原位杂交(InSituHybridization,ISH)与荧光原位杂交（四）
（2）硝酸纤维素滤膜吸印。①将胶切成合适大小，切去右上角作为记号。②将胶放进盛有变性缓冲液（1.5mol/l NaCl, 0.5mol/L NaOH）的盘中轻摇动15min。③换到中和缓冲液（1mol/L Tris·HCl , pH8.0, 1.5mol/L NaCl）中轻摇动30min。④裁一张硝酸纤维素膜，2～4张3MM滤纸和一些吸印纸（可用卫生纸），都与胶的大小相同（硝酸纤维素膜和吸印纸不能比胶大，否则易形成旁路），先将硝酸纤维素膜浸到水中，再放入10×SSC中，接触胶和硝酸纤维素膜时都要戴橡胶手套操作。⑤平盘上放一块比胶大的平板（盛胶槽翻过来即可），上面铺一张3MM滤纸，起灯芯作用，盘中加少量10×SSC缓冲液（2.5cm厚），不能没过平板，使3MM滤纸充分饱和。⑥将胶倒扣到3MM滤纸上。⑦浸湿的硝酸纤维素铺在胶上，对齐，铺膜时从一边逐渐放下，防止产生气泡，有气泡时，可用吸管赶出，不能让膜与胶下的滤纸直接接触。⑧膜上放一......阅读全文
DNA探针原位杂交
1、4—6微米切片,用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鲜二甲苯脱蜡,10minX2（趁热脱蜡） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空气干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释,浓度为25μg/ml）,37℃消化1
原位杂交技术介绍
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。另有荧光原位杂交。
原位杂交技术原理
荧光，又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。 在日常
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列（探针）的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC RNA) 探针均能用于定位 DNA 和 mRNA，并
原位杂交(含FISH)
原位杂交组织化学常用试剂及处理 一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售
荧光原位杂交实验
实验方法原理 用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上
荧光原位杂交实验
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、
原位杂交实验步骤
原位杂交实验步骤 一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1． 取400uL XL1-Blue菌种加入到含200ml LB培养基的锥形瓶中，37 ℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重悬细菌，冰浴30 min，离心，弃上清，倒置，再加
荧光原位杂交的应用
该技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位，而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。 FISH最初用于中期染色体。从正在分化的细胞核中制备的这种染色体是高度凝缩的，每条染色体都具有可识别的形态，它们染色后将显现出特征性的着丝粒位置
原位杂交操作方法
（一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。（二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2ml，NaCl 5g，浓HCl 4
原位杂交的技术应用
①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；④基因在染色体上的定位；⑤检测染色体的变化，如染色体数
原位杂交的技术应用
①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；④基因在染色体上的定位；⑤检测染色体的变化，如染色体数
原位杂交的主要程序
1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天1） 二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟；2） 无水乙醇浸泡2次，每次3分钟；3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟；4） PBS清洗3分钟；5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟；6） PBS清洗10分钟；7） 加入胃蛋白酶25ul/
荧光原位杂交技术简介
荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术，是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。
荧光原位杂交的简介
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecul
荧光原位杂交的原理
荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子生物学和细胞遗传学结合的新技术，是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。
原位杂交的基本定义
原位杂交（in situ hybridization）将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。 使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。 RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等
荧光原位杂交技术详解
1974年Evans首次将染色体显带技术和染色体原位杂交联合应用，提高了定位的准确性。20世纪70年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交，即FISH技术。1981年Harper成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上，标志着染色体定位技术取得了重要进展。20世纪90年代，随着人类基因组计划的
电镜原位杂交技术实验
实验方法原理 从理论上讲，前包埋原位杂交技术的敏感性高于后包埋原位杂交技术，因为前者可观察到来自整个切片厚度的信号。但是，探针并不一定能穿透整个切片厚度，特别是用较长的探针。为了增加穿透性，经常应用冻融法或者蛋白酶和去污剂处理，而这样做会导致
电镜原位杂交技术实验
实验方法原理 从理论上讲，前包埋原位杂交技术的敏感性高于后包埋原位杂交技术，因为前者可观察到来自整个切片厚度的信号。但是，探针并不一定能穿透整个切片厚度，特别是用较长的探针。为了增加穿透性，经常应用冻融法或者蛋白酶和去污剂处理，而这样做会导致一些胞内成分如核糖体的丢失，严重时会造成超微结构的形态改变
原位杂交仪的应用
①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究； ②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测； ③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测； ④基因在染色体上的定位； ⑤检测染色
电镜原位杂交技术实验
电镜原位杂交实验可以用于：（1）研究特定核苷酸序列的亚细胞定位；（2）许多研究者已经从光学显微观察扩展到对超微结构的观察。（3）特别是利用地高辛或生物素作为报告分子的非放射性探针，不必像放射性探针那样需要长时间暴露，因此整个过程可以在 24 h 内完成。实验方法原理从理论上讲，前包埋原位杂交技术的敏
原位杂交实验操作步骤
一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mllb培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的Ca
菌落原位杂交技术介绍
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。1、材料：待检测的细菌平皿，已标记好的探针，硝酸纤维素滤膜等。
荧光原位杂交的背景
对于利用rRNA的荧光原位杂交来说，如下原因可导致较低的荧光信号强度： 较低的细胞核糖体含量 较低的细胞周边的通透性 较低的目标序列可接触性（由于rRNA的折叠产生的构象，有些位置与rRNA分子内其他链或其他rRNA或蛋白紧密接触，从而使探针无法和目标序列杂交） 为检验细胞中的目标序列是
简述原位杂交的应用
①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究； ②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测； ③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测； ④基因在染色体上的定位； ⑤检测染色
FISH－荧光原位杂交实验
实验概要1. 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和实验技术 2. 掌握原位杂交技术的操作方法及荧光显微镜的使用方法 3. 了解其在生物学、医学领域的应用实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20
荧光原位杂交的发展
荧光原位杂交技术问世于20世纪70年代后期。1977年，荧光标记的抗体被应用于识别特异性DNA—RNA杂交I I。1980年，J.G.Baunlan等将应用化学偶联的方法将荧光素结合到RNA探针上用于直接快速的特异性靶序列检测。
原位杂交的主要程序
1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天1） 二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟；2） 无水乙醇浸泡2次，每次3分钟；3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟；4） PBS清洗3分钟；5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟；6） PBS清洗10分钟；7） 加入胃蛋白酶25ul/
原位杂交操作规程
（一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。 （二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2m