电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是用于分离,鉴定和纯化生物聚合物的标准方法,因为这两种凝胶本质上都是多孔的。 聚丙烯酰胺凝胶是通过丙烯酰胺与交联剂(通常为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺)的聚合反应而形成的化学交联凝胶。 该反应是自由基聚合,通常以过硫酸铵为引发剂和N,N,N′,N′-四甲基乙基己二胺(TEMED)为催化剂进行。 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是一种广泛用于生物化学,法医化学,遗传学,分子生物学和生物技术中的技术,可根据其电泳迁移率分离生物大分子,通常是蛋白质或核酸。 聚丙烯酰胺凝胶电泳最常用的形式是十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),主要用于分离蛋白质。......阅读全文
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是用于分离,鉴定和纯化生物聚合物的标准方法,因为这两种凝胶本质上都是多孔的。 聚丙烯酰胺凝胶是通过丙烯酰胺与交联剂(通常为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺)的聚合反应而形成的化学交联凝胶。 该反应是自由基聚合,通常以过硫酸铵为引发剂和N,N,N′,N′-四甲基
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的应用
测量分子量。肽图分析。蛋白质大小的估计。确定蛋白质亚基或聚集结构。蛋白质纯度的估计。蛋白质定量。监测蛋白质完整性。比较不同样品的多肽组成。多肽亚基的数量和大小的分析。电泳后应用,例如蛋白质印迹。不含有机溶剂和乙酸的考马斯G-250凝胶中的蛋白质染色。通过重复使用商业磁带来浇铸和运行蛋白质凝胶。使用C
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作步骤
样品制备 样品可以是任何包含蛋白质或核酸的材料。 如果需要,可以将分析样品与化学变性剂混合,通常将SDS用于蛋白质,将尿素用于核酸。 SDS是一种阴离子去污剂,可使二级和非二硫键连接的三级结构变性,并根据其质量成比例地对每种蛋白质施加负电荷。尿素打断核酸碱基对之间的氢键,使组成链退火。将样
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的仪器要求
丙烯酰胺溶液(用于分离和堆叠凝胶)。 异丙醇/蒸馏水。 凝胶上样缓冲液。 运行缓冲区。 染色,脱色溶液。 蛋白质样品 分子量标记。 进行SDS-PAGE所需的设备和用品包括: 电泳仪和电泳仪电源。 玻璃板(短板和顶板)。 铸框 铸造台 梳子
电泳分析法聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的优势、缺点
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的优势 稳定的化学交联凝胶 更大的分辨能力(尖锐频段) 可以容纳大量DNA,而不会显着降低分辨率 从聚丙烯酰胺凝胶中回收的DNA非常纯净 聚丙烯酰胺凝胶的孔径可以通过改变两种单体的浓度以容易且可控的方式改变。 适合分离低分子量片段 聚丙烯酰胺凝胶电泳(
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
原理 聚丙烯酰胺(polyacrylamide,PAA)凝胶是丙烯酰胺(acry—lamide,Acr),在交联剂甲叉双丙烯酰胺(bisacrylamide,Bis)的作用下经聚合而形成的一种大分子化合物。 Acr的聚合作用只有在自由基存在时才能发生,需要一个催化诱发剂系
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语:polyacrylamidegelelectrophoresis,简称page)作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n,n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语:polyacrylamidegelelectrophoresis,简称page)作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n,n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用
PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)实验
【实验原理】聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质。在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分子筛效应,还具有浓缩效应。和琼脂糖凝胶相
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的要求
丙烯酰胺溶液(用于分离和堆叠凝胶)。异丙醇/蒸馏水。凝胶上样缓冲液。运行缓冲区。染色,脱色溶液。蛋白质样品分子量标记。进行SDS-PAGE所需的设备和用品包括:电泳仪和电泳仪电源。玻璃板(短板和顶板)。铸框铸造台梳子
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度
一)原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的应用介绍
测量分子量。 肽图分析。 蛋白质大小的估计。 确定蛋白质亚基或聚集结构。 蛋白质纯度的估计。 蛋白质定量。 监测蛋白质完整性。 比较不同样品的多肽组成。 多肽亚基的数量和大小的分析。 电泳后应用,例如蛋白质印迹。 不含有机溶剂和乙酸的考马斯G-250凝胶中的蛋白质染色。 通
聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE胶的配制
各种浓度PAGE胶的配制(DNA电泳用) 50ml体系: 丙烯酰胺 有效分离(bp) 二甲苯青 溴酚蓝 丙烯
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide-gel-electrophoresis,PAGE)
配制 Tris- 甘氨酸 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 溶液成分 不同体积( ml )凝胶液中各成分所需体积( ml ) 5 10 15 20 25 30 4
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度1
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制,因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是:(1)使用两种不同浓度的凝胶系统;(2)配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同,并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度2
④ 浓缩胶缓冲液:称取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,调pH6.7,用重蒸水定容至100ml,置棕色瓶内,4℃贮存。⑤ 浓缩胶贮液:称Acr10g,Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml,过滤后置棕色瓶内,4℃贮存。⑥ 40%
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定IgG纯度3
4.加样作为分析用的PAGE加样量仅需几微克,2-3ul血清电泳后就能分出几十条蛋白区带。为防止样品扩散,应在样品中加入等体积40%蔗糖(内含少许溴酚兰)。用微量注射器取5ul上述混合液,通过缓冲液,小心地将样品加到凝胶凹形样品槽底部,待所有凹形样品槽内都加了样品,即可开始电泳。5.电泳将直流稳压电
常规PAGE和SDS-PAGE电泳有何异同
SDS是一种阴离子除垢剂,可以在不打开二硫键的情况下分离寡聚蛋白的不同亚基。如果你想让二硫键打开,你必须用2-巯基乙醇或过氧酸来处理它。原理:1.聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(后来称为单体)在水溶液中聚合而成的亲水性聚合物。是一种透明不溶于水的韧性凝胶。2.制备凝胶所需的原料有:丙烯酰胺、亚甲基双
聚丙烯酰胺凝胶电泳的提高SDSPAGE电泳分辨率的途径
聚丙烯酰胺的充分聚合,可提高凝胶的分辨率。待凝胶在室温凝固后,可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置,前者易导致凝固不充分,后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天,SDS可水解聚丙烯酰胺。一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料,不同染料又各自不同的染色方法。
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE,polyacrylamide-gel-...3
【目的和要求】1. 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理2. 掌握垂直板状凝胶电泳槽的使用和凝胶的配制方法。3. 学会利用相对迁移率分析蛋白质种类。【实验原理】带电颗粒在电场的作用下,向着与其相反的电极移动,称为电泳。电泳做为一种物质分离及鉴定技术,其原理在于任一物质质点,由于其本身的解离作用或由于表面
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术(根据蛋白质等电点进行分离)以及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(根据蛋白质的大小进行分离)。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。 通常第一维电泳是等电聚焦,在细管中(φ1~3 mm)中加入含有两性电解质、8M的脲以及非
蛋白质的(PAGE)聚丙烯酰胺凝胶电泳制备方法
一.试剂制备: 1.分离胶缓冲液(pH8.9):36.6gTris,48ml1mol/l的HCl,或先加水至80ml,用浓HCl调pH,再定容至100ml. 2.浓缩胶缓冲液(pH6.7):5.98gTris,48ml1mol/l的HCl, 或先加水至80ml,用浓HCl调pH,再定容至
血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE;polyacrylamide-gel-electr
一 原理: 聚丙烯酰胺凝胶电泳,具有分子筛和电泳的双重作用,它的分辨力高,以此为电泳载体,可以将血清脂蛋白各组分分离。 血清中脂类物质均与血清载脂蛋白结合成水溶性的蛋白形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类和数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也相差较大,因此,用聚丙烯酰胺电泳,血清中的脂蛋白,可根据
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术(根据蛋白质等电点进行分离)以及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(根据蛋白质的大小进行分离)。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。通常第一维电泳是等电聚焦,在细管中(φ1~3mm)中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂
RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE;-polyacrylamide-gel-electrophor...
一、原理核酸(ribonucleicacid,RNA)分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷,将其放入电场中,可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应,核酸分子大小、形状不同,故在电场作用下,核酸分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同,依此可达到分离纯化的目的。 二、材料、仪器设
聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)的基本原理
SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种用于根据蛋白质混合物的大小分离其成分的分析方法。 该技术基于这样的原理,即带电分子将在电场中朝具有相反符号的电极迁移。常规电泳技术不能用于确定生物分子的分子量,因为物质在凝胶中的迁移率取决于电荷和大小。 为了克服这个问题,需要对生物样品进行处理,以
垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离蛋白质
一、试验目的了解并掌握垂直板凝胶电泳的使用方法。二、实验原理聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳是以聚丙烯酰胺凝胶做支持物的一种区带电泳,由于此种凝胶具有分子筛的性质,所以本法对样品的分离作用,不仅决定于样品中各组分所带净电荷的多少,也与分子的大小有关。其次,聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种独特的浓缩效应,即在电泳开
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE,polyacrylamide-gel-...2
(3)电荷效应在分离胶中,各种血清蛋白所带静电荷不同,而有不同的迁移率。表面电荷多,则迁移快,反之则慢。因此各种蛋白质按照电荷多少、分子量大小及分子形状以一定顺序排成一个个区带。不连续PAGE所具有的分子筛效应、浓缩效应和电荷效应大大提高了它的分辨率。电泳后蛋白质染色目前常用的是考马斯亮蓝法,其比氨
SSR及PAGE电泳2
2、反应混合液配制在0.5mL Eppendorf管中加入下列试剂: 稀释DNA 2 μL primer 各0.5 μL 10×PCR Buffer 2.5 μL dNTP 2 μL MgCl2 1.5 μL Taq酶 0.2 μL
SSR及PAGE电泳1
相关知识SSR简介所有真核生物基因组中都有一类叫微卫星(microsatellite)或简单序列重复(simple sequence repeats)的序列,它是由2-5个核苷酸首尾相连重复多次构成的一段DNA序列,具有很强的保守性。可以根据这段序列两边的序列设计引物,用PCR方法扩增出中间的S