酶联免疫吸附试验C1q测定法
实验概要本实验介绍了酶联免疫吸附试验C1q测定法的操作流程。包被于塑料板上的固相凝聚IgG与酶联C1q的结合受标本中免疫复合物的抑制,是一种竞争性抑制试验。为避免标本中内源C1q的干扰,应预先用IgG免疫吸附剂将其除去。主要试剂1. 免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取纤维素(5%,pH值10.5)与溴化氰一起室温反应10min,用0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液(pH值8.0)充分洗涤。再与IgG一起于4℃下作用18h(20ml缓冲液中含3g纤维素和100mg IgG)。制备物用27mol/L甘氨酸缓冲液(pH值8.0)配成20%(W/V)悬液,贮于4℃。2. 酶联C1q用戊二醛法将辣根过氧化物酶标记C1q,再经超滤AmiconXM200滤膜)分离贮于-20℃。3. 其他试剂0.02mol/L TrisHCl缓冲液(pH值9.0);0.2mol/L TrisHCl缓冲液(pH 值7.4),以及含0.05%Tween20的......阅读全文
酶联免疫吸附试验C1q测定法
实验概要本实验介绍了酶联免疫吸附试验C1q测定法的操作流程。包被于塑料板上的固相凝聚IgG与酶联C1q的结合受标本中免疫复合物的抑制,是一种竞争性抑制试验。为避免标本中内源C1q的干扰,应预先用IgG免疫吸附剂将其除去。主要试剂1. 免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取纤维素(5%,pH值10.
酶联免疫吸附试验C1q测定法
实验概要本实验介绍了酶联免疫吸附试验C1q测定法的操作流程。包被于塑料板上的固相凝聚IgG与酶联C1q的结合受标本中免疫复合物的抑制,是一种竞争性抑制试验。为避免标本中内源C1q的干扰,应预先用IgG免疫吸附剂将其除去。主要试剂1. 免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取纤维素(5%,pH值10.
酶联免疫吸附试验(ELISA)C1q测定法
1 原理包被于塑料板上的固相凝聚IgG与酶联C1q的结合受标本中免疫复合物的抑制,是一种竞争性抑制试验。为避免标本中内源C1q的干扰,应预先用IgG免疫吸附剂将其除去。 2 材料 (1) 聚苯乙烯反应板,酶联免疫检测仪。 (2) 免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取
酶联免疫吸附测定法和中和抗体试验的区别
ELISA有的用于检测中和抗体的,但大部分包被的抗原都不是用于检测中和抗体,但和机体的保护力有关;中和抗体试验主要是检中和抗体的,两者方法也不一样。
C1q放射免疫测定法
实验概要本法系将同位素标记的C1q与被检血清作用,然后用聚乙二醇(MW6 000)沉淀免疫复合物与标记C1q的结合物,通过测定沉淀物中的放射强度,再计算与对照的放射强度之比,作为免疫复合物的相对含量。主要试剂CFD稀释液(即VBS),10%三氯醋酸,C1q溶液主要设备PEG(MW6 000),离心机
C1q放射免疫测定法
实验概要本法系将同位素标记的C1q与被检血清作用,然后用聚乙二醇(MW6 000)沉淀免疫复合物与标记C1q的结合物,通过测定沉淀物中的放射强度,再计算与对照的放射强度之比,作为免疫复合物的相对含量。主要试剂CFD稀释液(即VBS),10%三氯醋酸,C1q溶液主要设备PEG(MW6 000),离心机
酶联免疫吸附测定法的概述
酶联免疫测定方法是以抗原和抗体分子为测定 靶标的方法,亦是目前最为常用的实验室诊断方法之一。 从理论上说,一种 生物或生理活性物质,只要有办法得到其特异的抗体,就可以建立这种物质的酶联免疫测定方法。在以前看来一些难以进行质量测定的微量生物活性物质,如受体、 细胞因子以及酶等均可使用酶联免疫测定
酶联免疫吸附测定法的概述
酶联免疫测定方法是以抗原和抗体分子为测定 靶标的方法,亦是目前最为常用的实验室诊断方法之一。 从理论上说,一种 生物或生理活性物质,只要有办法得到其特异的抗体,就可以建立这种物质的酶联免疫测定方法。在以前看来一些难以进行质量测定的微量生物活性物质,如受体、 细胞因子以及酶等均可使用酶联免疫测定
酶联免疫吸附测定法呕吐毒素
呕吐毒素的介绍脱氧雪腐镰刀菌烯醇,又称为呕吐毒素,属单端孢霉烯族化合物。该毒素是F.镰刀菌霉(主要是 F.graminearum h 和 F.culmorum)的二级代谢产物,化学名为3α,3β,7α,15-四羟基镳草镰刀菌-9-烯-8-酮。这类真菌大多在低温、潮湿和收割季节,在谷物庄稼中慢慢生长。
酶联免疫吸附测定法的试剂介绍
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
酶联免疫吸附测定法ELISA的应用
ELISA应用的范围很广,而且正在不断地扩大,原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原,可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。酶免疫试验(EIA)结合 光学显微镜或 电子显微镜可进行抗原定位与结构的研究,用酶标记抗原或抗体结合免疫扩散及免疫电泳可提高试验的敏感性。在实际应用方面可作疾病的临
酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immune sorbent aay, ELISA)是Engvall和Van weemen于1971年提出的。该法是以固相载体吸附技术和免疫酶技术相结合建立的一种检测方法,其操作简便,无需特殊设备,并具有高度的敏感性和准确性,所以受到大家的广泛重视,
酶联免疫吸附测定法的注意事项
⒈ 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。⒉ 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:⑴ 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯
酶联免疫吸附试验简介
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) :是 酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使 酶标记的 抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有 双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大
酶联免疫吸附试验(ELISA)
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) :是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后
酶联免疫吸附测定法的基本原理
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合
酶联免疫吸附剂测定法的技术特点
酶联免疫吸附剂测定法,简称酶联免疫法,或者ELISA法。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。
酶联免疫吸附剂测定法的检测步骤
ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳
酶联免疫吸附剂测定法的注意事项
⒈ 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。⒉ 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:⑴ 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯
酶联免疫吸附测定法测定T2毒素
测定小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附法有间接竞争性酶联免疫吸附测定法和直接竞争性酶联免疫吸附测定法。(1)间接法①试剂a.化学试剂:T-2毒素,四甲基联苯胺,甲醇,石油醚,三氯甲烷,无水乙醇,乙酸乙酯,二甲基甲酰胺,吐温-20,30%过氧化氢等。b.缓冲溶液包被缓冲液:50mmol/L 碳酸钠-碳酸氢
酶联免疫吸附剂测定法的研究进展
亲和素是一种糖蛋白,一分子亲和素可以与四个生物素小分子发生专一亲和作用,类似抗原与抗体亲和。它们之间的作用力是已知最强的非共价作用。80年代后,随着生物素-亲合素系统(BAS)作用被发现,这一亲和作用被结合应用到ELISA技术上,大大提高了后者反应的灵敏性与专一性。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共
酶联免疫吸附剂测定法的常用的试剂
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
使用酶联免疫吸附测定法分析赭曲霉毒素
赭曲毒素是赭色曲霉属和几种青霉属真菌产生的一种毒素,包括 A,B,C 等7种结构类似的化合物,其中以赭曲毒素 A 毒性最大。下表列出了世界各国对各种商品中赭曲毒素 A 存在情况的研究结果。用赭曲霉毒素 A 作为半抗原,与牛血清白蛋白(BSA)或人γ球蛋白结合,制成复合抗原,免疫动物,产生特异性的抗血
酶联免疫吸附试验的简介
自从Engvall和Perlman(1971)首次报道建立酶联 免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA)以来,由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点,使其得到迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于 特异性不够高而妨碍了
什么是酶联免疫吸附试验?
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) :是酶免疫测定技术中应用最广的技术。 基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗
酶联免疫吸附试验的原理
ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。 因此,可通过底物的
酶联免疫吸附试验如何应用
广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面,ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。
酶联免疫吸附试验的原理
ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种 酶标记抗体可与吸附在固相 载体上的抗原或抗体发生 特异性结合。滴加 底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现 颜色反应。因此,可通过
什么是酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) :是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法,前者用于
什么是酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) :是 酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使 酶标记的 抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有 双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大