沉淀反应实验原理、材料和实验方法(1)
可溶性抗原(如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等)与其相应的抗体在溶液中或凝胶中结合,若比例合适,可形成肉眼可见的抗原-抗体复合物,这就是免疫沉淀反应。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用琼脂糖凝胶做介质,有的加电流,使反应更快更灵敏。一、环状沉淀 【 实验原理 】 在环状沉淀试管中,当可溶性抗原与相应特异性抗体结合后,于两者交界面处可形成白色沉淀环。此法系 Ascoli于1902年建立,用于检查兽类内脏、皮毛浸液等标本中炭疽杆菌抗原,由于其较高的灵敏性和特异性,目前仍用于法医学血迹鉴定、流行病学媒介昆虫的吸血习性鉴定等。 【 实验材料 】 待测血迹干燥纸片 抗人血清抗体、抗羊血清抗体和抗鸡血清抗体 生理盐水 环状沉淀管及管架、吸管等。 【 实验方法 】 1、取环状沉淀管3支,分别加入抗人、......阅读全文
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(1)
可溶性抗原(如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等)与其相应的抗体在溶液中或凝胶中结合,若比例合适,可形成肉眼可见的抗原-抗体复合物,这就是免疫沉淀反应。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用琼脂糖凝胶做介质,有的加电流,使反应更快更灵
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(1)
可溶性抗原(如血清中的蛋白,组织浸出液,细胞裂解液等)与其相应的抗体在溶液中或凝胶中结合,若比例合适,可形成肉眼可见的抗原-抗体复合物,这就是免疫沉淀反应。免疫沉淀反应可以在小玻璃管中或毛细玻璃管及凝胶平板中进行。在用凝胶平板做实验时,常用琼脂糖凝胶做介质,有的加电流,使反应更快更灵敏。一、环状沉淀
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(3)
五 对流免疫电泳 【 实验原理 】 当抗原和抗体在琼脂介质中电泳时 ,抗体的 PI 比较高,在适当的 pH 值下,抗体带正电荷而抗原带负电荷,故在电场中抗体向阴极方向移动而抗原向阳极运动,直至相遇后形成沉淀线,其原理与双向免疫扩散相同,但具有方法简便,快速及一次电泳可以检测多个样品等特
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(2)
三 双向扩散 【 实验原理 】 双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散,彼此相遇后形成特 异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内,使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时,彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。 【 实验材料
沉淀反应实验原理、材料和实验方法(2)
三 双向扩散 【 实验原理 】 双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散,彼此相遇后形成特 异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内,使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时,彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。 【 实验材料
免疫沉淀(Immunoprecipitation)实验材料和方法
免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。材料:上样buffer的配方(用前现配):2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.835ul distilled water2.5ul 2-mercaptoethanol12.5ul 10%SDS10ul 80% glycerol2ul br
沉淀反应实验:环状沉淀反应
可溶性抗原与相应的抗体混合,在电解质存在的条件下,两者比例适合,即可有沉淀物出现,叫沉淀反应(Precipitation)。由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。为了求得抗原与抗体的适宜比例,保证有足够的抗体,而且抗原分子小,具有较大的反应面积,因此操作上通常是稀释抗原,不稀释
环状沉淀反应实验
环状沉淀反应广泛应用于法医学的血迹鉴别和食物掺假的测定。通常这些可疑材料作为抗原,用标准抗血清加以鉴定。它具有用材少的优点,例如衣服等物品上的血迹用生理盐水洗下就可作为抗原进行检查。实验方法原理可溶性抗原例如细菌的提取物,血清、病毒溶液等与相应抗体反应,在有电解质的情况下,会产生细微的沉淀称为沉淀反
环状沉淀反应实验
最简单、古老的一种沉淀试验。即在小口径试管内加入已知抗血清,沿管壁加入待检抗原于血清表面,若抗体与相应抗原发生反应,两层液面交界处出现白色环状沉淀,是为阳性,主要用于抗原的定性实验。实验方法原理当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。实验材
环状沉淀反应实验
实验方法原理 当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。实验材料 免疫血清试剂、试剂盒 抗原生理盐水仪器、耗材 小沉淀管毛细吸管橡皮头实验步骤 1. 取小沉淀管2只,以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升,加入第一管,加时注意不能有气泡。2.
凝集吸收实验原理、材料和方法
一、原理肠道杆菌中的许多细菌都有部分相同的抗原结构。因之一种细菌可与另一种细菌相应的抗血清发生交叉凝集反应。用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去,剩下抗体只能与特异性抗原起反应,这种实验即称凝集吸收实验。利用凝集吸收实验可制备单价因子血清,以进行细菌抗原结构的分析
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(1)
凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合,在适量电解质存在的条件下,形成肉眼可见的凝集现象。一、直接凝集反应 颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)直接与相应特异性抗体结合,在适量电解质存在条件下,出现肉眼可见的凝集现象,称直接凝集反应。参加凝集反应的抗原称为凝集
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(1)
凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合,在适量电解质存在的条件下,形成肉眼可见的凝集现象。 一、直接凝集反应 颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)直接与相应特异性抗体结合,在适量电解质存在条件下,出现肉眼可见的凝集现象,称直接凝集反应。
沉淀反应实验:火箭电泳(rocket-electrophoresis)实验
火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。1、材料(1)诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清(2)待检血清(抗原):
沉淀反应实验:琼脂扩散(agar-diffusion)实验
琼脂扩散实验琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时,便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时,便依各自扩散速度的差异,在适当部位形成独立的沉淀线,因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原
Southern印迹杂交实验原理和方法1
实验原理核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为了进一
沉淀反应实验:免疫电泳(immune-electrophoresis)实验
免疫电泳实验免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离,然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散,在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物,故可用抗原成分分析;且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。1、材料(1)待检标本(抗原):正常人
聚合酶链反应[PCR]实验原理和操作步骤(1)
【实验原理】聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)即PCR技术是美国Cetus公司人类遗传研究所的科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种体外扩增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特异性、灵敏度,在分子生物学、基因工程研究、某些疾病的诊断以及临床标
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤(二)
四、实验步骤 1、噬菌体的诱导和裂解液的制备 ( 1 ) 供菌体的活化与培养:取一环供体菌,接种于盛有 5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中, 37 ℃培养 16 h 后,吸 0.5 ml 菌液,接种于盛有 4.5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中,继续培养 4-6 h 。 (
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤(一)
一、实验目的 以局限性转导为例来说明转导的基本原理,进一步验证 DNA是遗传物质,并初步掌握转导实验的基本方法。 二、实验原理与意义 转导是以噬菌体为媒介将一个细胞的遗传物质转移给另一个细胞的过程。随着分子遗传学的发展,转导已成为基因精细结构分析的常用方法。 转导实验中常用的是λ噬菌
免疫沉淀实验原理、仪器试剂和操作步骤
(一)原理免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白 A/G(Protein A/G)或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经洗涤后,重悬于电泳上
基因的PCR扩增实验原理、实验材料和操作步骤
实验原理单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用
沉淀反应实验:对流免疫电泳
对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10-15倍。血清蛋白在PH8.6条件下带负电荷,所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷,而且它的分子量又较大(为r球蛋
免疫共沉淀的实验原理简介
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质
免疫共沉淀实验方法
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x
定量PCR原理、材料与实验方法
一.原理应用定量PCR技术,用一种标准作对照能够估计出一种特异性靶DNA或RNA分子的相对含量。参照物:在定量 PCR 中必须加入参照物,用来作为扩增系统的阳性对照,并作为未知样本定量的标准,且通过竞争性作用校正扩增系统内管间的扩增效率,使其具有可比性。参照物按其性质不同可分为内参照和外参照。内参照
细菌的局限性转导实验原理、材料和实验步骤
一、实验原理: 转导是由噬菌体为媒介将一个细胞的遗传物质转移给另一个细胞的过程。随着分子遗传学的发展,转导已成为基因精细结构分析的常用方法。转导可分为局限性转导和普遍性转导二大类。 本实验试图用局限性转导为例,用噬菌体(λ)专一性转导半乳糖发酵基因的现象来说明转导的基
RNA干扰(RNAi)实验原理与方法(1)
近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。一、R
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(2)
(一)正向间接血凝试验 将绵羊红细胞或人的“ O”型红细胞用醛类固定(称为醛化,可改变血球表面性质,使其易于吸附蛋白质类抗原,并可长期保存使用),再将可溶性抗原吸附于醛化的血细胞上,制成抗原致敏的红细胞,当与相应的抗体结合,使红细胞被动的聚合在一起,出现肉眼可见的凝集现象
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集...(2)
(一)正向间接血凝试验 将绵羊红细胞或人的“ O”型红细胞用醛类固定(称为醛化,可改变血球表面性质,使其易于吸附蛋白质类抗原,并可长期保存使用),再将可溶性抗原吸附于醛化的血细胞上,制成抗原致敏的红细胞,当与相应的抗体结合,使红细胞被动的聚合在一起,出现肉眼可见的凝集