速率区带离心法|你的分离纯化方法选对了吗?
密度梯度离心(isodensity centrifugation method)又称为区带离心。该方法的优点是可以同时使样品中几种或全部组分分离,具有良好的分辨率,分离效果好,可一次获得较纯组分。缺点是离心时间较长,需制备梯度液,操作要求高。按照离心分离原理,密度梯度离心又可分为速率区带离心法(rate zonal centrifugation method,R-Z)和等密度离心法 (isopycnic centrifugation method)。速率区带离心也可称为等区密度离心,是根据样品中不同组分粒子所具有的不同的体积大小和不同的沉降系数将混合样品进行离心分离提纯。离心时将需要分离的样品溶液置于由密度梯度材料(如蔗糖、氯化铯 (CsCI)、溴化钠等)形成的梯度液柱上面,样品粒子的密度必须大于梯度液柱中任一点的密度,否则无法得到理想的区带离心效果。离心时,混合样品中不同的组分将在梯度液柱的不同位置分别形成各自的......阅读全文
细胞分离纯化—Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞
实验方法原理常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077±0.001 的 聚 蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,水性高,平均分子量为400000,当密度为1.2 g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法(以下简称等密度区带离心法)是不同颗粒存在浮力差时,在离心力作用下,颗粒向下沉降或向上浮起,一直沿梯度移动到与其密度恰好相等的位置上即等密度点,形成区带而分离的方法。区带的位置和形状均不受离心时间的影响,体系处于动态平衡。 一、等密度区带离心法依据的
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法(以下简称等密度区带离心法)是不同颗粒存在浮力差时,在离心力作用下,颗粒向下沉降或向上浮起,一直沿梯度移动到与其密度恰好相等的位置上即等密度点,形成区带而分离的方法。区带的位置和形状均不受离心时间的影响,体系处于动态平衡。 一、等密度区带离心法依据的原理
细胞的离心分离基础和分离实例(一)
利用细胞的特性[尺寸、密度、电特性、表面(抗原)性质,光散射特性等等]可以用各种方法分离和纯化细胞。离心分离是利用不同尺寸和密度的细胞在离心场中沉降行为的不同,从组织匀浆或血液中分离纯化的技术。用离心技术分离和纯化细胞主要依赖的方法是差分离心、速率-区带密度梯度离心、等密度离心和利用特殊转头的细胞浮
测量电流的方法你做对了吗?
电流的准确测量对测试结果至关重要,但想要准确测量电流就需要选用合适的电流探头与正确的测试方法。本文跟您说说电流测量那些事儿,并带您了解ZLG致远电子的测试方案。在日常的计量测试工作中,电流是一个相当重要的测量值。和使用采样电阻产生压降的方式测量电流相比,电流探头只需把导线完全绕在探头磁芯上就可以实现
超速离心法纯化病毒实验——差速离心法
实验方法原理不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别,沉降速度差别(相差)在一个或几个数量级的粒子,可用本法分离提取。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒无仪器、耗材差速离心机实验步骤将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬
超速离心机的速度区带(或速度梯度)离心法介绍
本法是将样品放在一个连续的密度梯度液体上,通过离心,大颗粒沉降快,小颗粒沉降慢。经过一段时间,相同的颗粒就在同一深度 形成一条带子,因此把各种组份分开来。它适用于分离密度相同、而大小不同的物质,如不同的蛋白质组份密度都差不多,但分子量不一样,用本法很容易将其分开。但对密度不同、大小类似的物质则
细菌分离纯化的详细方法
平板划线分离,在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。稀释倒平板法:先把微生物悬液作一系列的稀释,分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中
细菌分离纯化的详细方法
平板划线分离,在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。稀释倒平板法:先把微生物悬液作一系列的稀释,分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中
常用的分离与纯化方法
稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备,
肠激酶的分离纯化方法
与大多蛋白的分离纯化方法类似, rEK可通过硫酸铵沉淀、DEAE柱、凝胶层析和透析等方法得到纯品, 另外, 运用组氨酸 (Histidine, His) 在蛋白末端进行标记, Nickel金属螯合柱亲和纯化这种低成本高效率一步分离蛋白的方法, 也正广泛地运用到rEK的分离纯化, 其收率可达50%以上
细菌分离纯化的详细方法
平板划线分离,在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。稀释倒平板法:先把微生物悬液作一系列的稀释,分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中
酶的分离纯化方法简介
酶的分离纯化方法简介生物细胞产生的酶有两类:一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶,称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶,如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶,就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高,容易得到;另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外,而在细胞内起催化作用,称为细胞内酶,
细菌分离纯化的详细方法
平板划线分离,在平板培养出单个细菌菌落后可以做镜检观察。稀释倒平板法:先把微生物悬液作一系列的稀释,分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中
羧肽酶的分离纯化方法
实验概要本实验以面包酵母为初始材料,制备了高纯度羧肽酶Y,并对羧肽酶Y的生化性质进行了检测。实验原理羧肽酶Y(Carboxypeptidase Y)是由面包酵母中分离得到的一种蛋白水解酶,它对肽和蛋白质羧基末端的各种氨基酸(包括脯氨酸)具有广泛的水解能力,因此该酶已成为C末端分析中常用的一种工具
超速离心分离技术密度梯度离心法
密度梯度区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此方法主要依据颗粒与介质间的密度差(ρ-ρ0)不同进行分离的。适用于那些沉降系数相差不大而密度值却有明显差别的颗粒,也就是那些S值相近而ρ值相远的颗粒。惰性梯
柱离心法纯化质粒DNA
实验原理1. 离心柱结构:特殊硅基质吸附材料,特异性吸附DNA,而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下,核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜,以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列,形成了疏水环境。在此环境中,核酸与硅胶膜能有效结合,而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不
柱离心法纯化质粒DNA
实验概要本实验介绍了柱离心法纯化质粒DNA的原理及操作流程。实验原理1. 离心柱结构:特殊硅基质吸附材料,特异性吸附DNA,而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下,核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜,以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列,形成了疏水环境。在此环境中
你的-WB-内参选对了么?
你的 WB 内参选对了么? 关键词: 科研 WB 内参 2019-08-14 17:00 来源:CST 点击次数:19 要想底气十足地秀
分离纯化常用的色谱分离方法有哪些
1、色谱方法根据分离机制的不同可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶过滤(分子筛)色谱和亲和色谱等。2、(1)吸附色谱法是指混合物随流动相通过吸附剂时,由于该吸附剂对不同物质有不同的吸附力而使混合物分离的方法。(2)分配色谱系法是利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。(3)
分离纯化蛋白质的分离方法介绍
* 透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 * 超滤法,应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜,达到浓缩蛋白质溶液的目的。 *丙酮、乙醇等有机溶剂沉淀法,可破坏蛋白质的水化层,在0~4℃低温下,使蛋白质沉淀。环境温度高等不良因素影响下,有
分离纯化常用的色谱分离方法有哪些
1、色谱方法根据分离机制的不同可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶过滤(分子筛)色谱和亲和色谱等。2、(1)吸附色谱法是指混合物随流动相通过吸附剂时,由于该吸附剂对不同物质有不同的吸附力而使混合物分离的方法。(2)分配色谱系法是利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。(3)
超速离心法纯化病毒实验——界面离心分离法
实验方法原理离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒蔗糖溶液仪器、耗材离心机实验步骤(1) 取浓缩后的病毒悬液 5 ml, 加入 1/5 或 1. 66/5 体积的 600 g/L 的蔗糖溶液,使其含蔗糖10%~15%, 摇匀。
蛋白质分离纯化设备的蛋白质的分离纯化方法介绍
一、沉淀法 沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质,进而导致有效成分的溶解度发生变化。 1、盐析法 盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷
立式超高速大容量离心机速率区带离心的特点
根据梯度介质的浓度和颗粒在立式超高速大容量离心机的沉降行为,速率区带离心可分为速率区带离心和等密度区带离心。速率区带离心比差速离心的分辨率高,差速离心一般只能分离样品颗粒s值差别在10倍以上的颗粒,而区带离心不仅可以依据样品颗粒质量大小和s值的差别进行分离,还可以利用样品颗粒的密度和形状分离s值相差
立式超高速大容量离心机速率区带离心的特点
根据梯度介质的浓度和颗粒在立式超高速大容量离心机的沉降行为,速率区带离心可分为速率区带离心和等密度区带离心。速率区带离心比差速离心的分辨率高,差速离心一般只能分离样品颗粒s值差别在10倍以上的颗粒,而区带离心不仅可以依据样品颗粒质量大小和s值的差别进行分离,还可以利用样品颗粒的密度和形状分离
落地式大容量冷冻离心机分离细胞器和细胞膜概述
在细胞生物学研究中,亚细胞的分级分离是zui基础也是zui关键的步骤。研究细胞和细胞结构成分需要分离特定的膜相系统和细胞器,包括细胞膜、高尔基体、内质网、细胞核、线粒体、溶酶体、过氧化物酶体和细胞骨架等,有时还需要分离高尔基体和内质网分泌的囊泡。 为了进一步研究细胞器的
落地式大容量冷冻离心机分离细胞器和细胞膜概述
在细胞生物学研究中,亚细胞的分级分离是最基础也是最关键的步骤。研究细胞和细胞结构成分需要分离特定的膜相系统和细胞器,包括细胞膜、高尔基体、内质网、细胞核、线粒体、溶酶体、过氧化物酶体和细胞骨架等,有时还需要分离高尔基体和内质网分泌的囊泡。为了进一步研究细胞器的核膜,需要将已分离的细胞器进一步破碎和分
酶的分离纯化方法介绍2
4.泡沫分离原理:将气体通入含多种组分的溶液中,由于这些组分的表面活性由差异,因此在溶液的表面,某些组分将形成泡沫,泡沫的稳定性取决于操作条件及溶液的生物学特性。泡沫中含有更多的表面活性成分,故泡沫的组分种类及其含量与溶液中的不相同。这样,溶液中的组分舅得以分离。蛋白质较易吸附与气液界面,这有利于其
酶的分离纯化方法介绍1
生物细胞产生的酶有两类:一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶,称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶,如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶,就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高,容易得到;另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外,而在细胞内起催化作用,称为细胞内酶,如柠檬酸、肌苷酸、味