IgG的分离与提纯:硫酸铵沉淀法

以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性,不应含有非抗体的血清蛋白。因此,为了浓缩和提高抗体的效价,或为制备免疫球蛋白特异性抗体时,通常也需要分离和纯化免疫球蛋白。γ球蛋白(IgG)是血清免疫球蛋白的主要成分,约占全部免疫球蛋白的75%,因此,抗体的分离纯化主要是分离纯化IgG。 纯化IgG小量几十ml的话,用protein A或protein G就可以,疏水柱等也可以纯化;大量的话,上百ml,可以使用streamline protein A。之前根据载量估计一下需要的柱子体积。 实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱,比较简便可获较纯的抗体。下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。 一、材料与试剂配制 1、动物血清 2......阅读全文

简述过硫酸铵的主要用途

  检定和测定锰,用作氧化剂。漂白剂。照相还原剂和阻滞剂。电池去极剂。用于可溶性淀粉的制备;用作醋酸乙烯、丙烯酸酯等烯类单体乳液聚合的引发剂,价格便宜,所得乳液耐水性较好;还用作脲醛树脂的固化剂,固化速度最快;亦用作淀粉胶黏剂的助氧化剂,与淀粉成分中的蛋白质反应提高粘接性,参考用量为淀粉的0.2%~

关于亚硫酸铵的理化性质介绍

  一、物理性质  性状: 无色单斜晶系结晶。  相对密度: 1.41(25℃)  溶解性: 溶于水,其水溶液呈弱碱性。微溶于醇。不溶于丙酮和二硫化碳。  二、化学性质  1.在空气中易氧化。60-70℃分解。  2.喷水或使用干粉、二氧化碳、泡沫灭火剂。

关于亚硫酸铵的制备和来源介绍

  工业生产一般是用水或母液或氨水吸收制硫酸尾气中二氧化硫或焚硫烟气中二氧化硫制取亚硫酸氢铵,再加入氨水或碳酸氢铵中和反应制得。  1.氨水法:将氨水配制成一定比重和碱度的溶液,循环吸收制硫酸尾气或焚硫烟气中二氧化硫,制得亚硫酸氢铵溶液,当吸收液相对密度达到1.30~1.32时送入中和器,再加入氨水

乙醇沉淀蛋白质的原理是什么

  蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有bai盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂与某些酸(如三氯醋酸)沉淀等。乙醇沉淀蛋白质是蛋白发生变性析出。  盐析法  在蛋白质溶液中加入大量的硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐,破坏蛋白质的水化膜和中和电

纳米氧化铝的制备方法沉淀法的介绍

  沉淀法是向含有一种或者多种离子的金属盐溶液中加入合适的沉淀剂,与金属阳离子生成不可溶性的氢氧化物、水合氧化物或者是盐类等,然后经过过滤、洗涤等过程除去杂质及其多余的离子,进而经过干燥、热分解等过程既可以得到纳米粒子。  直接沉淀法是向通过添加适当的沉淀剂直接和金属盐溶液发生反应产生沉淀,沉淀经过

可溶性抗原的提纯和纯化

1. 超速离心法:适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原,不适用于大多数中小分子抗原。2. 选择性沉淀法:(1)核酸去除法:核糖核酸降解法更简便。(2)盐析法:常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。(3)有机溶剂沉淀法:常采用乙醇或丙酮。(4)聚合物沉淀法:常用非离子型聚合物,如聚

可溶性抗原的提纯和纯化是什么?

  1. 超速离心法:适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原,不适用于大多数中小分子抗原。  2. 选择性沉淀法:  (1)核酸去除法:核糖核酸降解法更简便。  (2)盐析法:常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。  (3)有机溶剂沉淀法:常采用乙醇或丙酮。  (4)聚合物沉淀法:

可溶性抗原的提纯和纯化是什么?

  1. 超速离心法:适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原,不适用于大多数中小分子抗原。  2. 选择性沉淀法:  (1)核酸去除法:核糖核酸降解法更简便。  (2)盐析法:常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。  (3)有机溶剂沉淀法:常采用乙醇或丙酮。  (4)聚合物沉淀法:

蛋白质沉淀的方法有哪些

蛋白质沉淀的定义:蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀。蛋白质沉淀的方法:盐析法 ——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化;在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体

常用去盐的方法有哪些

蛋白质沉淀的定义: 蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀。 蛋白质沉淀的方法: 盐析法 ——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化; 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白

蛋白质溶液中加入丙酮来沉淀蛋白会导致蛋白质变性吗

蛋白质溶液中加入丙酮来沉淀蛋白,这不会导致蛋白质变性蛋白质沉淀的定义:蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀。蛋白质沉淀的方法:盐析法 ——多用于各种蛋白质和酶的分离纯

简述硫酸铵的生产方法和注意事项

  1、使用注意事项  (1)不能与其他碱性肥料或碱性物质接触或混合施用,以防降低肥效。  (2)不宜在同一块耕地上长期施用硫酸铵,否则土壤会变酸造成板结。如确需施用时,可适量配合施用一些石灰或有机肥。但必须注意不能和石灰混施,以防止硫酸铵分解,造成氮素损失。一般两者的配合施用要相隔3~5 天。  

简述过硫酸铵的泄露处理和防护处理

  一、泄漏处理  隔离泄漏污染区,限制出入。建议应急处理人员戴防尘面具(全面罩),穿防毒服。不要直接接触泄漏物。勿使泄漏物与还原剂、有机物、易燃物或金属粉末接触。  小量泄漏:用砂土、干燥石灰或苏打灰混合。收集于干燥、洁净、有盖的容器中。也可以用大量水冲洗,洗水稀释后放入废水系统。  大量泄漏:收

关于过硫酸铵的操作处置与储运介绍

  操作注意事项:密闭操作,局部排风。操作人员必须经过专门培训,严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴头罩型电动送风过滤式防尘呼吸器,穿聚乙烯防毒服,戴橡胶手套。远离火种、热源,工作场所严禁吸烟。避免产生粉尘。避免与还原剂、活性金属粉末接触。搬运时要轻装轻卸,防止包装及容器损坏。禁止震动、撞击和摩擦。配

简述过硫酸铵的急救措施和消防措施

  一、急救措施  皮肤接触:立即脱去污染的衣着,用大量流动清水冲洗至少15分钟。就医。  眼睛接触:立即提起眼睑,用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。就医。  吸入:迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难,给输氧。如呼吸停止,立即进行人工呼吸。就医。  食入:用水漱口,给饮

硫酸铵的泄漏应急处理和操作处置储存

  1、泄漏应急处理  应急处理: 隔离泄漏污染区,限制出入。建议应急处理人员戴防尘面具(全面罩),穿防毒服。用洁净的铲子收集于干燥、洁净、有盖的容器中,转移至安全场所。若大量泄漏,收集回收或运至废物处理场所处置。  2、操作处置储存  操作注意事项: 密闭操作,局部排风。操作人员必须经过专门培训,

辛酸硫酸铵法从人血清中纯化IgG

一、实验目的1、初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。2、了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。二、实验原理辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白,辛酸为短链脂肪酸,在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质;第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来,操作步骤如图3-10所示。

关于亚计量沉淀法的介绍

  取甲和乙两份等量放射性同位素溶液,各含待测元素。克,其放射性为Ao,放射性比度为w。将乙溶液加到含x克待测元素的试液中,进行同位素稀释后,其放射性比度为s1。如果从甲和乙(已与试液混合)溶液中分另l]等量沉淀出待测元素w0克,分别测得其放射性为Aa和Ab。  这样的方法就避免了用一般化学法定量,

水处理中沉淀法的概述

沉淀法是水处理中最基本的方法之一。它是利用水中悬浮颗粒和水的密度差,在重力作用下产生下沉作用,以达到固液分离的一种过程。按照污水的性质与所要求的处理程度的不同,沉淀处理工艺可以是整个水处理过程中的一个工序,亦可以作为唯一的处理方法。在典型的污水处理厂中,沉淀法可用于下列几个方面:1、污水处理系统的预

免疫沉淀法的技术特点

免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)是一种研究蛋白质间交互作用的生物技术,这种技术是将蛋白质视为抗原,并利用抗体与之进行特异性结合的特性,来进行研究。这项技术可用来将含有上千种不同蛋白质的样品中,分离和浓缩出特定蛋白质。进行免疫沉淀法时,抗体需要和一个受质结合。

沉淀法制备纳米氧化铁

沉淀法由于成本低廉、操作简单,是液相化学合成高纯度纳米微粒采用的zui广泛的方法之一。 沉淀法制备过程: 1先在溶液环境中溶解一种或多种可溶性铁盐溶液; 2然后加入适当沉淀剂(OH-、C2O42-、CO32-等),形成不饱和的氢氧化物、水合氧化物和盐类; 3从溶液中析出,并将溶剂和溶液中原有的阴离子

免疫沉淀法的主要类型

个别免疫沉淀法(IP):用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫共沉淀法(Co-IP):研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP):用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP):和ChIP相近,但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术(RNA Binding

放射免疫沉淀法

中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定  义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

水解沉淀法的制备方法介绍

  水解沉淀法就是利用碱性物质的水解释放OH-,常用的碱性物质有尿素、己二胺等,这些物质释放OH-的速度比较慢,在制备纳米Fe3O4微粒时有利于生成颗粒均匀的纳米颗粒,通常这种方法能制备出颗粒分布在7nm到39nm的纳米颗粒。

铅盐沉淀法的相关介绍

  铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中,能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀,故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。因此,常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄

关于共沉淀法的应用介绍

  制备纳米陶瓷粉体所用的共沉淀法是在含有多种阳离子的溶液中加入沉淀剂,使所有金属离子完全沉淀的方法。利用共沉淀法制备纳米粉体,需要控制的工艺条件包括:化学配比、溶液浓度、溶液温度、分散剂的种类和数量、混合方式、搅拌速率、pH值、洗涤方式、干燥温度和方式、煅烧温度和方式等。通过在NH4HCO3溶液中

分步沉淀法溶解沉银介绍

先将渣用水和稀释后的母液进行浆化、搅拌,可溶性的金属这时可溶解成一系列的硫酸盐溶液。在此之前,冶炼厂对银的回收几乎未找到较为合适的办法,致使大部分的银流失到铁渣中,大大降低了银的回收率。经过摸索,在原有设备的基础上,将碱液接到浆化浸出槽的上方,在边搅拌边浸出的同时,再加入碱液,直到pH值到一定值时,

关于化学沉淀法的应用介绍

  化学沉淀法经常用于处理含有汞、铅、铜、锌、六价铬、硫、氰、氟、砷等有毒化合物的废水。利用向废水中投加氢氧化物、硫化物、碳酸盐、卤化物等生成金属盐沉淀可以去除废水中的金属离子,向废水中投加钡盐可用于处理含六价铬的工业废水生成铬酸盐沉淀,向废水中投加石灰生成氟化钙沉淀可以去除水中的氟化物。

沉淀DNA的实验——乙醇沉淀法

沉淀DNA的实验可应用于分离DNA。实验方法原理DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比9

丙酮沉淀法具体怎么做

1、在4度下,1:1或相应比例向蛋白质中加入丙酮(一般用20%-50%的丙酮沉淀蛋白),在冰域中温和的搅拌10-15分钟;2、低温10000g离心10分钟,除去上清液,用以沉淀体积的2倍体积的冷缓冲液悬浮。丙酮沉淀应该注意的是:1、此过程容易使蛋白质变性,所以有很多情况下复溶的时候会出现沉淀不溶的现