哺乳动物细胞的RNAi技术策略(1)
目前RNAi技术已经进入了生物科学研究的许多领域，成为了一种主要的生物学研究工具，发展得相当迅速，并受到了此次诺贝尔奖评审委员会的青睐，获得2006年诺贝尔奖医学/生理奖。然而这一才历经十个年头的技术依然对于许多研究人员来说还是很陌生的，以下是有关 i技术在哺乳动物细胞中应用的具体设计策略，主要来自于《遗传》杂志2005年“ 干涉（i）技术应用于哺乳动物细胞的研究策略”，希望能给从事或者准备从事 i相关实验的研究人员以帮助。一、靶si 序列选择靶si A序列选择是 i实验成败的关键。哺乳动物细胞 i实验中，使用最广泛且最有效的是21bp si 。si 由正义链和反义链组成，两条链3’端均有2个碱基突出，一般为UU或dTdT，其中正义链的前19nt与靶基因序列相同。1. si 设计的原则Si 双链设计时，一般在靶m 起始密码下游100―200bp至翻译终止密码上游d0―100bp的范围内搜寻AA序列，并记录每个AA3’......阅读全文
哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件
哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述：原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于
哺乳动物细胞体外剪接分析实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。实验材料 前体 mRNA 底物试剂、试剂盒 ATP CP 混合物HEPES-KOH聚乙烯醇
哺乳动物细胞胞质RNA的分离
试剂、试剂盒 冰冷的磷酸盐缓冲液 NaCl KCl Na2HP04•7H20 KH2PO4 冰冷的裂解缓冲液： LTris-HCl
实用哺乳动物细胞培养手册（四）
细胞培养无菌操作基本技术无菌操作技术分为三个部分：工作环境及表面的处理，细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理及培养液与培养细胞的处理。工作环境的处理 使用层流超净工作台是最经济有效的手段。超净工作台正常工作时，向下的气流可阻挡外界空气污染物进入超净台。（1）实验前，无菌室及无菌操作台用紫外灯照射 30-
哺乳动物细胞的RNAi技术策略(1)
目前RNAi技术已经进入了生物科学研究的许多领域，成为了一种主要的生物学研究工具，发展得相当迅速，并受到了此次诺贝尔奖评审委员会的青睐，获得2006年诺贝尔奖医学/生理奖。然而这一才历经十个年头的技术依然对于许多研究人员来说还是很陌生的，以下是有关 i技术在哺乳动物细胞中应用的具体设计策略，主要
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于
哺乳动物细胞体外剪接分析实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。
哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件
哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件导语：哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各
哺乳动物细胞的RNAi技术策略(3)
5. si 表达框架si 表达框架(si expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的si 表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事(5)采用，包括一个 pol III启动子，一段发夹结构si ，一个
实用哺乳动物细胞培养手册（二）
消化液：分离组织和分散细胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二钠 (EDTA) 两种溶液。可以 单独使用，也可以混合使用。（1）胰蛋白酶溶液胰蛋白酶（简称胰酶）是一种黄白色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处保存。目前应用的胰蛋白酶主要来自牛或猪的胰腺。胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相
电穿孔转染真核细胞实验——电穿孔转染哺乳动物细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材电穿孔仪器电击池实验步骤1. 在完全
2.1.3 哺乳动物细胞胞质RNA的分离
下述方法是纯化组织培养细胞胞质 RNA 的 简便并行之冇效的方法 ，此方法出现在 RNA 分离的较早阶段，主要步骤即离心去除细胞核试剂、试剂盒冰冷的磷酸盐缓冲液NaClKClNa2HP04•7H20KH2PO4冰冷的裂解缓冲液： LTris-HClNaClMgCL2NkmidetP-40胎盘RNas
《细胞》：65种病毒首次发现于哺乳动物中
自然界中野生动物携带的病毒，是否还有传染人类或家畜的潜在“凶手”？2月17日，记者从南京农业大学获悉，该校动物医学院/前沿交叉研究院联合中山大学等国内外单位对来自中国20个省份18个物种共1941只哺乳动物的样本展开系统的病毒转录组研究，发现13个病毒科中的102种病毒可以感染哺乳动物，其中65种病
超声波首次成功控制哺乳动物脑细胞
美国索尔克研究所的科学家在9日出版的《自然·通讯》杂志上发表论文称，他们对培养皿中的人类细胞和活小鼠的脑细胞进行基因编辑，向其中添加通道蛋白TRPA1，首次用超声波激活了这些细胞。这种新方法为实现无创性脑深部刺激，开发体外起搏器和胰岛素泵铺平了道路，有望更好地治疗癫痫、心脏病等疾病。 该研究负责
哺乳动物细胞实验室的构建方案
一、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为10万级洁净
哺乳动物细胞实验室的构建方案
一、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为10万
脂质体介导的真核细胞转染实验——哺乳动物细胞选择标记
哺乳动物细胞的选择标记实验材料哺乳动物实验步骤一、腺苷脱氨酶（ADA） 1. 选择条件：培养液中加10 μg/ml 胸腺嘧啶脱氧核苷，15 μg/ml 次黄嘌呤，4 μmol/l 腺嘌呤-9-β-D-呋喃木糖苷（Xyl-A），及0.01~0.3 μmol/l 2‘-脱氧助间型霉索（dCF）。胎牛血
培养两栖动物细胞与哺乳动物细胞区别
1.培养两栖动物细胞与哺乳动物细胞区别在培养液上,也就是血浆的不同,其它的一样；2.培养两栖动物体细胞比哺乳动物细胞难养,原因在于两栖动物个体都较小,血浆制备较难；3.原代培养的话,两栖动物细胞用两栖动物的血浆,哺乳动物细胞用哺乳动物的血浆,（同物种个体上取下的血浆,最好自体上取下的）和其它营养物质
哺乳动物细胞(mammalian cell)总RNA的分离-2
3）于0℃以5000g离心10分钟沉淀RNA，弃上清，用含0.1mol/L 乙酸钠（pH5.2）的70％乙酸洗涤沉淀，用自动微量移液器尽可能将乙醇吸尽， 随后于室温放置几分钟，晾干沉淀。切勿抽干沉淀，因为干的核酸沉淀很难溶解。4）每个直径为90mm的培养皿或每107细胞加 200μl 50mmol/
阶段性成果！哺乳动物大脑运动皮层细胞图谱
美国BRAIN计划于2017年设立了“大脑细胞普查网络”项目（BICCN），旨在对人类、猴和小鼠大脑中的不同细胞进行识别和分类。目前该项目第一部分已经完成，在分子水平上对哺乳动物初级运动皮层细胞类型进行了全面的定位和图谱绘制。近期，该研究成果在《Nature》期刊上同时发表了16篇文章，并以合集
哺乳动物细胞培养有没有厌氧的
哪有厌氧的哺乳动物啊开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中,此浓度的CO2与培养液PH缓冲体系中的NaHCO3浓度相平衡,二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值
哺乳动物细胞(mammalian cell)总RNA的分离-1
哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离细胞的裂解提取步骤注意事项这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离 RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩
Nature子刊：活哺乳动物细胞的靶向输送
拜罗伊特大学和布里斯托尔大学开发的一种新型多肽非常适合于将分子(如活性物质和染料)定向输送到哺乳动物细胞中。这种肽具有双重功能:它可以从细胞外部进入细胞，并与另一种肽相互作用。配对肽必须事先被放置在细胞内被运输的分子发挥作用的地方。该运输系统发表在《Nature Chemical Biology》杂
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验材料载体（如 CDM 8）实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 100 mm 培养皿
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
基本方案 用COS细胞瞬时表达 实验方法原理 实验材料 载体（如 CD
用缠绕法从哺乳动物细胞中分离DNA
实验方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改进而成，可同时从许多不同细胞或者组织样品中制备 DNA。本方案中的主要步骤包括将 DNA 沉淀在细胞裂解液和乙醇的交界面上，接着将沉淀的 DNA 缠绕到一个 Shepherd 氏钩上。缠在钩上的 DNA 从乙醇溶液中转出溶于所选择
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验方法原理 实验材料 载体（如 CDM 8）实验步骤 1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 1
体内哺乳动物骨髓细胞微核试验-2
7.31/15mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）成分：磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O） 19.077g磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.814g加蒸馏水至 1000mL配制：将上述两种成分溶于蒸馏水中。以pH试纸检验pH值。7.4Giemsa应用液取一份Giemsa染液与6份1/15mol/
体内哺乳动物骨髓细胞微核试验-1
1范围本规范规定了哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料的染色体畸变检测。2规范性引用文件GB 14924实验动物与饲料标准OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No.481，Adopted:21,July 1997