沉淀反应技术(Precipitationreactiontechnique)(1)
一、 概述可溶性抗原(如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等)与其相应的抗体相遇后,在电解质参与下,抗原抗体结合形成白色絮状沉淀,出现白色沉淀线,此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原(precipitinogen),与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素(precipitin)。沉淀反应的发生机制与凝集反应基本相同。不同之点是:沉淀原分子小,单位体积内总面积大,故在定量试验时,通常稀释抗原。沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。环状沉淀反应是最早的沉淀反应,目前在链球菌的分类、鉴定,昆虫吸血性能及所吸血液来自何种动物的鉴别,肉品种属鉴定及炭疽尸体与皮张的检验工作中仍然应用。主要是用已知的抗体诊断未知的抗原。絮状沉淀反应是将抗原与血清在试管内混合,在电解质存在的情况下,抗原抗体复合物可形成混浊沉淀或絮状沉淀凝聚物,此法通常用于毒素与抗毒素的滴定。琼脂凝胶免疫扩散(Agar......阅读全文
沉淀反应的定义和阶段都有哪些?
沉淀反应的定义:沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象。沉淀反应分两个阶段:第一阶段为抗原抗体发生特异性结合,几秒到几十秒即可完成,出现可溶性小的复合物,肉眼不可见;第二阶段为形成可见的免疫复合物,约需几十分钟到数小时才能完成,如沉淀线、沉淀环。
絮状沉淀试验的不良反应与风险
1、皮下出血:由于按压时间不足5分钟或是抽血技术不过关等原因可导致皮下出血。 2、不适感:穿刺部位可能会出现疼痛、肿胀、压痛、肉眼可见的皮下瘀斑等。 3、晕血或晕针:在抽血时,由于情绪过度紧张、恐惧、反射性引起迷走神经兴奋、血压下降等导致脑供血不足引发晕针或晕血。 4、感染的风险:如果使用
关于免疫诊断方法—沉淀反应(precipitation)概述
可溶性抗原与相应抗体在有适量电解质存在下,出现肉眼可见的沉淀现象,称为沉淀反应。参与反应的抗原称沉淀原(precipitinogen),抗体称沉淀素(precipitin)。沉淀原可以是多糖、蛋白质、类脂等,由于其体积小,相对反应面积大,故试验时需对抗原进行稀释,以避免后带现象。应用较早的沉淀反
关于沉淀反应—火箭电泳(rocket-electrophoresis)-的简介
火箭电泳(rocket electrophoresis) 若在单向琼脂扩散基础上,加入抗原后,将琼脂板置电场中,使抗原置于负极即向正极定向扩散,在与板中的抗体结合而形成锥形沉淀峰,形似火箭,故名火箭电泳。沉淀峰的高度与抗原浓度成正比。由于在电场作用下,促使带负电荷多的抗原泳动,故火箭电泳需时短,
沉淀反应实验:免疫电泳(immune-electrophoresis)实验
免疫电泳实验免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离,然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散,在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物,故可用抗原成分分析;且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。1、材料(1)待检标本(抗原):正常人
絮状沉淀试验的不良反应与风险
1、皮下出血:由于按压时间不足5分钟或是抽血技术不过关等原因可导致皮下出血。 2、不适感:穿刺部位可能会出现疼痛、肿胀、压痛、肉眼可见的皮下瘀斑等。 3、晕血或晕针:在抽血时,由于情绪过度紧张、恐惧、反射性引起迷走神经兴奋、血压下降等导致脑供血不足引发晕针或晕血。 4、感染的风险:如果使用
沉淀反应的注意事项与检查过程
注意事项 不合宜人群:无特殊要求。 检查前禁忌:禁忌暴饮暴食,最好是在早上空腹检测。 检查时的要求:根据免疫沉淀的结果,可以对盐浓度做一定的调整,如果沉淀的杂蛋白较多可适当增加盐浓度,如果抗体与目的蛋白的结合力较弱则适当减低盐浓度。 检查过程 沉淀反应分两个阶段,第一阶段发生抗原抗体特
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(3)
五 对流免疫电泳 【 实验原理 】 当抗原和抗体在琼脂介质中电泳时 ,抗体的 PI 比较高,在适当的 pH 值下,抗体带正电荷而抗原带负电荷,故在电场中抗体向阴极方向移动而抗原向阳极运动,直至相遇后形成沉淀线,其原理与双向免疫扩散相同,但具有方法简便,快速及一次电泳可以检测多个样品等特
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(2)
三 双向扩散 【 实验原理 】 双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散,彼此相遇后形成特 异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内,使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时,彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。 【 实验材料
沉淀反应的临床意义及注意事项
临床意义 异常结果:当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。沉淀反应技术由于特异性很强,而被广泛应用于鉴定混合物中蛋白质组分,鉴定菌型,诊断疾病以及在法医上鉴定血迹等。如检查梅毒抗体的康氏反应。 需要检查的人群:受相关病毒感染者,或
沉淀反应的正常值及临床意义
正常值 沉淀反应的反应曲线中,抗原抗体分子比例合适的范围称为等价带。结果是呈阴性。 临床意义 异常结果:当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。沉淀反应技术由于特异性很强,而被广泛应用于鉴定混合物中蛋白质组分,鉴定菌型,诊断疾病以
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(2)
三 双向扩散 【 实验原理 】 双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散,彼此相遇后形成特 异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内,使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时,彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。 【 实验材料
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(1)
可溶性抗原(如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等)与其相应的抗体在溶液中或凝胶中结合,若比例合适,可形成肉眼可见的抗原-抗体复合物,这就是免疫沉淀反应。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用琼脂糖凝胶做介质,有的加电流,使反应更快更灵
概述四氧化三铁沉淀法反应原理
沉淀法由于其工艺操作简单成本较低,产品纯度高,组成均匀,适合于大规模生产,成为最常用的纳米颗粒的制备方法。同时,通过向沉淀混合液中加入有机分散剂或络合剂可提高纳米粒子的分散性,克服纳米粒子易团聚的缺点。常用的沉淀法有共沉淀法、水解沉淀法、超声沉淀法、醇盐水解法和螯合物分解法等。
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(1)
可溶性抗原(如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等)与其相应的抗体在溶液中或凝胶中结合,若比例合适,可形成肉眼可见的抗原-抗体复合物,这就是免疫沉淀反应。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用琼脂糖凝胶做介质,有的加电流,使反应更快更灵敏。一、环状沉淀
絮状沉淀试验的不良反应与风险有哪些
1、皮下出血:由于按压时间不足5分钟或是抽血技术不过关等原因可导致皮下出血。 2、不适感:穿刺部位可能会出现疼痛、肿胀、压痛、肉眼可见的皮下瘀斑等。 3、晕血或晕针:在抽血时,由于情绪过度紧张、恐惧、反射性引起迷走神经兴奋、血压下降等导致脑供血不足引发晕针或晕血。 4、感染的风险:如果使用
关于沉淀反应—单向琼脂扩散(simple-agar-diffusion)-的介绍
单向琼脂扩散(simple agar diffusion) 简称单扩,将特异性抗体与熔化的琼脂混合均匀,使抗体均匀分布于琼脂,然后浇制成琼脂板,再按一定要求打孔并加入抗原,使抗原向孔周自由扩散,与板中的抗体形成沉淀圈。本法为定量试验,沉淀圈的直径与抗原浓度成正比。单扩常用于血清中免疫球蛋白、AF
四氧化三铁共沉淀法的反应原理
共沉淀法在含有多种阳离子的溶液中加入沉淀剂,让所有离子完全沉淀。为了获得均匀的沉淀,通常将含有多种阳离子的盐溶液慢慢加入到过量的沉淀剂中进行搅拌,使所有离子的浓度大大超过沉淀的平衡浓度,尽量使各组分按比例同时析出来。 其原理是Fe2++2Fe3++8OH-→Fe3O4+4H2O。 沉淀法制备
关于沉淀反应—双向琼脂扩散(double-agar-diffusion)--的简介
双向琼脂扩散(double agar diffusion) 简称双扩,先制备琼脂板,再按要求打孔并分别加入抗原和抗体,使两者同时在琼脂板上扩散,若两者对应且比例合适,则在抗原和抗体两孔之间形成白色沉淀线。一对相应的抗原抗体只形成一条沉淀线,因此可根据沉淀线的数目推断待测抗原液中有多少种抗原成分;
关于沉淀反应—对流免疫电泳(counter-immunoelectrophoresis)-的简介
对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) 若在双扩基础上加电泳,将抗原孔置负极端,抗体孔置正极端。由于抗原所带的负电荷较抗体多,且抗原分子小于抗体,在电场中能够克服电渗的作用而由负极泳向正极;抗体却克服不了电渗作用,从正极向负极移动,二者形成对流,并在比例适宜处
液体内沉淀试验絮状沉淀试验
抗原抗体溶液在电解质的存在下结合,形成絮状沉淀物,这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响,因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法,常见类型有:(一)抗原稀释法 抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。(二)抗体稀释法 抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。(三)方阵滴定法 即棋盘滴定法。
液体内沉淀试验:絮状沉淀试验
絮状沉淀试验是反映血清白蛋白和球蛋白改变的一类定性性质的肝功能试验。当肝脏有实质性病变时,所引起的蛋白质量与质的变化可以使浊度增加。正常值正常值0-6单位。临床意义异常结果:(1)、轻、中度增高,见于肝脓肿、肝癌。 (2)、显著增高,见于急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝等。 需要检查人群:肝功能不
适合于作为滴定用的沉淀反应必须满足的要求
(1)反应速度快,生成沉淀的溶解度小;(2)反应按一定的化学式定量进行;(3)有准确确定理论终点的方法。
MBR膜生物反应器与沉淀池的较量
MBR膜生物反应器是近十几年来得到快速发展的新型污水处理技术。MBR膜生物反应器出水水质好,耐水质冲击能力强,污泥产率低,管理简单方便,特别适宜于老的污水处理厂的中水回用。 由于MBR工艺的突飞猛进,人们难免会憧憬未来的污水处理厂是否还需要沉淀池。回溯到1993年,欧洲成立了沉淀池学术研究组,
常用的鉴别方法化学鉴别法沉淀生成反应鉴别法
沉淀生成反应鉴别法是指供试品溶液中加人适当的试剂溶液,在一定条件下进行反应,生成不同颜色或特殊形状的沉淀。(1)与重金属离子的沉淀反应:在一定条件下,药物和重金属离子反应,生成不同形式的沉淀,如巴比妥类药物。(2)与硫氰化铬胺(雷氏盐)的沉淀反应:应用于生物碱及其盐或具有芳香环的有机碱及其盐,如硫酸
沉淀DNA的实验——乙醇沉淀法
沉淀DNA的实验可应用于分离DNA。实验方法原理DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比9
继沉淀和共沉淀的基本性质
共沉淀是一种沉淀从溶液中析出时,引起某些可溶性物质一起沉淀的现象。例如,用氯化钡沉淀硫酸钡时,若溶液中有K+、Fe3+存在,在沉淀条件下本来是可溶性的硫酸钾和硫酸铁,也会有一小部分被硫酸钡沉淀夹带下来,作为杂质混在主沉淀中。继沉淀现象共沉淀现象的区别如下:1、继沉淀引入杂质的量,随沉淀在试液中放置时
免疫沉淀
免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。材料:上样buffer的配方(用前现配):2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.835ul distilled water2.5ul 2-mercaptoethanol12.5ul 10%SD
免疫共沉淀
实验概要本实验以植物叶片为试材介绍了免疫共沉淀的基本方法。主要试剂50uM雌激素,液氮,提取缓冲液TBS(50mM Tris-Cl,0.15M NaCl,pH 7.4,1mM PMSF,5mM Benzamidine),glycine-HCl,TBS,洗脱缓冲液(TBS,0.5mg/mL 3
沉淀的滤过
滤过是使沉淀和母液分开,与过量沉淀剂、共存组分或其他杂质分离,从而得到纯净的沉淀。若后续处理需要灼烧的沉淀,用定量滤纸过滤,这种滤纸已用HCl和HF处理,大部分无机物已被除去,每张滤纸灼烧后残留灰分小于0.2mg。根据沉淀的性质,选择疏密程度不同的定量滤纸。①一般无定形沉淀,应选用疏松的快速滤纸;②