淋巴细胞转化试验(MTT)原理=材料和方法
(一)原理:四甲基偶氯唑盐(MTT)可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时,线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲臢,将结晶的甲臢溶解释放后,可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性,从而推知待测样品的水平。(二)材料:MTT、电子天平、PBS液、二甲基亚砜、无菌针头过滤器、细胞计数板、台盼兰、无菌操作台,CO2培养箱,酶标仪,-20℃冰箱。用称取50mg的MTT,溶于10ml后,终浓度为5mg/ml,过滤除菌,无菌EP管分装,-20℃避光保存。丝裂原:PHA、ConA、PWM或其他丝裂原(三)方法:1、脾细胞制备:(1)小鼠颈椎脱臼处死,75%乙醇浸泡3分钟,取出小鼠置于无菌纸上,左腹侧朝上;(2)在小鼠左腹侧中部剪开小口,撕开皮肤,暴露腹壁,可见红色长条状脾脏;(3)在脾脏下侧提起腹膜,剪开后上翻,暴露脾脏,用镊子提起脾脏,眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏。放入盛有5ml Hanks液的培养......阅读全文
淋巴细胞转化试验有哪些不同的检测方法
工具/原料 RPMI1640 培养液 Hank's 液 刀豆蛋白A(Concanvalin A, ConA),用RPMI1640 液配成1mg/ml,分装小瓶,冷冻保存 MTT 1mg/ml 2.5%碘酒、75%酒精 方法/步骤 小鼠脾细胞悬液的制备: 取一个灭菌的平皿,
免疫学实验PHA淋巴细胞转化试验介绍
PHA淋巴细胞转化试验介绍: PHA淋巴细胞转化试验 是 T淋巴细胞与有丝分裂原在体外共同培养时,受到后者的刺激可发生形态学和生物化学的变化,部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细胞,并进行有丝分裂的试验方法。 PHA淋巴细胞转化试验正常值: 计数淋巴细胞200个,识别淋巴母细
临床化学检查方法介绍PHA淋巴细胞转化试验介绍
PHA淋巴细胞转化试验介绍: PHA淋巴细胞转化试验 是 T淋巴细胞与有丝分裂原在体外共同培养时,受到后者的刺激可发生形态学和生物化学的变化,部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细胞,并进行有丝分裂的试验方法。PHA淋巴细胞转化试验正常值: 计数淋巴细胞200个,识别淋巴母细胞(超过正常淋巴细胞2-4
淋巴细胞转化试验的基本原理和应用
淋巴细胞转化试验是检测细胞免疫功能的经典试验。基本原理是采用T淋巴细胞敏感 的刺激物在体外刺激T淋巴细胞,T淋巴细胞受到刺激后可发生形态学和生物化学的变化,部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细 胞,并进行有丝分裂。用形态学法或放射性 核素法检测T细胞的增殖程度,并以此评定相应的细胞功能。
T淋巴细胞转化试验的临床意义是什么
1、T淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原刺激,可转化成为体积较大的母细胞。计数转化的细胞可反映机体的细胞免功能。 2、细胞免疫功能缺陷或低下者,其转化率可明显低于正常,如运动失调性毛细血管扩张症。此外,恶性肿瘤、霍奇金病、淋巴瘤、淋巴肉芽肿、重症真菌感染、重症结核转化率可低于正常值,T淋巴细
淋巴细胞转化实验步骤
实验步骤采血:需要在严格无菌条件下采血。肝素抗凝,室温保存,24hr-72hr转化效率高。也有保存更长时间,采血后不要将血液置冰箱中,长途运输也不要冷藏。分离淋巴细胞:采集血液4-5mL,与2mL1640(含1%双抗)在离心管内混合,然后缓慢沿管壁注入淋巴分离液(已37℃预热),3000rpm离心
T淋巴细胞转化实验
实验方法原理 T 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一
淋巴细胞转化实验2
同位素掺入法淋转试验,较之形态学方法更为客观、准确,重复性也好,但需一定设备条件。[实验材料] 1.1640 培养液 2.ConA :根据ConA 的纯度配制成最适浓度,一般为5-10μg/ml 。 3.脂溶形闪烁液: POPOP(1,4 双(5-苯基恶唑基-2)苯
T淋巴细胞转化实验
实验方法原理 T 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一
T淋巴细胞转化实验
实验方法原理T 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。 淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT 法和同位素法三种。
淋巴细胞转化实验1
[实验原理] T淋巴细胞表面具有植物血凝素(PHA)和刀豆蛋白(ConA)等非特异性有丝分裂原受体,在体内或体外遇到有丝分裂原刺激后,可转化为淋巴母细胞,依其细胞转化程度可测定T细胞的应答功能,称为淋巴细胞转化试验。 淋巴母细胞的主要特点: (1)形态学改变:细胞体积明显增大
PHA淋巴细胞转化试验的正常值及临床意义
正常值 计数淋巴细胞200个,识别淋巴母细胞(超过正常淋巴细胞2-4倍,核膜清晰,核染质疏松而成细网状,核仁明显,胞浆丰富,呈嗜碱性)、过渡型淋巴细胞(体积变化不大,仅为上述明显核变化)、小淋巴细胞(体积稍大于红细胞,核染质致密,无核仁),统计其转化率。皮肤科转化率正常值大于58%。 临床意
PHA淋巴细胞转化试验的注意事项及检查过程
注意事项 1.培养基成分对转化率影响较大,注意其有效期。 2.小牛血清用前需灭活。 3.培养时要保证有足够的气体,一般10ml培养瓶内液体总量不要超过2ml。 4.PHA剂量过大对细胞有毒性,太小不足以刺激淋巴细胞转化,试验前应先测定PHA转化反应剂量。 5.实验中要严格无菌操作,防止
PHA淋巴细胞转化试验的临床意义及注意事项
临床意义 PHA淋巴细胞转化率下降,是细胞免疫功能降低的反应。此项检查,皮肤科多用于疾病分型(如麻风)、病情判断(如皮肤恶性肿瘤)、药物疗效观察,以及某些免疫缺陷性和变态反应性皮肤病的研究。 异常结果: 免疫功能降低引发的各种症状 需要检查的人群: 疑似麻风、皮肤恶性肿瘤症状的病人 注意
T淋巴细胞转化试验的临床意义及参考值
参考值 形态学检测法:60.1%±7.6%。 3H-TdR渗入法:0~2%。 刺激指数(SI)>2为有意义。 临床意义 1、T淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原刺激,可转化成为体积较大的母细胞。计数转化的细胞可反映机体的细胞免功能。 2、细胞免疫功能缺陷或低下者,其转化率可明显低于正常
T淋巴细胞转化试验的临床意义及注意事项
临床意义 1、T淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原刺激,可转化成为体积较大的母细胞。计数转化的细胞可反映机体的细胞免功能。 2、细胞免疫功能缺陷或低下者,其转化率可明显低于正常,如运动失调性毛细血管扩张症。此外,恶性肿瘤、霍奇金病、淋巴瘤、淋巴肉芽肿、重症真菌感染、重症结核转化率可低于正常
EB病毒转化成淋巴细胞
实验材料全血试剂、试剂盒刀豆凝集素A仪器、耗材RPMI 生长培养基离心管实验步骤1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生长培养基。生长培养基(RPMI1640 800 ml,FBS 200 ml,2 mmol/L-谷氨酰胺,5 μg/ml 两性霉素,50 μg/ml 庆大霉素)2.
EB病毒转化成淋巴细胞
实验材料 全血 试剂、试剂盒 刀豆凝集素A 仪器、耗材
什么是淋巴细胞转化率?
淋巴细胞转化率 T淋巴细胞表面有多种受体,在体外培养中加入特异性抗原或非特异性促有丝分裂原的刺激下,细胞代谢和形态可发生一系列变化,如能转化成体积较大的原淋巴细胞。转化细胞数量可反映机体细胞免疫功能,测定T淋巴细胞的应答能力,诊断细胞免疫缺陷病。 正常值 0.60-0.75。(形态学法)
淋巴细胞转化率有哪些症状
椎体结核,鼻部结核,膀胱结核,结核杆菌血行播散
淋巴细胞转化的形态学改变
淋巴细胞转化率 T淋巴细胞表面有多种受体,在体外培养中加入特异性抗原或非特异性促有丝分裂原的刺激下,细胞代谢和形态可发生一系列变化,如能转化成体积较大的原淋巴细胞。转化细胞数量可反映机体细胞免疫功能,测定T淋巴细胞的应答能力,诊断...
EB病毒转化成淋巴细胞实验
实验概要本实验介绍了EB病毒转化为淋巴细胞的方法。实验材料1. 感染性EB病毒通常取自绢猴细胞系B95-8的限制培养基。该细胞系源于EB病毒感染的绢猴外周淋巴细胞,产生高滴度感染病毒。2. 全血实验步骤1. 混合10ml全血和10ml RPMI 1640 生长培养基生长培养基 RPMI 1640 8
淋巴细胞转化率的注意事项
不合宜人群:一般无特殊人群 检查前禁忌:一定要配合医生把姓名写正确,工整,避免同名或相类似名混淆带来不便。注意了这些,抽血会更方便、更迅速,能更好地为自己节约诊断时间。 检查时要求:不要穿袖口过小、过紧的衣服,以避免在抽血时衣袖卷不上来或抽血后衣袖过紧,引起手臂血管血肿。不同的化验项目要问清
淋巴细胞转化率的检查过程
传统的检测淋巴细胞转化率的方法是将全血或所分离的淋巴细胞与促有丝分裂素一起培养一定的时间,观察淋胞巴细胞转化为母细胞的比例,从而确定淋巴细胞的转化率。
淋巴细胞转化率有哪些相关疾病
幼年型慢性粒细胞白血病,毛细胞白血病,衣原体淋巴肉芽肿,变应性口炎
T淋巴细胞转化实验的基本原理
T淋巴细胞转化实验的基本原理T细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.T 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原
T淋巴细胞转化实验的基本原理
T细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.T 细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺
T淋巴细胞转化实验的基本原理
T淋巴细胞转化实验的基本原理T细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出现细胞体积增大,代谢旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化.淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一.淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT 法
免疫学实验淋巴细胞转化率介绍
淋巴细胞转化率介绍: T淋巴细胞表面有多种受体,在体外培养中加入特异性抗原或非特异性促有丝分裂原的刺激下,细胞代谢和形态可发生一系列变化,如能转化成体积较大的原淋巴细胞。转化细胞数量可反映机体细胞免疫功能,测定T淋巴细胞的应答能力,诊断细胞免疫缺陷病。 淋巴细胞转化率正常值:
淋巴细胞转化形态学检查法
实验概要本实验对淋巴细胞的转化进行了形态学检查。主要试剂1. 植物血凝素 目前国内已有成品出售(广州医药工业研究所),可根据需要,作适当稀释后使用。一般为每毫升培养液加入PHA 50~75μg。也可自制,即从广东食用红肾豆(鸡子豆)或东北菜豆中提取,经效价滴定后,按每毫升培养液加入0.1m