免疫细胞化学技术的新进展半抗原交联抗体法
免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章叙述,本节仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。【半抗原交联抗体法(Hapten–Coupled techniques)】近年来,为提高敏感性和减低非特异性染色,有些学者(Cammisuli 1976; Jassani 1981; Falini 1983) 在常规免疫细胞化学技术的基础上,发展了半抗原交联抗体法,可作免疫荧光或免疫酶染色。本法的基本原理是应用半抗原标记第一抗体。常用的半抗原有阿散酸,即对氨基苯砷酸(Arsanilic acid, ARS),对氨基苯酰甘氨酸(P-aminobenzoyl glycine),亚对氨苯酰甘氨酸(N-P-aminobonozyl glut......阅读全文
mRNA-的细胞内注射实验
实验步骤 一、用于细胞内注射的加帽 mRNA 的制备材料 步骤1.依次加入下列物质,终体积为 20ul,冰上操作:2.37℃ 温育 lh。3.加入 Iul DNA 酶 I(无 RNA 酶),37℃ 温育 10 min。4.用 RNaid 试剂盒提纯 mRNA。5.25ul 灭菌水(无 RNA 酶)溶
mRNA-的细胞内注射实验
实验步骤一、用于细胞内注射的加帽 mRNA 的制备材料步骤1.依次加入下列物质,终体积为 20ul,冰上操作:2.37℃ 温育 lh。3.加入 Iul DNA 酶 I(无 RNA 酶),37℃ 温育 10 min。4.用 RNaid 试剂盒提纯 mRNA。5.25ul 灭菌水(无 RNA 酶)溶解
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂 1、4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3) 2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 3、Bouin's液及改良Bouin’s液 4、Zamboni’s(Stefanini‘s)液 5、PLP液 6、Karnovsky's液(pH7.3) 7、0
新型口服抗凝药研究新进展
目前新型口服抗凝药已经在国外批准上市,理想的新型口服抗凝药物应具备以下特点:①抗凝治疗效果不劣于华法林;②出血并发症不多于或少于华法林;③具有良好的安全性;④服用方法简单;⑤较少的药物与药物、药物与食物之间的相互作用;⑥不需频繁监测。新型口服抗凝药物的靶点多集中于IIa或Xa,该类药物的研发
美洲狼尾草抗逆研究取得新进展
美洲狼尾草 四川农业大学草业科技学院供图 土壤盐渍化对植物生长,发育和产量造成许多不利影响,被认为是对世界农业和粮食生产可持续发展的重要环境威胁之一。据报道,目前全球10%的土地和50%的农业用地受到盐渍化的影响,给农业产生造成了巨大的损失。如何提高作物对盐渍化胁迫的耐受能力,对缓解全
磷酸交联AFFIGEL-10-亲和介质实验——肽链交联
本实验描述了将磷酸肽链/非磷酸肽链和磷酸酪氨酸交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。实验方法原理本方案描述了将磷酸肽链或非磷酸肽链交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。这里所详述的无水交联法是最有效的肽链交联方法。按此法的步
mRNA-的细胞内注射实验
实验步骤 一、用于细胞内注射的加帽 mRNA 的制备 材料 步骤 1.依次加入下列物质,终体积为 20ul,冰上操作: 2.37℃ 温育 lh。 3.加入 Iul DNA 酶 I(无 RNA 酶),37℃ 温育
抗原准备-交联方法
化学合成的多肽抗原是小分子, 本身很难具有好的抗原性,只能诱导动物产生很弱的免疫反应,因而与载体蛋白交联是很重要的。载体蛋白含有很多抗原决定基,能够刺激T-帮助细胞,进而诱导 B-细胞反应。用于与多肽交联的载体蛋白有多种,其中*常用的是keyhole limpet hemacyanin (K
化学交联原理
化学交联是通过形成共价键将两种或多种分子连接在一起的一种化学方法。其中,共价键的形成主要依赖于使用特定的交联试剂,通常情况下,交联试剂分子都含有可与蛋白质或其他分子发生化学反应的活性基团,如氨基,巯基等。目前,交联试剂已经应用于蛋白质-蛋白质相互作用,蛋白质三维结构,及细胞膜分子结合等方面的研究
原位杂交组织化学杂交体检测
杂交体检测又称杂交体显示,是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体(杂交信号)成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。 (一)放射性核素标记探针的检测 *个原位杂交实验(1969年)以’H作为核酸探针的标记物,杂交信号用放射自显影术检测。随着
免疫荧光补体法实验
实验方法原理 用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原-抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与补体结合,从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。实验材料 抗补体荧光抗体试剂、试剂盒 P
免疫荧光补体法实验
实验方法原理用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原-抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与补体结合,从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。实验材料抗补体荧光抗体试剂、试剂盒PBS甘
紫外交联仪的特点
·为使核苷酸固定在杂交膜上,传统的方法是将膜置于80℃真空烘箱中烘2小时在本紫外交联仪上仅需在254nm紫外光下照射几秒钟即可。 ·紫外照射可使杂交信号比传统烘烤法提高5-10倍。 ·由于紫外交联仪配置了一种紫外能量程序设计系统(Joules/c㎡),即其中的时间积分仪连续检测紫外光的照射。
紫外交联的基本定义
DNA结合蛋白与DNA结合位点的结合后经紫外照射后可形成共价键。如果DNA预先经过标记,则共价结合的复合物经电泳分离和制作放射自显影图谱,能够快速准确的检测DNA结合蛋白及其分子量。
关于交联聚乙烯的简介
聚乙烯(PE)是五大通用塑料之一,其产量和消费量位居各种合成树脂之首,在工业、农业和日常生活中得到广泛的应用。但是聚乙烯的耐高温性能较差。力学性能及耐化学性能有时也不能满足实际使用的要求。因此对聚乙烯进行改性一直是聚乙烯产品开发应用的关键,聚乙烯交联技术就是提高其材料性能的一种重要技术。经过交联
概述交联聚乙烯的应用
交联聚乙烯由于具有优异的性能,被用作火箭、导弹、电机、变压器等所需要的耐高压、高周波、耐热的绝缘材料和电线电缆包覆物.制造热收缩管、热收缩膜、各种耐热管材、泡沫塑料、耐腐蚀的化学设备衬里、部件及容器,制造阻燃建材等。目前用量最大的领域主要是电线电缆、管材和泡沫塑料等。
分泌肿瘤免疫细胞化学(3)
三、甲状腺髓样癌 由甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)产生的恶性肿瘤。此瘤在光镜下与甲状腺非典型腺瘤、未分化癌及转移癌有时难以鉴别。免疫细胞化学染色可见瘤细胞降钙素阳性反应,降钙素免疫反应物常聚积于瘤细胞核周胞浆中,此项检查具有诊断意义。电镜下,瘤细胞中可见二种分泌颗粒,I型颗粒直径约280nm,含有
免疫细胞化学与图像分析
在细胞生物学中,一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多,只要有一个环节 失误就会影响实验结果,除了需要精制的药品外,还需要熟练的技术。那么,做成了理想的标本后,如何进行观察,才能获得尽量多的的各种定量信息,而且使这些
免疫细胞化学常用试剂介绍
一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽
免疫细胞化学常用试剂介绍
一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽
免疫细胞化学与图像分析
在细胞生物学中,一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多,只要有一个环节 失误就会影响实验结果,除了需要精制的药品外,还需要熟练的技术。那么,做成了理想的标本后,如何进行观察,才能获得尽量多的的各种定量信息,而且使这些
酶标抗体制备技术戊二醛交联法简介
戊二醛是一种常用的同型双功能交联剂,通过它的两个醛基分别与HRP和抗体蛋白的氨基结合,形成HRP-戊二醛-Ab蛋白结合物。反应可在4-40℃温度范围,pH6.0~8.0 的缓冲溶液中进行,分为一步法和二步法,戊二醛一步法是将酶和待标记抗体混合,同时加入戊二醛进行交联反应。戊二醛二步法是将酶先与戊
人工脂质体法的功能和应用
人工脂质体法采用阳离子脂质体,具有较高的转染效率,不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系,而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA,以及RNA,和蛋白质。此外,脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达,与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA转入动物和人的体内用于基因治疗。Li
直接免疫荧光抗体法的定义
中文名称直接免疫荧光抗体法英文名称direct immunofluorescence antibody method定 义直接用荧光素标记的抗体检测抗原的一种免疫标记技术。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)
直接免疫荧光抗体法的定义
中文名称直接免疫荧光抗体法英文名称direct immunofluorescence antibody method定 义直接用荧光素标记的抗体检测抗原的一种免疫标记技术。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)
人工脂质体法的功能和应用
人工脂质体法采用阳离子脂质体,具有较高的转染效率,不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系,而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA,以及RNA,和蛋白质。此外,脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达,与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA转入动物和人的体内用于基因治疗。Li
关于酶标抗体法的基本介绍
酶标抗体法,又名酶联免疫吸附法(ELISA),利用酶标记抗原或抗体以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。其基本原理是使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性,而相对应的抗体或抗原与某种酶连接成酶标抗体或抗原,酶标抗体或抗原既保留了免疫活性可以与固相载体表面的抗原或抗体结合,又保留
免疫荧光技术的概述
免疫荧光技术(immune fluorescence) 将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。 免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制
免疫荧光技术的技术方法介绍
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技术,因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合,用于检测或定位各种抗原,也可以与其他蛋白质结合,用于检测或定位抗体,但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用,所以人们习惯称为荧光抗