一种快速简便的进行线粒体膜电位检测的方法

背景简介: 线粒体是细胞新陈代谢的主要细胞器,起着“能量工厂”的作用。线粒体内部通过一系列的氧化反应去氧化丙酮酸和NADH,以产生储存能量的ATP分子。而这一系列反应的驱动力是线粒体膜上电化学质子的梯度差,也叫做膜电位。由于这种质子的梯度差为磷酸化和氧化反应提供了“驱动力”,因此它也被当作一个衡量细胞的整体健康状态的指标,同时也可作为研究环境毒性对细胞新陈代谢影响的一个定量监测的指标。 那么该如何来监测线粒体的膜电位呢? 今天介绍一个简单的方法,即Moxi GO II新一代流式细胞分析仪结合TMRE染料法。 TMRE(四甲基罗丹明高氯酸乙酯)是一种线粒体特异的具有红橙色荧光(540/595nm Ex/Em)的阳离子染料,具有膜通透性,会在带负电荷的线粒体膜中迅速积累。线粒体的膜电位越高,TMRE的积累量越多,荧光值越高,因此可以通过检测TMRE荧光值的强度来定量地评估线粒体膜电位,从而评估细胞的健康状态。 在该应用......阅读全文

细胞凋亡检测实验——线粒体膜势能的检测

实验方法原理线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA 断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt 崩溃,则细胞凋亡不可逆转。 线粒体跨膜电位的存在,使

细胞凋亡检测操作流程三JC1检测凋亡细胞线粒体膜电...

细胞凋亡检测操作流程三--JC-1检测凋亡细胞线粒体膜电位改变凋亡检测操作流程  三、JC-1检测凋亡细胞线粒体膜电位改变BD™ MitoScreen (JC-1)线粒体膜电位检测试剂盒(551302):组分描述JC-1(染料)4瓶,每瓶用于25个样本。冻干粉,使用前稀释至储存液(Stock Sol

如何提取细胞线粒体

提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案:心肌组织切碎后在4 ℃介质(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清,以9000 g离心20 min 后留沉淀,重新悬浮后以9000 g再离心20 min,弃

线粒体肿胀检测方法

Estimating Mitochondrial Mass,可以用于线粒体肿胀的检测Accurate measurements of mitochondrial mass require a probe that will accumulate in mitochondria regardless

关于细胞凋亡的早期检测—-线粒体膜电位变化的检测介绍

  线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏

如何用流式细胞仪检测线粒体数量

可以参考Mattiasson, G. (2004). "Flow cytometric analysis of isolated liver mitochondria to detect changes relevant to cell death." Cytometry A 60(2): 145-

细胞化学词汇线粒体DNA

中文名称:线粒体DNA外文名称:Mitochondrial DNA,mtDNA定       义:线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。 

细胞化学基础线粒体DNA

线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。它们携带着自己的DNA——mtDNA,而这些基因的突变能引起线粒体疾病。虽然疾病症状是多变的,但大脑、肌肉和心脏

细胞器的线粒体

  线粒体形状为棒状,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,具有双层膜,内层膜向内折叠形成“嵴”(作用是可以扩大酶的附着位点)。线粒体又称"动力车间",细胞生命活动所需的能量,大约95%来自线粒体,含核糖体,可产生DNA和RNA,能相对独立遗传。存在于所有真核生物细胞中(厌氧菌及哺乳动物成熟的红细胞除外),

植物细胞线粒体DNA的提取

实验方法原理 分离线粒体DNA和叶绿体DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分离完整的细胞器,然后从细胞器中提取DNA。要获得高纯度的细胞器DNA,关键是要把所要的细胞器与其他亚细胞结构分离开来,这可以通过差速离心或梯度离心来完成。完整的细胞器经裂解后,可以通过CsCl离心或酚-氯仿抽提获得DNA。

细胞器中的线粒体

  细胞中还有一些细胞器,它们具有不同的结构,执行着不同的功能,共同完成细胞的生命活动。这些细胞器的结构需用电子显微镜观察。在电镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构。  线粒体(Mitochondria/Mitochonrion)线粒体是一些线状、小杆状或颗粒状的结构,在活细胞中可用詹纳斯绿(Janu

母亲线粒体使患儿细胞“重生”

  来自母亲的“礼物”可能会让线粒体有缺陷的患儿细胞重新恢复活力。  一个研究小组正在测试一种方法,将患儿的血细胞浸泡在母亲健康线粒体的“培养基”中,然后重新注入患儿体内。早期迹象表明,这种干预是安全的,可能会改善儿童的健康和发育,研究人员正在计划后续的临床试验。该研究12月21日发表于《科学-转化

如何提取细胞中的线粒体

看你的目的,是要分离线粒体蛋白(不需要线粒体有活性),还是要做线粒体功能?但是方法一般是把细胞磨碎(有特殊的匀浆器),然后密度梯度离心。如果需要纯度很高,那还要超速离心。需要提醒的就是,这样提取线粒体需要大量,大量的细胞。说明书上说,如Hela,要1-2ml。。。。就是说细胞离下来,得有1-2个ml

植物细胞线粒体DNA的提取

实验方法原理分离线粒体DNA和叶绿体DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分离完整的细胞器,然后从细胞器中提取DNA。要获得高纯度的细胞器DNA,关键是要把所要的细胞器与其他亚细胞结构分离开来,这可以通过差速离心或梯度离心来完成。完整的细胞器经裂解后,可以通过CsCl离心或酚-氯仿抽提获得DNA。在

细胞凋亡线粒体通路相关介绍

线粒体通路,即通过线粒体释放凋亡酶激活因子激活 Caspase。线粒体是细胞生命活动控制中心,它不仅是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心,而且是细胞凋亡调控中心。此通路由含BH3 结构域的Bcl-2 家族成员(Bid、 Bad、 Bim、 Harikari 、Noxa等)与另外的结合在线粒体外膜面或存在于

线粒体如何促进肿瘤细胞扩散?

  作为细胞的动力室,线粒体对于每一个生物体都十分关键,因为它们能够产生能量,同时也控制生存,但是,它们在癌症中的功能仍然不完全清楚。这是特别重要的,因为,在一般情况下,肿瘤细胞增殖速度超过正常组织,科学家们推测,保存线粒体功能的机制,是支持肿瘤扩张的原因。  现在,美国Wistar研究所的科学家们

PNAS:细胞线粒体之间的交流

  来自北京大学分子医学研究所,北京大学—清华大学生命科学联合中心等处的研究人员发表了题为“Kissing and nanotunneling mediate intermitochondrial communication in the heart”的文章,报道了细胞线粒体通讯研究的最新进

线粒体分离实验—从组织培养细胞中分离线粒体

实验材料细胞试剂、试剂盒RSBMS 缓冲液仪器、耗材Dounce 匀浆器实验步骤1. 用 11 ml 冰上预冷过的 RSB 重新悬浮细胞,转移到一个 15 ml 的 Dounce 匀浆器中RSB(使组织培养细胞膨胀的低渗缓冲液)10 mmol/L NaCl2.5 mol/L MgCl210 mmol

胚胎线粒体功能检测重要么

  随着三代试管婴儿在我国的不断普及,越来越多的人开始认识这个新技术,很多“久经失败”的生育困难夫妇也开始尝试这种新的试管婴儿技术,我们常说的PGS,中文名字叫“胚胎植入前染色体病筛查”,它是在胚胎移植入子宫前,对胚胎进行全面的染色体检查,然后挑选染色体正常的胚胎植入子宫。PGS技术在国内外很多生殖

线粒体膜电位变化的检测

在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正

线粒体应激调控干细胞命运的“线粒体遇见”新模式被发现

  中国科学院广州生物医药与健康研究院刘兴国团队与广州医科大学应仲富团队等发现,线粒体未折叠蛋白反应(UPRmt)在多能干细胞命运中通过c-Jun调控组蛋白乙酰化,进而影响间充质-上皮转化(MET)的新模式(mtMET)。这一模式的缩写MET是“遇见”的过去式,因此科研人员将这一新模式称为“线粒体遇

线粒体融合蛋白2决定细胞生死

  有机体的每个细胞中都有一种传感器,能检测自身“内部”环境是否健康。这种“报警器”存在于内质网(ER)中,能感知细胞所受的压力,引发修复反应或让细胞走向死亡。据物理学家组织网近日报道,西班牙巴塞罗那生物医学研究所(IRB)科学家最近发现,线粒体融合蛋白2(Mfn2)对于正确检测细胞压力水平起着关键

研究发现线粒体可充当细胞“哨兵”

   线粒体作为细胞的能量工厂,有着双重生命。在受到攻击的细胞中,线粒体可以充当哨兵,加速细胞核深处的修复装置,保护细胞的主要遗传物质。  线粒体是细胞的能量制造结构,含有与细胞核不同的DNA。为了探索线粒体如何与细胞核沟通,美国索尔克生物研究所的Gerald Shadel和同事给细胞注射了破坏DN

细胞化学基础线粒体DNA组成结构

研究人员发明了转换卵细胞基因材料的方法,用拥有健康线粒体的卵细胞取代携带错误线粒体DNA的卵细胞。结果是,胚胎会携带来自母亲和父亲的核DNA,以及卵细胞捐献者的线粒体DNA。mtDNA虽能合成蛋白质,但其种类十分有限。迄今已知,mtDNA编码的RNA和多肽有:线粒体核糖体中2种rRNA(12S及16

关于肝细胞的线粒体的介绍

  肝细胞的线粒体很多,每个细胞大约有1000个左右,遍布于胞质内。肝小叶不同部位肝细胞内线粒体的大小和形态不完全一致,在正常生理条件下,多为圆形和卵圆形,直径0.4-0.8μm。线粒体的共同基本形态结构特征是外被双层界膜--外界膜和内界膜,内界膜向线粒体内部伸展转折,形成许多嵴。内界膜将线粒体分隔

如何检测线粒体内的ROS

活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知

关于线粒体膜电位变化的检测

  在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色

同种异体线粒体细胞疗法!线粒体疾病患者创新疗法!

  此次合作,将为线粒体疾病患者,开发通用型、同种异体细胞治疗方案。  线粒体  安斯泰来(Astellas)与Minovia Therapeutics近日宣布一项全球战略合作及许可协议,研究、开发、商业化新型细胞疗法项目,用于治疗由线粒体功能故障引起的疾病。Minovia是一家临床阶段的公司,也是

人线粒体NADH氧化酶酶联免疫分析(ELISA)

人线粒体NADH氧化酶酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中线粒体NADH氧化酶的活性。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人线粒体NADH氧化酶水平。用纯化的人线粒体NADH氧化酶抗体包被微孔板,制成固相