CST抗体WesternBlot常见问题与解答
1.Problem：高背景（曝光1-30秒后，背景高或无特异性蛋白带） 2.Problem：信号弱（1-30秒的曝光后检测不到信号） 3.Problem：无着色 4.Problem：着色太浅 5.Problem：着色太深 6.Problem：不正确的染色 Problem：高背景（曝光1-30秒后，背景高或无特异性蛋白带） Problem：高背景（曝光1-30秒后，背景高或无特异性蛋白带） Cause：一抗的稀释没有使用正确的缓冲液和正确的浓度 ......阅读全文
Western－Blot详解
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类
Western－Blot详解（二）
11、NaN3 0.02% 叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、过氧化物酶标记的第二
直接或间接western－blot检测方法之抗体介绍
在直接检测方法中，酶直接连接到一抗上(图1.5)。操作简单，检测步骤少。虽然直接检测是快速和直接的，但它往往比间接检测的灵敏度低，因为在这个过程中可以发生信号放大的步骤更少。此外，酶直接标记到一抗上可能会造成成本和资源上的限制。 间接western blot检测方法 间接检测方法
直接或间接western－blot检测方法之抗体介绍
直接western blot检测方法在直接检测方法中，酶直接连接到一抗上(图1.5)。操作简单，检测步骤少。虽然直接检测是快速和直接的，但它往往比间接检测的灵敏度低，因为在这个过程中可以发生信号放大的步骤更少。此外，酶直接标记到一抗上可能会造成成本和资源上的限制。间接western blot检测方法
Western－Blot－相关技术操作与原理2
一、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 30%丙烯酰胺-双丙烯酰胺溶液 4 × 浓缩胶缓冲液 (Stacking gel Buffer, pH 6.8) 4 × 分离胶缓冲液 (Resolving gel buffer pH 8.8) 10 × SDS-PAGE电泳缓冲液 10 × 蛋白电转移缓冲液
Western－Blot－相关技术操作与原理1
【实验原理】： Western Blot 印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合，再与经
Western－Blot实验（一）
大家都知道Western Blot时间周期较长，大致可以分为忙碌的第一天，和心痛的第二天，像极了爱情。人生若只如初见，何事秋风悲画扇。经历转瞬即逝的新手曙光后，便进入漫长的黑夜。第一天，从最一步的配胶，到最后一步的孵育膜都极细心像极了爱情的萌芽期，需要精心的呵护。第二天经过繁琐的洗膜，孵二抗，洗膜，
Western－Blot实验（二）
小巧的体格，却一应俱全，可以灵活控制多种应用程序，包括化学发光，荧光，DNA/蛋白胶。可以满足对实验室各种样品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可进行Cy3, Cy5, Cy2 多色荧光LED成像，又可在700和800nm处进行近红外激光定量荧光western 成像系统。这达到对成像最完美
Western－Blot详解（三）
3.抗体 T.做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。 U.同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的E
Western－Blot详解（一）
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii.底物化学
Western－Blot详解（三）
3.抗体T.做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。U.同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的ELL+plus试剂盒显色。转膜过夜，
western－blot试验心得
前两天做了一个western blot,现在把试验中的一点小小的体会发上来，与大家交流，希望大家多多指点！1 本实验室采用的脱脂奶粉已经存放了近两年了，虽然是四摄氏度保存，但是其封闭质量还是难以保证的。所以本人的试验结果中出现了小斑点。建议最好使用BSA或专用的脱脂奶粉进行封闭，虽然贵点，但还是有个
Western－Blot－with－Platelet－Protein
OUTLINEWestern blot is a wide used technique to identify a target protein/s for the certain antibody.PROTOCOLPrepare platelets.Lyse washed platelets (
Western－Blot详解（四）
还有一种离子交换型膜是羧甲基（CM）修饰的纤维素膜，它可以结合蛋白和多肽分子，以及其他的一些带正电荷的样品，最适结合pH范围在4-7。结合的多肽分子可以从CM膜上洗脱下来，用于氨基酸系列分析或微测序。5.Marker的相关疑问MM.我用的是可视marker（BIO_RAD），但是电泳总跑不全8条带，
Western－Blot详解（七）
TTT.目的蛋白是一种6KD的分泌性蛋白，RT－PCR就显示细胞中mRNA表达不高，估计将培养上清冻干浓缩后采用Western Blot还可能检测不出，但如果用western，是否一定要用0.2μm的膜？用Tris-tricine SDS－PAGE电泳，电泳时分别管制三层凝胶，分离胶用40％
Western－Blot详解（八）
DDDD.显色目的条带又细又浅，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，应该是高表达。每个涌道上50-70μg蛋白，开始用半干转移，后来用湿转14v，16h，用PVDF膜转移。胶转移后染色检测，发现小分子量的基本转移走了，可是为什么条带老是不粗不浓呢?解答：可能跟你的一抗有关
Western－Blot实验步骤
实验步骤： 1.分别配制 5%浓缩胶和12%分离胶 12%分离胶10mL 5%积层胶6mL H2O 3.3mL H2O 4.20mL 30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mL pH8.8 Tris HCl（1.5M） 2.5mL PH6.8Tris
Western－Blot详解－原理
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检
Western－Blot详解（六）
GGG.我想尽量提高转膜的效率（我的实验要求转到膜上的蛋白越多越好，不管是什么大小蛋白）不知道有那些办法？解答：不管怎么转都会存在蛋白转移不完全（电压过小时间过短）或过度转移（电压过大时间过长）的问题，鱼（小分子量蛋白）和熊掌（大分子量蛋白）不可得兼呵呵。建议把胶切成两半，比如以35KD为界，分别进
Western－Blot操作步骤
背景： 蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southe
Western－Blot操作步骤
背景： 蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术
Western－Blot详解（五）
CCC.Western Stripping Buffer的配方解答：METHOD11、stripping buffer: 62.5mmol/l Tris PH6.7；100mmol/l beta-mercaptoethanol；2%SDS二次发光protocol:1.stripping buffer
定量western－blot实验为什么需要用验证抗体
验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而
上样质控和抗体验证用于Western－blot定量
今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR（R）和流式细胞术（R）精通，特别关心如何以及为什么使用某些上样质控，还有其它的技术被使用验证，蛋白质表达和抗体特异性的变化。 样品准备和上样质控 理想地，上样质控是多步骤过程的
定量western－blot实验为什么需要用验证抗体？
验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体
上样质控和抗体验证用于Western－blot定量
今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR（R）和流式细胞术（R）精通，特别关心如何以及为什么使用某些上样质控，还有其它的技术被使用验证，蛋白质表达和抗体特异性的变化。样品准备和上样质控理想地，上样质控是多步骤过程的一部分，
定量western－blot实验为什么需要用验证抗体
验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗
HIV抗体检测常见问题及解答
1、怀疑感染了艾滋病应做哪些检查？怎么确定一个是否感染了艾滋病？ 如果有了高危行为怀疑感染了HIV，则需要做HIV抗体检测，任何人都不能仅凭艾滋病初期症状，如：发热、肺炎、乏力、鹅口疮等就断定感染了HIV或得了艾滋病，这些同样是其它传染病常见的症状，艾滋病临床表现没有特异性，确定一个人是否感染
移液器常见问题与解答大全
移液器是实验室里面最长使用的实验仪器之一，基本上每一个实验室人员都曾经或现在使用过移液器，因而也会遇到移液器使用时的一些问题。笔者总结归纳了移液器使用时常见的问题与解答大全，希望对于大家有所帮助：移液器使用时常见的问题与解答大全：问题可能原因提议移液器渗漏多道移液器吸嘴里不均衡的液体水平·吸嘴与移液
浓缩仪常见问题与解答
1、样品浓缩仪与氮吹仪的区别？答：样品浓缩和氮吹仪都是用氮气来进行吹扫，只是各厂家的命名不一样。2、如何能让实验速度更快、效率更高？答：样品浓缩仪的原理是通过提高样品的温度，使样品的溶剂在无氧状态下进行挥发，从而快捷高效的达到浓缩的目的。影响实验速度的原因有两个：1）加热的温度。2）气体的流量及气体