蛋白质SDSPAGE电泳与WesternBlot
一、蛋白质SDS-PAGE电泳1、安装垂直板电泳装置用洗洁精、清水和无水乙醇清洗两块玻璃板，晾干后安装。2、制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶（1）配制9%分离胶（15ml）：双蒸水 6.55ml，1.5M Tris-HCl（pH8.8）3.75ml，30%丙烯酰胺储存液（Acry/Bis）4.5ml，10%SDS 150ml，10%过硫酸铵（APS）50ml，混匀后加入3.75ml TEMED，立即混匀，灌入装好的垂直板中，至距离短玻璃顶端约2cm处。检查是否有气泡，如果有，用滤纸条吸出。在胶液上面加一层双蒸水，静置，待凝胶与水的界面清晰时，说明分离胶已聚合（约30分钟），去除水相，用滤纸吸干残存的液体。（2）配制4%浓缩胶（10ml）：双蒸水 6.1ml，0.5M Tris-HCl（pH6.8）2.5ml，30%丙烯酰胺储存液（Acry/Bis）1.3ml，10%SDS 100ml，10%过硫酸铵（APS）50m......阅读全文
蛋白质SDSPAGE电泳与Western－Blot
一、蛋白质SDS-PAGE电泳1、安装垂直板电泳装置用洗洁精、清水和无水乙醇清洗两块玻璃板，晾干后安装。2、制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶（1）配制9%分离胶（15ml）：双蒸水 6.55ml，1.5M Tris-HCl（pH8.8）3.75ml，30%丙烯酰胺储存液（Acry/Bis）4.5ml，
蛋白质检测－Western－Blot
蛋白质检测－Western Blot1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。
蛋白质电泳槽－Western－Blot－垂直电泳制胶器漏胶问题分析
Western Blot转膜之前免不了要在蛋白质垂直电泳槽中跑胶分离蛋白质。关于制胶，大多数用户还是喜欢用电泳槽配套的制胶器来自己制胶跑电泳，经济实惠。但是很多实验室因为设备已经使用多年，常会发现垂直电泳槽的制胶器没有原来好用了，经常会有“漏胶”或者“漏液”的现象，也就是说，凝胶溶液还没有来
western－blot电泳的胶怎么放平？
最近实验室western blot电泳的胶做出来不够平整，仔细思考一下实验步骤，总结有一下几个方面原因供大家参考1)实验用的玻璃板必须洗干净2)过硫酸铵和TEMED的加量不合适，加量较多时，凝胶凝固过快也会胶不平，最多按照分子克隆加倍3)加完试剂以后没有很好的摇匀，导致有些部位的聚合剂浓度过高，聚合
电泳做Western－Blot实验的方法技巧
电泳做western blot的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。这对于摸索条
蛋白质印迹(westernblot)
实验原理印迹法一般由凝胶电泳；样品的印迹和固定化；各种灵敏的检测手段如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。生物大分子凝胶电泳分离 蛋白质印迹法的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺平板凝胶电泳，使待测蛋白质在电泳中按相对分子质量大小在板状胶上排列。2.分子区带的转移和固定 第二步就是反凝胶电泳已分
蛋白质的Western－blot印迹分析
一、原理 一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白，因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。 原理：Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离；并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物上，用抗靶蛋白的非标记抗体（
蛋白分析鉴定整体解决方案
蛋白分析鉴定整体解决方案目前对于蛋白的分析和鉴定，常用的经典方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），蛋白免疫印迹（Western Blot）Elisa等。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）经常用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由于不同的亚基组
什么是蛋白质印迹测试？
Western blot测试,也称为免疫印迹,是对蛋白质混合物中特定蛋白质的测试。蛋白质印迹试验是在凝胶电泳或酶联免疫吸附测定(ELISA)试验后进行的,它使用抗体来鉴定特定的蛋白质。SDS页面十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是用于分离蛋白质以进行蛋白质印迹的常用测试。当蛋白质通
蛋白质印迹（western－blot）技术实验步骤
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（western blot），它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹（western blot）具有SDS-
免疫共沉淀与Western－Blot
免疫共沉淀与Western Blot实验步骤:1．以60mm 细胞培养皿为例，细胞转染后24－36 小时后，吸净培养液（可用PBS小心漂洗一次）。2．加入500μl 预冷的1×lysis buffer, 于4℃或冰上放置裂解细胞5 分钟。3．将细胞裂解液转移到1.5 ml eppondorf 管内，
蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）——Western印迹法
实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSG 250考马斯亮蓝溶液NaClSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液封闭液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液显影液定影液抗体化学发光试剂仪器、耗材高压锅玻璃匀浆器高速离心机分光光度仪-20℃低温冰箱垂直板电泳转移装置恒温水浴摇床多用脱色摇床实验步骤一、操
蛋白质的SDSPAGE电泳
试剂、试剂盒 过硫酸铵含 2-巯基乙醇的样品缓冲液样品缓冲液 (2X) 储液电泳缓冲液电极缓冲液压缩胶缓冲液分离胶缓冲液实验步骤 铸分离胶（下层胶)装置的清洗为使角蛋白的污染减至最少，将玻板、梳子和隔条浸泡在含强碱性去垢剂〔2%RBS 35 液（Pierce Chemical Co.)〕提浓物的
蛋白质的SDSPAGE电泳
蛋白质的SDS-PAGE电泳 试剂、试剂盒 过硫酸铵 含 2-巯基乙醇的样品缓冲液
蛋白质的SDSPAGE电泳
按所用小型平板凝胶装置调整溶液体积，胶板大小约在 8X10X0.15 cm。在此大小范围内有几种形式可以利用。制胶的装置有玻璃板、塑料隔条（通常厚度为 0.1~0.2 cm) 和铸胶时成孔用的 Teflon 梳子。下面逐步示教 SDS-PAGE 的操作程序。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
Western－blot实验电泳时－Marker条带不清晰
如果只是marker不清晰，就是markr没煮好，或者降解了。重新换一个新marker，严格按配方煮。如果所有条带都这样那就是胶的问题。胶的前沿跑的齐吗？速度如何？如果跑的时候就不正常那也可能是电泳缓冲液配错了。
蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）（二）
二、蛋白样品制备 1. 单层贴壁细胞总蛋白的提取 （1） 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 （2） 每瓶细胞加3 ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1 min洗涤细胞，然后弃
蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）
实验方法原理 Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺
蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）
实验方法原理 Western免疫印迹，是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似，但We
蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）（一）
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验方法底物化学发光ECL法Western印迹法图解实验方法原理Western免疫印迹（
蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）
蛋白质免疫印迹（Western Blot ） 可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验方法原理： Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白
蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）（三）
四、SDS－PAGE电泳 1. 清洗玻璃板 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 2. 灌胶与上样 （1）玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。） （2）按前面方法配10%分离
western－blotting的原理、操作步骤及意义
一。免疫印迹法 免疫印迹法（immunoblotting test，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似，亦被称为Wester
western－blotting的原理、操作步骤及意义
一。免疫印迹法 免疫印迹法（immunoblotting test，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似，亦被称为Wester