多肽分析过程中常见问题解读
小分子越来越难做，大分子发展很强势，似乎成为了近年来药物研发市场的重要表现之一，“多肽”类药物正是其中的一大热门。目前多肽药物的质量监管日趋渐严，在这种趋势下，寻找能满足更高分离度，灵敏度的分析方法就显得尤为重要。很多小伙伴在在开发多肽类样品分析方法中总是遇到各种的问题，无比烦恼。这里小编就总结了一些在多肽方法开发中常见的问题分享给各位小伙伴。 1、多肽含量与多肽纯度有什么区别？一条多肽产品中除了多肽本身还包括生产过程中带入的水份及有机盐分等杂质，多肽纯度仅指多肽本身所含肽产品的含量及杂质的含量，不包括水份等杂质；而多肽含量则是指目标多肽在产品中的净含量，一般以N元素分析或氨基酸分子的方法来检测；因此一条多肽即使纯度达到99%，因为产品中还包含水份及有机盐分等，它的含量可能也只有70-80%。 2、如何溶解多肽？多数多肽都可以用超纯水溶解，对于一些难溶的多肽，先要分析其氨基酸序列，对于酸性多肽，可先以小量碱性......阅读全文
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十）
反相高效液相色谱和质谱（MS）的联用为蛋白质/多肽分析提供了强大的工具。20世纪80年代，约翰·贝内特·芬恩和他的同事们开发了电喷雾离子源，使质谱与反相高效液相色谱得以联用。采用液相色谱-质谱联用的好处包括：质谱是非常灵敏的检测技术。 质谱可以提供所分离多肽/蛋白质的分子量。 质谱可利用分子
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（一）
蛋白质组学蛋白质组学是鉴定和定量细胞、组织或生物体蛋白质的科学，目的是了解生物学变化和疾病状态，开发疾病的生物标记和治疗药物的靶点。如果将一个基础蛋白的各个修饰蛋白算作一个蛋白，那么哺乳动物细胞含多达3~4万个蛋白。当计算各个修饰后的蛋白时，蛋白质的数量远远超过了10万。细胞内不同蛋白质的丰度或浓度
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十六）
选择合适的色谱柱微粒。通过与柱内填充微粒疏水表面的相互作用实现蛋白质与多肽的分离。柱内填充粒通常以硅胶为基础，这是因为硅胶的稳定性高，能够在大多数溶剂条件下（除了pH大于6.5的情况）保持稳定，此外，硅胶可以形成各种大小的具有不同直径的多孔球形颗粒。硅胶纯度。高效液相色谱柱所用硅胶填料的纯度对分离性
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（二）
色谱分析色谱技术已发展成一种强大的分离技术，能够分离大量蛋白质和多肽。但任何一种单独的色谱技术仍然只能分离出一小段蛋白质。因此，多种色谱技术的结合使用已成为蛋白质组分析中蛋白质分离的一种普遍方法。二维色谱在长期的蛋白质纯化模式的基础上，John Yates和同事开发了一种名为多维蛋白质鉴定技术（Mu
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（三）
蛋白质纯化RP-HPLC 是一种有效的蛋白质/多肽纯化工具。通过 RP-HPLC 法可以从杂质中分离目标蛋白/多肽，采集到的片段可用于进一步研究，以及借助正交分析技术的分析，甚至可作为治疗药物。在蛋白质/多肽分析过程中，色谱条件优化的目标是优化分辨率和保留时间。制备色谱法分离蛋白质/多肽时，色谱条件
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（六）
蛋白质在高温或高pH值下会降解。在胁迫条件下，最有可能发生的化学降解是酰胺侧链上的天冬酰胺转变为天冬氨酸或异天冬氨酸（图37)。天冬酰胺脱去酰氨基时，许多蛋白都会失去生物活性，但也有部分蛋白的生物活性不受影响。即使脱酰胺作用不造成生物活性的减弱，脱酰胺作用也是蛋白接触不利条件的指示。特定天冬酰胺残基
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十八）
引言反相HPLC已成为分离和分析蛋白质和多肽的重要工具。它在生物技术行业中被广泛应用于蛋白质类治疗产品的表征，以及这些产品和杂质的鉴定。在通过质谱鉴定蛋白质之前，反相HPLC在从消化后的蛋白质组中分离多肽方面有着至关重要的作用。它也被用于探索性研究中多种蛋白质和多肽的纯化，以及蛋白类治疗药物的大规模
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（四）
柱内径由于样品容量很低，纯化过程很少使用小孔柱（内径小于2mm）。小规模实验室纯化采用细孔柱（内径约2mm）和分析柱（4.6 mm内径）。这种小规模制备分离的色谱条件通常与分析分离的色谱条件相同。需要大量蛋白质/多肽时，采用10mm和22mm内径的柱子。1 mg蛋白质或多肽的纯化可采用10 mm柱子
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十一）
HPLC-MS 联用的两个重要因素是电喷射接口的最佳流速及三氟乙酸对肽电离的影响 基本电喷雾接口的信号在5~10μL/min的流速区间上迅速下降（图28）。这与采用标准分析型HPLC柱的流速不相容。目前，商用电喷雾提供一种高剪切流氮气辅助的电喷雾（气流辅助电喷雾），它将电喷雾的最佳流速区间提升到了2
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（九）
胰蛋白酶水解分析。蛋白质水解产生的肽段利用反相高效液相色谱分析，流动相采用含TFA体系（参见第15-17页），以起始浓度约5%的乙腈梯度洗脱（乙腈起始浓度低于5%可能导致较早洗脱出肽的色谱的不可重现性），乙腈浓度逐渐升至70%（参见图31）。梯度洗脱的时间取决于待水解蛋白的大小。大分子蛋白比小分子蛋
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十二）
蛋白质/多肽液相分析中的流动相选择有机溶剂可将吸附在疏水界面的蛋白质洗脱（图14）。在梯度洗脱期间，当有机溶剂量达到针对每一蛋白质的特定浓度时，蛋白质就会从疏水界面上解吸，继续顺着柱向下，从而从柱中洗脱。图14. 当有机改性剂的浓度达到特定值时，蛋白质从疏水界面洗脱。乙腈。在多肽的反相色谱分离时最常
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十七）
选择分离表面。硅胶表面改性所用的化学过程允许多种有机基团附着在硅胶表面。最常见的改性是键合一条十八碳线性脂肪链，形成“C18”柱或ODS柱（图10A）。如图所示，有机氯硅烷与大多数硅烷醇基反应，但仍有部分不反应，这会在硅胶表面形成一层较厚的碳氢化合物层。蛋白质和多肽可以吸附到该碳氢化合物层。C18柱
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十五）
其它离子对试剂。尽管目前为止TFA仍是最常用的离子对试剂，但蛋白质/多肽分离有时会采用磷酸和七氟丁酸（HFBA）等其它试剂。 如图18所示，一些情况下，磷酸可分离一些TFA无法分离的多肽。通常磷酸盐使用浓度约为20-30 mM，pH为2~2.5。此外，磷酸盐缓冲液对一些蛋白质的分离效果要优于TFA。
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南（十四）
蛋白质/多肽液相分析中的流动相选择有机溶剂可将吸附在疏水界面的蛋白质洗脱（图14）。在梯度洗脱期间，当有机溶剂量达到针对每一蛋白质的特定浓度时，蛋白质就会从疏水界面上解吸，继续顺着柱向下，从而从柱中洗脱。 图14. 当有机改性剂的浓度达到特定值时，蛋白质从疏水界面洗脱。乙腈。在多肽的反相色谱分离时最
新疆植物所芹菜籽多肽的分离分析及活性筛选研究
近年来，多肽的研究逐渐成为人们关注的热点并不断发展为独立的学科。由于植物种子富集大量具有活性的多种蛋白质和多肽，因此它已成为多肽的重要来源之一。 中科院新疆理化技术研究所新疆植物资源化学重点实验室科研人员以生物活性为导向，对维吾尔医常用药材芹菜籽中多肽成分进行系统提取分离、纯
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析2
（二）乳过氧化物酶法（LPO） 本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。 1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。 2．方法
人C多肽（CP）分析检测ELISA试剂盒使用说明
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本C多肽（CP）含量。试验原理：CP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将CP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶
蛋白质与多肽激素的放射免疫分析3
（四）磁性分离法 1975年，Hersh报道了用磁化分离技术分离血清狄高辛放免测定的B、F后，受到了广泛的重视。近年来国内外许多学者对磁化颗粒的制备进行了系统地研究，应用于B与F的分离，并取得了引人注目的进展，使放免的B、F分离不再使用离心，缩短了放免操作时间，便于放免自动化测量。磁性分离的具体
凝胶色谱柱适用于分析分离蛋白和多肽类样品
凝胶色谱柱专为合成高分子在高温条件下的GPC分离而设计。该填料为高硬度且经过表面修饰的硅胶颗粒，可解决有机聚合填料如PS/DVB等在有机溶剂中遇高温溶胀的难题。在有机溶剂中可在高温度条件下保持高度稳定。此外，它还具有低的传质阻力，从而可确保了分离中的高的分离效率。凝胶色谱柱的填料是亲水而刚性，多孔球
多肽色谱仪分类
多肽色谱仪分类有多种。 1、按分离目的可分：实验室多肽色谱仪和工业多肽色谱仪。 2、按色谱柱形状可分：多肽填充柱色谱仪和多肽毛细管色谱仪。 3、按功能可分：分析型多肽色谱仪和制备型多肽色谱仪。 4、按洗脱方式可分：多肽等度洗脱色谱仪和多肽梯度洗脱色谱仪。 5、按固定相性质可分：硅胶固定相
多肽电泳仪分类
多肽电泳仪分类有多种。 1、按分离原理可分：多肽色谱电泳仪、多肽区带电泳仪、多肽凝胶电泳仪和多肽等电聚焦电泳仪等。 2、按作用可分：多肽定量分析电泳仪和多肽定性分析电泳仪。 3、按产地可分：国产多肽电泳仪和进口多肽电泳仪。 4、按应用范围可分：专用型多肽电泳仪和普通型多肽电泳仪。 5、按
多肽电泳仪分类
多肽电泳仪分类有多种。 1、按分离原理可分：多肽色谱电泳仪、多肽区带电泳仪、多肽凝胶电泳仪和多肽等电聚焦电泳仪等。 2、按作用可分：多肽定量分析电泳仪和多肽定性分析电泳仪。 3、按产地可分：国产多肽电泳仪和进口多肽电泳仪。 4、按应用范围可分：专用型多肽电泳仪和普通型多肽电泳仪。 5、按
多肽合成仪时代分类
多肽合成仪的问世大大促进了多肽科学的发展。反过来，随着多肽科学的发展，科学家也对合成仪提出了更高的要求，从而带动了合成仪的发展。目前多肽合成仪品种繁多，从合成量上分，可分为微克级的，毫克级的，克级的和公斤级的；从功能上分，可分为研究型的，小试型的，中试型的，普通生产型的和GMP生产型的；从自动化程
功能研究/多肽合成仪
运行原理 多肽合成仪以固相合成为反应原理，在密闭的防爆玻璃反应器中使氨基酸按照已知顺序（序列，一般从C端-羧基端 向 N端-氨基端）不断添加、反应、合成，操作最终得到多肽载体。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并
学术文献/多肽合成仪
1. “Amino Acid Analogs of an Insect Neuropeptide Feature Potent Bioactivity and Resistance to Peptidase hydrolysis”(Multipep automated peptide synthes
多肽的种类有哪些
细胞因子模拟肽 利用已知细胞因子的受体从肽库内筛选细胞因子模拟肽，近年成为国内外研究的热点。国外已筛选到了人促红细胞生成素，人促血小板生成素，人生长激素、人神经生长因子及白细胞介素等多种生长因子的模拟肽，这些模拟肽的氨基酸序列与其相应的细胞因子的氨基酸序列不同，但具有细胞因子的活性，并且具有分
多肽对人体的影响
活性肽主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢，它在人体处于一种平衡状态，若活性肽减少后，人体的机能发生重要变化，对于儿童来说，他的生长、发育变得缓慢，甚至停止，长久下去就形成了侏儒，对成年人或老年人，缺少活性肽后，自身的免疫力就会下降，新陈代谢紊乱，内分泌失调，引起各种疾病的产生，如失眠、
多肽合成仪－现有ZL
对于大学、实验室等科研用户以及需要申报新药的生产企业来讲，使用的合成设备的国际专利号以及规定内容是非常有用的信息。ACT多肽合成仪专利：United States Patent 4746490Activotec合成应用技术专利： IPC8 Class: AC07K104FI USPC Class:
组织多肽抗原的介绍
组织多肽抗原（tissuepolypeptideantigen，TPA）是一种胎儿抗原，见于增殖旺盛的组织。正常组织中含量甚微。TPA被细胞角蛋白8、18和19的抗体所识别。已分离出具有TPA免疫反应的不同蛋白质，分子量为20～45kD。TPA与某些细胞分裂素、细胞骨架蛋白有广泛的共源性，当细胞
肽的应用多肽疫苗
多肽疫苗与核酸疫苗是2013年疫苗研究领域内较受重视的研究方面之一，2013年世界上对病毒多肽疫苗进行了大量的研究和开发。如1999年美国NIH公布了两种HIV-I病毒多肽疫苗对人体进行的临床试验结果；国外学者从丙肝病毒（HCV）外膜蛋白E2内筛选出一种多肽，它可刺激机体产生保护性抗体；美国正在开发