PCRSSCP(聚合酶链反应单链构象多态)实验步骤
一. 样品的制备1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析,设定引物,引物长度18-21个碱基,扩增片段以200-300bp最为合适。2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为 10ng/nl左右为最佳。3. PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ulSSCP上样缓冲液(变性缓冲液,同《分子克隆》中的测序缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。4. PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95变性5-10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5mi......阅读全文
PCRSSCP(聚合酶链反应单链构象多态)实验步骤
一. 样品的制备1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析,设定引物,引物长度18-21个碱基,扩增片段以200-300bp最为合适。2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为 10
聚合酶链反应一单链构象多态性分析-(PCRSSCP)
聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序为:
聚合酶链反应一单链构象多态性分析-(PCRSSCP)
聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本
聚合酶链反应一单链构象多态性分析-(PCRSSCP)-实验方法
聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP) 聚合酶链反应-单链构象多态性分析(Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP)是近年来
单链构象多态性的实验步骤
利用PCR从提取出的DNA中扩增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一条链(其中一个PCR引物被磷酸化,这条链将被去除)。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
单链构象多态性的实验步骤
利用PCR从提取出的DNA中扩增16S rRNA基因。利用λ-外切核酸酶消化掉一条链(其中一个PCR引物被磷酸化,这条链将被去除)。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
单链构象多态性
单链构象多态性(signle strand conformation polymorphism,SSCP)是指单链DNA由于碱基序列的不同可引起构象差异,这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同,从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查基因突变时,通常
单链构象多态性简介
单链构象多态性,在一定条件下, 单链DNA可形成特有的二级结构。不同 DNA链上单个碱基的改变可引起其二级结 构的改变,从而改变DNA链在非变性胶中 的电泳迁移率形成的多态性称作单链构象多 态性。单链DNA片段呈复杂的空间折叠构 象。这种立体结构主要是由其内部碱基配对 等分子内相互作用力来维持的
单链构象多态性的原理
单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以检测DNA序列之间的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群体的多样性。在低温条件下,单链DNA呈现一种由内部分子相互作用形成的三维构象,它影响了DNA在非变性凝胶中的迁
单链构象多态性的原理
单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以检测DNA序列之间的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群体的多样性。在低温条件下,单链DNA呈现一种由内部分子相互作用形成的三维构象,它影响了DNA在非变性凝胶中的迁
单链构象多态性的应用
单链构象多态性可用于预筛选克隆文库。可对其中的某一个条带进行测序,并与数据库中已知序列比对。
PCR单链构象多态性分析
PCR -单链构象多态性分析(PCR -single strand conformation analysis,PCR -SSCP) 是近年来在基因突变检测中运用最广泛的方法之一。PCR -SSCP 技术凭借突变可引起单链DNA三级构象改变,通过观察单链DNA在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率漂移
单链构象多态性分析(SSCP)技术
SSCP是一种简便快速的检测DNA或cDNA突变的技术。 其技术原理和过程是:将PCR扩增到的待测DNA或cDNA片段变性,成为单链DNA,在一定条件下,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将单链DNA变性。 由于单链DNA的空间构象与分子内碱基组成密切相关,一个碱基的差异即可形成不同
单链构象多态性的应用介绍
单链构象多态性可用于预筛选克隆文库。可对其中的某一个条带进行测序,并与数据库中已知序列比对。
单链构象多态性的原理简介
单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以检测DNA序列之间的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群体的多样性。在低温条件下,单链DNA呈现一种由内部分子相互作用形成的三维构象,它影响了DNA在非变性凝胶中
单链构象多态性的结构及应用
单链构象多态性,在一定条件下, 单链DNA可形成特有的二级结构。不同 DNA链上单个碱基的改变可引起其二级结 构的改变,从而改变DNA链在非变性胶中 的电泳迁移率形成的多态性称作单链构象多 态性。单链DNA片段呈复杂的空间折叠构 象。这种立体结构主要是由其内部碱基配对 等分子内相互作用力来维持的,当
单链构象多态性的原理及应用
单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism, SSCP)是一种分离核酸的技术,可以分离相同长度但序列不同的核酸(性质类似于DGGE和TGGE,但方法不同)。原理单链构象多态性(Single-strand conformation polymorph
关于单链构象多态性的原理介绍
单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析可以检测DNA序列之间的不同。SSCP首先由Lee 等[9]用于研究自然微生物群体的多样性。在低温条件下,单链DNA呈现一种由内部分子相互作用形成的三维构象,它影响了DNA在非变性凝胶中
分子生态学单链构象多态性
单链构象多态性,在一定条件下, 单链DNA可形成特有的二级结构。不同 DNA链上单个碱基的改变可引起其二级结 构的改变,从而改变DNA链在非变性胶中 的电泳迁移率形成的多态性称作单链构象多 态性。单链DNA片段呈复杂的空间折叠构 象。这种立体结构主要是由其内部碱基配对 等分子内相互作用力来维持的,当
关于单链构象多态性的基本介绍
单链构象多态性,在一定条件下, 单链DNA可形成特有的二级结构。不同 DNA链上单个碱基的改变可引起其二级结 构的改变,从而改变DNA链在非变性胶中 的电泳迁移率形成的多态性称作单链构象多 态性。单链DNA片段呈复杂的空间折叠构 象。这种立体结构主要是由其内部碱基配对 等分子内相互作用力来维持的
通过单链构象多态性分析检测基因突变实验
实验材料人类基因组 DNA试剂、试剂盒矿物油PCR引物A和B多核苷酸激酶和10 X 缓冲液4dNTP 混合液Tag DNA 聚合酶10 X PCR 扩增缓冲液低胶凝 溶点琼脂糖二甲基二氯硅烷丙烯酰胺原溶液10 X TBE 缓冲液过硫酸铵EDTA2 X 甲酰胺加载缓冲液仪器、耗材水浴锅循环变温加热器D
外显子应用机理
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerasechainreaction-singlestrandconformationpolymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术检测68例SAD患者和65名正常老年人的早老素-1基因第5外显子。
关于外显子的应用机理介绍
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerasechainreaction-singlestrandconformationpolymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术检测68例SAD患者和65名正常老年人的早老素-1基因第5外显子。
单链构象多态性诊断法相关介绍
单链构象多态性(signlestrand conformation polymorphism,SSCP)是指单链DNA由于碱基序列的不同可引起构象差异,这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同,从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查基因突变时,通
单链构象多态性的结构特点和作用
单链构象多态性,在一定条件下, 单链DNA可形成特有的二级结构。不同 DNA链上单个碱基的改变可引起其二级结 构的改变,从而改变DNA链在非变性胶中 的电泳迁移率形成的多态性称作单链构象多 态性。单链DNA片段呈复杂的空间折叠构 象。这种立体结构主要是由其内部碱基配对 等分子内相互作用力来维持的,当
毛细管电泳法分析单链构象多态性实验
基本方案1 毛细管电泳的样品准备 基本方案2 应用 ABI 310基因分析仪的自动化毛细管电泳 基本方案3 应用ABI PRISM 3100基因分析仪的自动化毛细管芯片电泳
毛细管电泳法分析单链构象多态性实验
单链构象多态性(SSCP) 是最常用的突变检测方法之一。应用毛细管电泳法,通过 DNA 在非变性聚合物中被分离,可以区分野生型和突变型 DNA 片段。通过给每条链贴上不同的标签可以区分两条链。构象是蕰度决定的,因此,凝胶电泳时要在不同的温度下以实现一个高敏感性。毛细管电泳的样品准备实验材料5'
毛细管电泳法分析单链构象多态性实验(二)
应用 ABI 310基因分析仪的自动化毛细管电泳实验材料PCR 产物5% 非变性引物试剂、试剂盒10 X 基因分析仪缓冲剂Milli-Q 级别的超纯水仪器、耗材ABI PRISM 310 基因分析仪基因分析仪毛细管基因扫描分析软件实验步骤1.将 PCR 管放在样品槽上。参照制造商的说明书将 ABIP
毛细管电泳法分析单链构象多态性实验(三)
应用ABI PRISM 3100基因分析仪的自动化毛细管芯片电泳实验材料PCR 产物5% 非变性引物试剂、试剂盒10 X 基因分析仪缓冲剂Milli-Q 级别的超纯水仪器、耗材ABI PRISM 3100 基因分析仪基因扫描毛细管芯片实验步骤1.安装一个 16 通道的芯片(50 cmi.d.) 使之
单链构象多态性和异源双链分析方法检测突变实验
试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 混合溶液甲酰胺上样缓冲液蔗糖凝胶缓冲液TBE 电泳缓冲液限制性内切酶热稳定 DNA 聚合酶人类基因组 DNA正向引物和反向引物[a-32P]dCTP丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸胺甘油TEMED仪器、耗材 带屏障装置的自动移液器吸头 沸水浴电泳板、破璃和 0.4 mm 隔