ONPG的概念
（1）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黄色的-硝基酚（O-nitrophenol），在很低浓度下也可检出。（2）试剂：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸馏水中，在加入缓冲液（6.9gNaH2PO4，溶于45ml蒸馏水中，用30%NaOH调整pH为7.0，再加水至50ml）5ml，置于4℃冰箱中保存。ONPG溶液为无色，如出现黄色，则不应再用。（3）方法：从培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20分钟～3小时观察结果。（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30分钟内显色。（5）应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。......阅读全文
细菌鉴定常用的生化试验及其原理
细菌鉴定常用的生化试验及其原理用来鉴定细菌的生化试验有好多种,如碳源代谢试验、氮源代谢试验、碳源氮源利用试验、酶类试验、抑菌试验等。1、碳源代谢试验碳源是为微生物提供碳素来源的物质。用于合成菌体,碳源物质在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的物质(如糖类、脂质、蛋白质等),碳可占一般细菌
细菌鉴定常用的生化试验及其原理
用来鉴定细菌的生化试验有好多种,如碳源代谢试验、氮源代谢试验、碳源氮源利用试验、酶类试验、抑菌试验等。1、碳源代谢试验碳源是为微生物提供碳素来源的物质。用于合成菌体,碳源物质在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的物质(如糖类、脂质、蛋白质等),碳可占一般细菌细胞干重的一半。大多数碳源还能
微生物学检验基本技术（三）
2．葡萄糖代谢类型鉴别试验(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）
366nm大肠埃希氏菌测定荧光观察仪使用方法
366nm检测用紫外灯, 用于水及食物中的微生物检测，如水中大肠埃希氏菌在含MUG 的培养基中培养后，即会产生荧光反应也可用于实验室蛋白质及化合物的检测。 大肠埃希氏菌定义大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-
常用报道基因的功能对比
道基因的对比报道基因作用方式优点缺点氯霉素乙酰基转移酶（CAT；细菌）CAT通过使乙酰基与抗生素共价连接的方式来解除氯霉素的毒性，报道基因实验通常检测n-丁酰基的一半从辅助因子n-丁酰辅酶A转移到具有放射活性的氯霉素上，被修饰的氯霉素的迁移率发生改变，并且能够掺入有机溶剂。没有内源活性；可使用自动化
出口食品中霍乱弧菌检验方法！
出口食品中霍乱弧菌检验方法！ 一、培养基明细： 名称 规格 价格（元） 碱性蛋白胨水（APW） 250g 70 TCBS琼脂 250g 95 三糖铁琼脂（TSI） 250g 85 双糖铁琼脂（KIA） 250g 85 T1N1琼脂 250g 85
微生物实际操作技术问答荟萃（三）
食品伙伴网食品论坛，为食品伙伴网资深网友，leizhw雷质文老师开通了“食品微生物监测技术和实验室质量管理”专栏，开通至今，雷老师一直以自身知识和经验，为广大网友解答食品微生物相关问题，帮助很多网友解决了工作中的问题。 感谢雷老师，今天小编汇总了雷老师专栏中的问题解答给大家参考，希望
微生物检测中常见的生物化学试验
一、糖类代谢试验1.1 糖（醇）类发酵试验不同细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能发酵同样的糖（醇），但其产物也不同，有的产酸产气，有的产酸不产气，可根据这些特点来鉴别细菌。大致可分为：液体发酵管：无糖肉汤或蛋白胨水中，加入1%糖（醇）类指示剂，一支小玻管，经灭菌
微生物检测的生物化学试验汇总！
一、糖类代谢试验 1.1 糖（醇）类发酵试验 不同细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能发酵同样的糖（醇），但其产物也不同，有的产酸产气，有的产酸不产气，可根据这些特点来鉴别细菌。 大致可分为： 液体发酵管：无糖肉汤或蛋白胨水中，加入1%
紫外可见分光光度计检测食品中的酶活性
酶的积极作用我们要加强，在食品加工过程中添加酶制剂，使其作用充分发挥;消极作用我们要尽量避免，可以通过加热等方法将酶灭活，消除其不利影响。 为了将酶更好地应用于食品加工，研究酶的性质是十分必要的。而紫外可见分光光度法是研究酶性质的重要方法之一。下面我们来介绍用紫外可见分光光度计测定酶活的具
细菌室操作规程（十）
弧菌属 常规鉴定 虽然弧菌属内包含的菌种较多，但临床实验室常见到12个菌种，其中具有明确致病作用的有霍乱弧菌、副溶血弧菌、河弧菌、拟态弧菌等。各种弧菌的鉴别特征见表5—3—36。 弧菌的鉴定分两步，首先应与相近的菌属区别，定属后再做种的鉴定。 1. 与相似的菌属区别：弧菌属归弧菌科。同科中还有气单
紫外可见分光光度计在食品酶分析中的应用
紫外可见分光光度法测定酶活： 1. β一半乳糖苷酶 β一半乳糖苷酶，又称乳糖酶(Lactase)。能水解乳糖来降低乳制品的乳糖含量，从而提高乳制品的可消化性，用于低乳糖牛奶和非结晶型浓缩牛奶的生产及奶酪风味的改变，同时还可用于生产低聚半乳糖。 【酶活测定】以ONPG为底物测定
紫外可见分光光度计检测食品中的酶活性
酶在食品加工中的作用就像一把双刃剑，我们要趋利避害。酶的积极作用我们要加强，在食品加工过程中添加酶制剂，使其作用充分发挥;消极作用我们要尽量避免，可以通过加热等方法将酶灭活，消除其不利影响。为了将酶更好地应用于食品加工，研究酶的性质是十分必要的。而紫外-可见分光光度法是研究酶性质的重要方法之一。下面
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用
一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内，得到包含 RNA 质粒的细胞，再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库（杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性，与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白
致病性弧菌及检测
一、致病性弧菌的流行病学1、致病性 在众多的弧菌之中，致病性差距很大。O1型霍乱弧菌被WHO定为国际检疫菌，而同时有许多种和生物型根本不具致病性。生物分类学上的霍乱弧菌有许多血清型致病性很弱、甚至不具致病性。 1995年《美国临床微生物手册》第六版明确了弧菌属的致病菌为12种，它们的名称及致病
埃希氏大肠菌及检验
一、定义： 大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此
致病性弧菌及检测
一、致病性弧菌的流行病学1、致病性 在众多的弧菌之中，致病性差距很大。O1型霍乱弧菌被WHO定为国际检疫菌，而同时有许多种和生物型根本不具致病性。生物分类学上的霍乱弧菌有许多血清型致病性很弱、甚至不具致病性。 1995年《美国临床微生物手册》第六版明确了弧菌属的致病菌为12种，它们的名称及致病
埃希氏大肠菌及检验
一、定义： 大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用实验
酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用实验
实验方法原理 酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。试剂、试剂盒 YPD 和 SD 培养基鲑
微生物鉴定之生化实验大全
不同的细菌具有各自的独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling & Gottlieb《Internatio
常用试剂和培养基
Sterile water bottles200 ml, 500 ml, or 950 ml water. Autoclave.0.05 M CaCl2 (per 200 ml)CaCl2·2 H2O 1.5 g Add 198 ml water.Autoclave.0.5 M CaCl2 (p
细菌的临床检验
临床细菌学检验在检验医学中具有特殊的位置，主要表现在它的高风险性（如脑脊液培养结果正确与否直接关系到患者的生死）、高干扰性（如标本采集、运送等过程中的诸多因素都会干扰检出率和正确率）、高技术性和高严谨性（准确表达、报告和解释结果直接影响治疗的成败）。因此，细菌培养和药敏试验等属于高度复杂的试验范
转染和转染效率测定步骤
LIPOFECTAMINE 2000转染试剂转染步骤此实验步骤设计用来进行24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。2. 对于每孔细
微生物学检验基本技术(1)
第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查 由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，
微生物学检验基本技术(1)
随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感
微生物学检验基本技术(1)
第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查 由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电