血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE;polyacrylamidegelelectr
一 原理: 聚丙烯酰胺凝胶电泳,具有分子筛和电泳的双重作用,它的分辨力高,以此为电泳载体,可以将血清脂蛋白各组分分离。 血清中脂类物质均与血清载脂蛋白结合成水溶性的蛋白形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类和数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也相差较大,因此,用聚丙烯酰胺电泳,血清中的脂蛋白,可根据其所带电荷的性质和多少,以及分子量的大小得到分离。 在本法中用乙酰苏丹黑(脂类染料)和脂蛋白结合,染成黑兰色,因此在电泳后不必染色,即可清楚地直接观察电泳图谱,进行组分分析,也可进一步采用分光光度法进行定量测定。血清蛋白经电泳后可分成五条带,从阳极到阴极依次为α—脂蛋白,β—脂蛋白,前β—脂蛋白,乳糜微粒、染料(在点样端)。 二 试剂: l、20%丙烯酰胺溶液:取丙烯酰胺19.6克,双丙烯酰胺0.4克,加蒸馏水溶解稀释到100毫升,贮于棕色瓶中冰箱保存。 2、凝胶缓冲液:(0.5M)取三羟甲基胺基甲烷(Tris)6.05......阅读全文
血清脂蛋白琼脂糖电泳实验
实验方法原理 血清脂蛋白经苏丹黑B染色后,以琼脂糖为载体,在pH8.6巴比妥缓冲液中进行电泳,可将脂蛋白分成不同的区带。按电泳移动的速度不同,正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极到阳极依次为β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最浅)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)。在原点处应无乳糜微粒,也见不到
血清脂蛋白的离心分离技术
血清脂蛋白是由血液中脂质与某些特异的蛋白质组成的一类不均一的复合物。因其所含脂与载脂蛋白的比例不同,其密度范围在0.96g/ml(或更低)到1.21g/ml之间。纸电泳中显示四条带,即:乳密微粒,极低密度脂蛋白(VLDL,也称前β脂蛋白),低密度脂蛋(LDL,也称β脂蛋白),高密度脂蛋白(HDL,也
简述血清脂蛋白α的临床意义
1、临床意义 (1)降低:见于严重肝病。 (2)升高:见于动脉粥样硬化、脑梗死、脑动脉硬化、急性心肌梗死、急性风湿性关节炎、外科手术等。 2、附注 脂蛋白α水平与人种及遗传有关;性别之间无明显差别,环境、饮食、药物等因素对脂蛋白α水平无明显影响。 3、相关疾病 急性心肌梗死、脑动脉硬
凝胶延长分析二型脂肪酸合成的方法
Gel-elongation assay for type II fatty acid synthesisSrinivas KodaliAndrew GalgociSheo Singh Dr.Jun Wang Dr., jun_wang2@merck.com, Merck Research Labo
Gelelongation-assay-for-type-II-fatty-acid-synthesis
Gel-elongation assay for type II fatty acid synthesisSrinivas KodaliAndrew GalgociSheo Singh Dr.Jun Wang Dr., jun_wang2@merck.com, Merck Research Labo
蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1
【实验原理】蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中为带电的颗粒,在电场中能向正极或负极移动。当溶液pH值大于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动;反之则向负极移动,这种带电的颗粒在电场中泳动的现象称为电泳(electrophoresis)。不同的蛋白质由于等电点不同,在电场中的泳动速率也不
聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白的实验原理
实验原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂在加速剂过硫酸铵或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。 聚丙烯酰胺凝胶具有下列特性:1. 在一定浓度时,凝胶透明,有弹性,机械性能好;2. 化学性能稳定,与被分离物不起化学反应,在很多溶剂中不溶;3.
Immunoblotting-(Western-Blotting)
实验概要We provide a protocol for SDS-PAGE, Protein Blotting, Immuno-Detection.主要试剂1. 0.3 M TRIZMA® base (Product No. T1503), 20% methanol.2. 0.025 M TRIZ
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是用于分离,鉴定和纯化生物聚合物的标准方法,因为这两种凝胶本质上都是多孔的。 聚丙烯酰胺凝胶是通过丙烯酰胺与交联剂(通常为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺)的聚合反应而形成的化学交联凝胶。 该反应是自由基聚合,通常以过硫酸铵为引发剂和N,N,N′,N′-四甲基
Phosphoproteins-pr...
实验概要The following procedure provides a method of detection of phosphorylated proteins.实验步骤1. To a sample of protein solution containing 1-100 ng of
电泳技术(electrophoretic-techniques)简介2
⒈材料与试剂 醋酸纤维素膜一般使用市售商品,常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液,浓度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要点⑴膜的预处理:必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液,浸透后,取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液,不可吸得过干。⑵加样:样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决
血清载脂蛋白a测定的注意事项
不合宜人群:在血脂正常的人群。 检查前禁忌:禁止服用某些药物(如避孕药、甲状腺激素、甾体激素等)可影响血脂水平。 检查时要求:近期应无急性疾病、损伤或外科手术史。
关于血清脂蛋白α的基本信息介绍
脂蛋白(英文:lipoproteins),是血浆中不溶性脂类的载体与蛋白质结合在一起形成的脂质-蛋白质复合物。脂蛋白根据电泳的结果分为α和β 亚类,其中α亚型 是由低密度脂蛋白样颗粒和特定的载脂蛋白(α)构成的共价分子。
血清载脂蛋白a测定的注意事项
不合宜人群:在血脂正常的人群。 检查前禁忌:禁止服用某些药物(如避孕药、甲状腺激素、甾体激素等)可影响血脂水平。 检查时要求:近期应无急性疾病、损伤或外科手术史。
血清载脂蛋白a测定的临床意义
异常结果:载脂蛋白AⅠ的测定值反映了高密度脂蛋白的含量。载脂蛋白AⅠ减低被认为是心脑血管病的危险因素。增高:见于酒精性肝炎、高α脂蛋白血症等。减低:见于冠心病、动脉硬化性疾病、未控制的糖尿病、肾病综合征、营养不良、活动性肝炎或急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝外胆道阻塞、人工透析等。 需要检查的人
临床化学检查方法介绍血清脂蛋白α介绍
血清脂蛋白-α介绍: 脂蛋白α主要功能是阻止血管内血块溶解,促进动脉粥样硬化形成。脂蛋白α水平持续升高与心绞痛、心肌梗死、脑溢血有密切关系。血清脂蛋白-α正常值: 免疫透射比浊法:0-1g/L。血清脂蛋白-α临床意义: (1) 降低:见于严重肝病。 (2) 升高:见于
关于血清脂蛋白α检查测定的试剂介绍
(1)包被缓冲液:0.02mol/L碳酸盐缓冲液,pH9.5。 (2)包被抗体与酶抗体:用McAb混合液,以硫酸铵沉淀法制备抗人apo(a)-IgG,部分作包被用,部分以过碘酸盐法交联辣根过氧化物酶(RZ≥3)得酶标抗体,-20℃保存可稳定数月。 (3)稀释/封闭液:pH7.4缓冲液含磷酸盐
血清载脂蛋白a测定的正常值
免疫比浊法:男:0.94-1.78g/L,女:1.01-1.99g/L;ApoA-Ⅰ/ApoB:男:0.80-2.3,女:0.94-2.63。
用顺序浮选法快速分离血清脂蛋白
用超速离心机分离血清脂蛋白,常用顺序浮选法(Sequence floating)和单次垂直管分离法(SVS),各种转速和容量都可以做,下面介绍一种简单、快捷的微量固定角式转头分离法,结果可供研究与临床分析。 一)设备:● 日立CS150GXL 制备型微量超速离心机● 转头:S140AT 固定角式转头
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
原 理 将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后,脂蛋白向正极移动,并分离为几个区带。 操 作 1.预染血清:血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中,混合后置37℃水浴染色30分钟,然后离心(2000转/分,约5分钟)。
血清脂蛋白电泳法的操作与增速
血清脂蛋白电泳法是近些年临床上经常采用的一种检验方法,由于其分离和显色效果均不是很满意,目前不少实验室已废弃脂蛋白电泳法,改用脂蛋白胆固醇和载脂蛋白测定。 在国外,脂蛋白电泳方法已商品化,在分析速度精度等方面均可满足常规应用。参照有关方法和技术[1,5],我们得到了一种适合于国
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
原 理将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后,脂蛋白向正极移动,并分离为几个区带。操 作1.预染血清:血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中,混合后置37℃水浴染色30分钟,然后离心(2000转/分,约5分钟)。2.制备
血清蛋白琼脂糖凝胶电泳(agarose-gel-electrophoresis)(二)
【操作】1、预染血清血清0.2ml中加苏丹黑染色液0.2ml,混合置37℃水浴中染色30分钟,离心(2000转/分)约5分钟。以除去悬浮于血清中染料沉渣。2、制备琼脂糖凝胶板将已配制好的0.5%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化,用吸管吸取凝胶溶液浇注在载玻片上,约3 ml。静置半小时后凝固(天热时需延长
血清蛋白琼脂糖凝胶电泳(agarose-gel-electrophoresis)(一)
【原理】琼脂糖(agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖,它由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列
SEMIDRY-ELECTROPHORETlC-TRANSFER-(WESTERN-BLOTS)
Introduction After proteins have been separated by electrophoresis, individual protein bands can often be identified by using an antibody that is
DNA电泳
DNA电泳(主要内容如下) Preparation of Agarose Gel and Electrophoresis Extraction of DNA From Agarose Gel Extraction of DNA from Acrylamide Gels DNA Marker
条带转移(Band-Shift)
Or gel mobility shift assay, gel shift assay, gel retardation, electrophoretic mobility shift assay (EMSA) EMSA Using Oligos (Mike A. Dyer)Anneal two
Gel-Shift-Assay-Systems
ProtocolsDownloadprotocol183kbpdf?Abstract for Gel Shift Assay SystemsThe gel shift, or electrophoretic mobility shift, assay provides a simple and ra
InGel-Digestion-of-Proteins-Separated-byPolyacrylamide-Gel-Electrophoresis
1. Excision of protein bands (spots) from polyacrylamide gelsRinse the gloves you use with water to avoid traces of dust in your sample.Rinse the gel
DNA-mobility-in-gels
1. Migration of marker dyes in native polyacrylamide non-denaturing gels Gel % Bromophenol blue (BP) Xylene cyanole (XC) 3.5 100 460 5.0