PCRDHPLC实验原理和步骤
【实验目的】1．了解PCR-DHPLC技术的原理。2．了解并熟悉PCR-DHPLC技术的步骤。【实验原理】DHPLC技术也称为WAVE核苷酸片段分析系统。利用高效液相色谱原理，PCR扩增后的DNA片段与缓冲液（TEAA）混合形成液相，流动相被高压驱动，通过一个DNA分离柱——DNA Sep柱，该柱可对DNA片段进行分离和分析。变性温度是影响DNA片段分析的一个重要因素，变性温度升高，保留时间缩短。洗脱的核苷酸片段经检测器检测后转换为数字信号记录并储存于计算机中。在部分变性条件下，DNA Sep柱可检测突变。杂合的个体在部分变性条件下（95℃变性后逐渐冷却到一定温度）形成纯合和杂合双链。两者通过DNA Sep柱时保留时间不同而得以区分。DHPLC方法不需要灌胶、上样、电泳等繁琐的操作，快速、自动，可检测片段长达1500bp，准确率达 96%以上。【实验用品】1．PCR扩增仪；WAVE DNA片段分析系统；凝胶成像及分析系统......阅读全文
PCRDHPLC实验原理和步骤
【实验目的】1．了解PCR-DHPLC技术的原理。2．了解并熟悉PCR-DHPLC技术的步骤。【实验原理】DHPLC技术也称为WAVE核苷酸片段分析系统。利用高效液相色谱原理，PCR扩增后的DNA片段与缓冲液（TEAA）混合形成液相，流动相被高压驱动，通过一个DNA分离柱——DNA Sep柱