胞谱广，效率高等特点并广为研究人员熟知。它们的特点总结归纳如表一。表一：六大病毒载体技术的比较 载体感染广谱性靶细胞类型表达形式表达时间免疫原性外源片段容量(Kb)滴度(TU/ml)缺点腺病毒载体高分裂和非分裂非
关于腺病毒55型的症状介绍
腺病毒引起的急性上呼吸道感染除发热、寒战、头痛、咳嗽以外，常有明显的咽痛及咽喉部溃疡，有些病人可同时出现眼结膜炎的表现。在临床上，腺病毒呼吸道感染分为以下几种类型：急性发热性咽喉炎、咽结膜热、急性支气管炎和肺炎4种临床类型。 腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%-37%。过去认为，成人中腺病毒少见