原代胎儿肾小球系膜细胞培养方法步骤

取引产胎儿肾,无菌操作,1小时内完成。2用生理盐水冲洗干净。取肾皮质,用小外科剪剪成碎麽。依次研磨过80目,100目,200目筛网,不断用生理盐水冲洗,最后在200目筛网上收集肾小球,先用0。4%的胶原酶四消化半小时,接种于50ML的培养瓶里,加含有20%小牛血清的DMEM培养基放二氧化碳培养箱培养。三天后可在倒置镜下观察见有细胞贴壁生长。一周后换液一次,以后约三到四天就能长满瓶底。此时可常规传代,到第三代时,基本上生长的全是肾小球系膜细胞了,这时要进鉴定了,方法包括:常规HE染色,细胞免疫组化(小鼠抗人肌动蛋白单抗,角蛋白单抗,等),电镜(扫描,透射)。纯度达95%以上时可用于实验。......阅读全文

原代胎儿肾小球系膜细胞培养方法步骤

取引产胎儿肾,无菌操作,1小时内完成。2用生理盐水冲洗干净。取肾皮质,用小外科剪剪成碎麽。依次研磨过80目,100目,200目筛网,不断用生理盐水冲洗,最后在200目筛网上收集肾小球,先用0。4%的胶原酶四消化半小时,接种于50ML的培养瓶里,加含有20%小牛血清的DMEM培养基放二氧化碳培养箱培养

人类滑膜原代细胞培养步骤和体会

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(可不要动它),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室;2、在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤;3、获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(

原代神经细胞培养操作步骤

1.取出生后1-3天内的大鼠脑组织后,先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分,置入Hanks液中漂洗1~2次后,置于30~50倍体积的Hank液中,脑组织比较柔软,反复吹打即可制成细胞悬液。 2.为排除脂肪成分和其它碎块,把悬液注入离心管中,在室温直立5~10分钟后,细胞或细胞团块自然下沉,脂肪等

原代神经细胞培养操作步骤

1.取出生后1-3天内的大鼠脑组织后,先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分,置入Hanks液中漂洗1~2次后,置于30~50倍体积的Hank液中,脑组织比较柔软,反复吹打即可制成细胞悬液。 2.为排除脂肪成分和其它碎块,把悬液注入离心管中,在室温直立5~10分钟后,细胞或细胞团块自然下沉,脂肪等

系膜增生性肾小球肾炎特点

  1、临床特点;  ①占肾活检病例的50%,在原发性肾病综合征中占30%;  ②男性多于女性,好发于青少年;  ③50%有前驱感染史;  ④70%患者伴有血尿,多为镜下血尿,也有为反复发作的肉眼血尿;  ⑤病情由轻转重,肾功能不全及高血压的发生率逐渐增加。  2、病理特点  ①系膜区细胞增多;  

细胞培养原代培养的操作步骤

混匀操作要领(1)火焰消毒吸管,用Hanks液冷却和湿润管内壁(这是因为刚分离的组织细胞易粘在管壁上)(2)吸管头插入管底(3)用吸管反复轻轻吹打组织块器械的使用(1)用工作台消毒镊子取浸泡在酒精中消毒的器械。(2)器械置无菌干纱布内嚓一下。迅速通过火焰,冷却后使用。(3)用过的器械置另一加盖的器皿

小鼠神经元原代细胞培养步骤

  小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤:  1、 于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠脑;  2、 预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗,用眼科剪将皮质反复剪切成碎块;  3、 移入培养皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,37℃培养箱中消化30min;  4、

系膜增生性肾小球肾炎的简介

  系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)是根据光镜所见的一种病理形态学诊断的肾炎,是一组以弥漫性肾小球系膜细胞增生及不同程度系膜基质增多为主要特征的肾小球疾病。1977年世界卫生组织(WHO)正式将其列为一种原发性肾

原代细胞培养方法有哪些

你主要要原代培养那种细胞,不同的细胞方法肯定不同。如一般悬浮细胞,如血液细胞,就分离后,直接培养。培养组织中的细胞,就需要消化过后,进行培养。也有用组织块培养的

系膜增生性肾小球肾炎的症状体征

  系膜增生性肾炎可发生于任何年龄,年龄较大的儿童和青年发病率较高,高峰年龄为16~30岁。男性病例略高于女性。系膜增生性肾小球肾炎多数起病隐匿,常见上呼吸道感染为前驱症状,其发生率为30.8%~40.3%。系膜增生性肾小球肾炎的特点是临床表现多样化,几乎各种原发性肾小球肾炎的发病形式及临床表现均可

系膜增生性肾小球肾炎的诊断依据

  MsPGN临床表现呈多样化,如起病隐匿(无前驱感染)或以急性肾炎综合征(有前驱感染)、肾病综合征、无症状性蛋白尿和(或)血尿等方式起病;系膜增生性肾小球肾炎常有肾小球源性血尿和非选择性蛋白尿,伴或不伴高血压等急性肾炎表现,特别是青少年,有以上情况者,应怀疑系膜增生性肾小球肾炎。确诊仍依赖肾活检检

系膜增生性肾小球肾炎的病因分析

  系膜增生性肾炎的病因仍未明确。部分病例起病前有感染史,以上呼吸道感染居多,但病原不明,感染对系膜增生性肾小球肾炎确切的作用也不清楚。鉴于免疫荧光检查有多种表现,推测系膜增生性肾小球肾炎的致病因素可能存在多种。系膜增生性肾炎患者的肾小球系膜区有免疫球蛋白和补体C3的沉积,提示为一种免疫介导炎症性疾

系膜增生性肾小球肾炎的疾病描述

  系膜增生性肾小球肾炎(mesangialproliferativeglomerulonephritis,MsPGN)是根据光镜所见的一种病理形态学诊断的肾炎,是一组以弥漫性肾小球系膜细胞增生及不同程度系膜基质增多为主要特征的肾小球疾病。1977年世界卫生组织(WHO)正式将其列为一种原发性肾小球

系膜增生性肾小球肾炎实验室检查

  1.尿液检查常有明显异常,镜检可见肾小球源性血尿,尿中红细胞呈多形性改变,血尿发生率占70%~90%,常为镜下血尿。尿蛋白常为非选择性。尿中可出现C3和α2巨球蛋白等大分子蛋白。  2.血液检查肾功能早期大多正常,少数肾小球滤过率下降。血清IgG水平可轻度下降,极少数病例C4水平降低,部分病例血

简述系膜增生性肾小球肾炎的治疗方案

  治疗方法应根据临床表现结合病理特点选择使用,并须通过长期随访,调整治疗方案。一般治疗同其他肾脏疾病。  1、单纯血尿病理改变仅有轻度系膜增生,中度以下蛋白尿伴或不伴血尿,24h尿蛋白定量小于1.5g,病理改变为轻度或中度系膜增生的患者,轻者无须特殊治疗。对于尿蛋白定量1~2g/24h的患者,给予

系膜增生性肾小球肾炎的病理生理介绍

  系膜增生性肾炎的发病机制尚不明确,大体可分为免疫性发病机制及非免疫性发病机制两类。免疫性发病机制包括免疫反应导致免疫复合物及补体对系膜细胞的直接作用;炎症反应引发淋巴细胞激活、细胞因子异常分泌所致系膜细胞及细胞因子相互作用;非免疫性因素如高血压、高灌注状态及血小板功能异常,也可导致系膜的病理改变

系膜增生性肾小球肾炎的预防预后介绍

  预后:系膜增生性肾小球肾炎多数患者预后良好,少数病例自动缓解。因病理改变及临床表现不同,故病程相差较大。一般认为,单纯血尿患者较少进入肾功能衰竭;长期少量蛋白尿伴或不伴血尿患者,病程一般较长;大量蛋白尿患者出现肾功能衰竭的时间明显早于前两类患者;大量蛋白尿伴高血压患者,多数在数年内进入肾功能不全

系膜增生性肾小球肾炎的其他辅助检查

  1.光镜系膜细胞的弥漫性增生为系膜增生性肾小球肾炎的基系膜增生性肾小球肾炎理特点,可伴有系膜区的增宽。此病变通常影响80%以上的肾小球,多数肾小球病变程度相似,称为弥漫性增生。早期以系膜细胞数增多为主,在中等病变中每个系膜区的系膜细胞数为4~5个。而在较严重的病变中,每个系膜区的系膜细胞数多在5

系膜毛细血管性肾小球肾炎的概述

  系膜毛细血管性肾小球肾炎是以系膜细胞增生、系膜基质扩张、基底膜增厚及由于系膜细胞及基质向各面扩张至邻近的毛细血管壁内,导致光镜下毛细血管壁增厚和呈双轨状为病理特征的肾小球疾病。临床上常表现为肾病综合征伴血尿、高血压及肾功能损害,部分病人伴有持。其病理改变以肾小球基底膜及系膜为其基本病变部位。本病

系膜毛细血管性肾小球肾炎的治疗

  目前系膜毛细血管性肾小球肾炎尚未有有效治疗方法,现介绍几种可试用的方法:  (1)叶任高认为可用下述方案:潘生丁150~300mg/d加上阿斯匹林每日15mg/kg,分3次口服。无效者,可试用一次标准疗程的激素,待减量至维持量时,持续应用一个时期。  (2)McEnerg应用隔日口服强的松60m

系膜毛细血管性肾小球肾炎的概述

  系膜毛细血管性肾小球肾炎是以系膜细胞增生、系膜基质扩张、基底膜增厚及由于系膜细胞及基质向各面扩张至邻近的毛细血管壁内,导致光镜下毛细血管壁增厚和呈双轨状为病理特征的肾小球疾病。临床上常表现为肾病综合征伴血尿、高血压及肾功能损害,部分病人伴有持。其病理改变以肾小球基底膜及系膜为其基本病变部位。本病

系膜毛细血管性肾小球肾炎的诊断

  病患者几乎总有血尿,包括镜下或者肉眼血尿。蛋白尿可以比较轻微,约有30%表现为无症状性蛋白尿,但半数患者尿蛋白>3.5g/24h,90%以上患者蛋白尿选择性差。尿FDP和C3可升高。

系膜增生性肾小球肾炎有哪些并发症?

  1.感染系膜增生性肾小球肾炎表现为肾病综合征时,大量蛋白质丢失、营养不良、免疫功能紊乱及应用糖皮质激素治疗均可使机体抵抗力下降,诱发感染性疾病发生,且临床征象常不明显,虽有多种抗生素供选择,若治疗不及时或不彻底,仍易引起肾病综合征复发和病情加重,甚至导致病人死亡。  2.血栓、栓塞并发症由于血液

系膜毛细血管性肾小球肾炎的检查

  1、通过尿蛋白定性,尿沉渣镜检,可以初步判断是否有肾小球病变存在。  2、尿常规检查:尿色一般无异常,尿蛋白一般量不多,尿沉渣中白细胞增多(急性期常满布视野,慢性期于5个/高倍视野),有时可生白细胞管型。  3、尿细菌检查:当尿中含大量细菌时,因尿沉渣涂中作革兰染色检查,约90%可找到细菌。此法

系膜毛细血管性肾小球肾炎的鉴别

  (1)慢性肾炎急性发作:大多数慢性肾炎,往往隐匿起病,急性发作常继发于急性感染后,前驱期往往较短,1 ~2 日即出现水肿、少尿、氮质血症等症状,严重者尚可  能伴有贫血、高血压、肾功能持续不好转,平时可能伴有夜尿增多,尿比重常低或固定低比重尿。  (2)急进性肾炎:起病初与急性肾炎难鉴别;本病在

原代心肌细胞培养方法探讨

摘要 探讨培养Wister新生大鼠心肌细胞的可靠方法。采用心肌组织块差别消化结合化学纯化的培养方法,通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜、台盼篮、免疫细胞化学,鉴定心肌细胞生长情况及纯度。结果细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰;细胞成活率达94.6%;肌动蛋白(HHF35)经

原代细胞培养简介

  原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的

巨噬细胞原代培养方法步骤

1.实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 1ml(勿注入肠内)。 2.引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。 3.置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。 4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Ea

巨噬细胞原代培养方法步骤

1.实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 1ml(勿注入肠内)。 2.引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。 3.置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。 4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Ea

系膜毛细血管性肾小球肾炎的症状介绍

  约20%~30%患者可起病于上呼吸道感染之后,其临床表现及其特点为:  (1)约50%病人表现为明显的肾病综合征,约30%表现为无症状性蛋白尿,约20%~30%起始表现为急性肾炎综合征。  (2)无论上述何种综合征或无症状性蛋白尿,几乎都有蛋白尿和血尿,蛋白尿为非选择性,血尿常为持续性镜下血尿,