层析技术概念、原理、分类（凝胶层析和离子交换层析）
一．概念利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。本世纪初（1903年），俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化、分子生物学及其它学科领域有效的分离、分析工具之一。二．原理 具体过程： 可分离物质：糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸。 三．分类 1．按两相所处物理状态分类 气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体 液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体 2．按层析方式分类 柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离 薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄板上，点样后，用流动相展开 纸层析：用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开 ......阅读全文
层析技术
层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不
层析技术介绍
层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不
层析技术分类
1. 按两相所处物理状态分类 气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体。 液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体。 2. 按层析方式分类 柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离。 薄层层析：将适当粘度的
层析技术的背景
层析技术早在1903年就应用于植物色素的分离提取，各种颜色的色素从上到下在吸附柱上排列成色谱，也称色谱分离法。1931年有人用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体，显示了这一分离技术的高度分辨力，从此引起了人们的广泛注意。随着人们认识和实践的提高以及物理化学技术的发展，应用范围更加广泛，没有颜
柱层析技术简介
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术，主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。
柱层析技术特点
柱层析操作时，先在圆柱管中填充不溶性基质，形成一个固定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。
同系层析技术介绍
在核酸分析中，将样品经核酸酶部分裂解成不同长度的核苷酸片段，用同位素标记后，在DEAE纤维素薄层上分离，用含有未标记的相同的核苷酸片段作展层溶剂，这样，未标记的核苷酸把标记过的核苷酸推进，使按分子量大小不同把标记核苷酸片段，按由小到大的次序排列，达到分离的目的。于是把这种层析法称为同系层析。同系层析
层析技术的概念
利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。本世纪初（1903年），植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化、分子生物学
层析技术概念原理
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相
什么免疫层析技术？
免疫层析技术就是根据免疫抗体-抗原的相互吸附原理设计出的一种制备收集或检测分析的色谱技术。一般情况就是将已知抗体或抗原欧联到微球或介质上，使样品通过，能够与介质上抗原或抗体吸附的相应分子会被吸附在介质上，之后进行冲洗，洗脱即可得到希望获得的物质。检测的原理和收集类似，只是加入检测部分，一般和EL
层析技术概述（二）
分辨率： 由上式可见，Rs值越大，两种组分分离的越好。当Rs = 1时，两组分具有教好的分离，互相沾染约2%，即每种组分的纯度约为98%。当Rs=1.5时，两组分基本完全分开，每种组分的纯度可达到99.8%。如果两种组分的浓度相差较大时，尤其要求较高的分辨率。 为了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方
亲和层析技术
亲和层析 （一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。
层析技术的原理
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：固定相：大多是固体物质或是固定于固体上的成分。流动相：由水和各种溶媒组成（液体或气体）。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的
层析技术的应用
层析又叫色谱色谱法的应用可以根据目的分为制备性色谱和分析性色谱两大类。 制备性色谱的目的是分离混合物，获得一定数量的纯净组分，这包括对有机合成产物的纯化、天然产物的分离纯化以及去离子水的制备等。相对于色谱法出现之前的纯化分离技术如重结晶，色谱法能够在一步操作之内完成对混合物的分离，但是色谱法分离
层析技术概述（一）
层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同颜色的谱带或称
反相层析技术介绍
在吸附层析中，高极性物质在层析柱上吸附较牢，洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类，洗脱液用极性强的溶剂，如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附，最先洗下来，得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反，故称为反相层析。用HP
层析技术的分类
分类1. 按两相所处物理状态分类气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体。液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体。2. 按层析方式分类柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离。薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄
纸层析技术介绍
以滤纸为支持物的分配层析。组成滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物，可做双向层析。1944年A．J．P．马丁第一次用纸层析分析氨基酸，得到很好的分离效果，开创了近代层析的发展和应用的新
层析技术概述（四）
⑷ 洗脱当我们选定好洗脱液后，洗脱的方式可分为简单洗脱、分步洗脱和梯度洗脱三种。简单洗脱：柱子始终用同样的一种溶剂洗脱，直到层析分离过程结束为止。如果被分离物质对固定相的亲合力差异不大，其区带的洗脱时间间隔（或洗脱体积间隔）也不长，采用这种方法是适宜的。但选择的溶剂必须很合适方能使各组分的分配系数较
层析技术概述（三）
柱层析的基本装置及基本操作目前，最常用的层析类型是各种柱层析，下面就简述柱层析的基本装置及操作方法，薄层层析的装置和操作将在后面详细讨论。1. 柱层析的基本装置柱层析的基本装置示意图如图3－3 所示：2. 柱层析的基本操作柱层析的基本操作包括以下一些步骤：⑴ 装柱柱子装的质量好与差，是柱层析法能否成
柱层析技术的定义
柱层析操作时，先在圆柱管中填充不溶性基质，形成一个固定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。
亲和层析技术介绍
在一对有专一的相互作用的物质中，把其中之一联结在支持物上，用于纯化相对的另一物质。常见的亲和对如：酶和抑制剂，抗原和抗体，激素和受体等。支持物为琼脂糖或纤维素等。
气相层析技术介绍
属于分配层析或吸附层析，仅适用于分析分离挥发性和低挥发性物质。固定相是在惰性支持物（如磨细的耐火砖）上覆盖一层高沸点液体，如硅油、高沸点石蜡和油脂、环氧类聚合物。外涂层约为支持物重量的20%。分析时操作温度范围，一般从室温到200℃。特殊的层析柱能达到500℃。流动相常用氦、氩或氮为展层气体。气相层
层析技术的应用（五）
（四）亲和层析法 亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素（或药物）与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素
气相色谱层析技术
（一）基本原理 混合样品的气流通过固定相时，根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强，能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点，常在数十分钟甚至数小时就可以对传染病做出早期诊断。其结果稳定，重复性好
层析技术的应用特点
层析法的最大特点是分离效率高，它能分离各种性质极相类似的物质。而且它既可以用于少量物质的分析鉴定，又可用于大量物质的分离纯化制备。因此，作为一种重要的分析分离手段与方法，它广泛地应用于科学研究与工业生产上。它在石油、化工、医药卫生、生物科学、环境科学、农业科学等领域都发挥着十分重要的作用。
薄层层析技术介绍
在玻璃片、金属箔或塑料片上铺上一层约1～2毫米的支持物，如纤维素、硅胶、离子交换剂、氧化铝或聚酰胺等，根据需要做不同类型的层析。聚酰胺薄膜是一种特异的薄层，将尼龙溶解于浓甲酸中，涂在涤纶片基上，当甲酸挥发后，在涤纶片基上形成一层多孔的薄膜，其分辨力超过了用尼龙粉铺成的薄层。薄层层析较纸层析优越在于分
层析技术的应用（二）
（一）凝胶层析法 凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。 ⒈凝胶的选择 根据实验目的不同选择不
层析技术及离心技术
（一)层析技术层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。可分为吸附层析法、分配层析法、离子交换层析法、凝胶层析法、亲和层析法、高效液相层析法等。在层析法中，根据层析峰的位置及峰高或峰面积，可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用，可检测出层析后各组分的浓度或质量，同时绘出层析图。
气相色谱层析技术
（一）基本原理 混合样品的气流通过固定相时，根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。 利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强，能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点，常在数十分钟甚至数小时就可以对传染病做出早期诊断。其结果稳定，重复性